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不同基因型甘蔗甘露糖抗性筛选体系的建立: 2010年; 为明确不同基因型甘蔗再生过程中对甘露糖的敏感性,为甘蔗基因工程育种中转化子的离体筛选提供技术。使用甘露糖作为筛选底物,对甘蔗品种‘ROC22’、‘桂糖94-119’和‘桂糖96-44’外植体的再生进行研究。建立3个基因型甘蔗的甘露糖抗性筛选体系,在甘蔗愈伤组织继代增殖、分化和小苗生根3个阶段进行抗性筛选时,甘露糖占总糖的比例分别是60%、60%～70%和30%。通过统计分析,明确了不同再生阶段甘露糖对3个甘蔗基因型的影响不同,继代增殖阶段基因型间无明显差异,但在分化和生根阶段达极显著差异。; 高世武许莉萍陈如凯林庆良; 关键词：甘蔗基因型甘露糖统计分析

甘露糖筛选系统的建立及在甘蔗转基因中的应用被引量：4: 2010年; 用甘露糖作为筛选底物,对甘蔗品种福农95-1702外植体的再生进行研究,建立福农95-1702的甘露糖筛选体系;在甘蔗愈伤组织的继代、分化、生根三个阶段进行抗性筛选时,甘露糖占总糖的比例分别是60%、60%和30%。在以上筛选体系的基础上,将福农95-1702作为受体材料,通过基因枪轰击法,将含有cryIA(c)抗虫基因的基因表达盒与筛选标记基因(pmi)进行共转化,通过甘露糖筛选,最终获得26株抗性再生植株,经PCR检测,其中4株呈阳性。初步说明cryIA(c)基因已经整合到福农95-1702的基因组中,获得了4株转基因阳性甘蔗植株。; 高世武阙友雄郭晋隆许莉萍陈如凯; 关键词：甘蔗甘露糖基因枪共转化

甘蔗硫氧还蛋白基因ScTRXh1的克隆及表达特性分析被引量：5: 2012年; 硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)家族是一类古老的小分子蛋白,已被证明在维持生物体内氧化还原平衡、调控生物信号传导和应答多种非生物逆境胁迫中起重要作用。本研究从甘蔗(Saccharumcomplex)茎全长cDNA文库中分离克隆了一个甘蔗硫氧还蛋白h型基因的cDNA全长序列,命名为ScTRXh1。ScTRXh1全长786bp,5'非翻译区长96bp,3'非翻译区长306bp,开放读码框长384bp,共编码127个氨基酸。实时荧光定量PCR分析表明,甘蔗中ScTRXh1基因的表达在处理前期分别受到ABA的抑制和H2O2的促进;PEG和NaCl胁迫处理对ScTRXh1基因表达的影响不显著;甘蔗中ScTRXh1基因的表达受SA的诱导而显著上调,其表达丰度在处理周期内维持在对照的6倍以上。以上结果表明ScTRXh1基因参与了甘蔗对SA、ABA和氧化胁迫等逆境因子的应答过程。甘蔗不同组织器官的定量表达结果分析表明,ScTRXh1基因在甘蔗根、茎和芽中的相对表达丰度高,分别是其在叶中的33倍、17倍和12倍以上。本研究结果为后续TRX基因在甘蔗抗逆相关机理研究和抗逆育种中的应用奠定了基础。; 郭晋隆郑蕊凌辉傅华英苏亚春王恒波; 关键词：甘蔗硫氧还蛋白克隆基因表达实时荧光定量PCR

影响根癌农杆菌EHA105感受态细胞转化效率因素的研究被引量：2: 2012年; 通过对EHA105菌株48 h不间断培养观察,绘制出其生长曲线图;同时用不同浓度的CaCl2溶液分别制备根癌农杆菌EHA105的感受态细胞,在转化过程中用不同的温度进行热激处理,统计分析阳性转化子个数,明确了采用冻融法将外源DNA导入农杆菌EHA105时的几个影响因素的参数。结果表明,当OD600值在1.0～1.5之间时,根癌农杆菌EHA105正处在对数生长期,活力最强;制备感受态细胞时,CaCl2溶液的浓度在6～10 mmol.L-1之间,无显著差异,但以10 mmol.L-1效果最佳,转化率达5.322×106.μg-1,热激处理温度在20～37℃之间均无显著差异,但37℃处理时转化率最高,达5.550×106.μg-1。; 高世武郭晋隆阙友雄许莉萍杨颖颖陈如凯; 关键词：转化率

甘蔗胚性愈伤组织发生与发育的组织细胞学观察被引量：7: 2010年; 运用石蜡切片染色和显微技术相结合的方法,对FN15和ROC22两个不同基因型甘蔗品种,在心叶诱导愈伤组织和愈伤组织继代过程的不同阶段,对愈伤组织胚性细胞、体细胞胚和芽原体的发生与发育进行了研究。结果表明,愈伤组织来源于切口部位、韧皮部、维管束鞘或外皮层具有活力潜能的薄壁细胞,此种愈伤组织多数为胚性细胞。基因型FN15可从心叶直接诱导出体细胞胚,而基因型ROC22则需继代培养后才发生体细胞胚。从愈伤组织表型分析,浅黄色愈伤组织多数为胚性细胞;金黄色和乳白色愈伤组织多数是已分化的各种类型的体胚;褐色愈伤组织,只有极少量细胞具有分裂能力,最终也能分化出小芽;透明状愈伤组织一般无细胞质,也不具分裂能力。因此应选择浅黄色的愈伤组织作为转基因准备受体。; 林庆良许莉萍高世武傅华英; 关键词：细胞组织学胚胎发生愈伤组织甘蔗

基因枪法获得转cry1Ac基因甘蔗的研究被引量：6: 2011年; 根据定向克隆原则,以pGreenⅡ0229为载体骨架,cry1Ac为目的基因,bar为筛选标记基因,构建了大小为8602bp的植物表达载体pUBCG0229-cry1Ac。酶切结果表明,构建的载体pUBCG0229-cry1Ac结构完全正确。用基因枪轰击法将pUBCG0229-cry1Ac质粒DNA转化甘蔗(Saccharum Complex)品种福农95-1702和桂糖94-119的胚性愈伤组织,使用PPT(phosphinothricin)对轰击后的材料进行继代、分化和生根筛选,移栽成活后使用Basta溶液喷洒进行初步筛选,共获得86株抗性植株,通过PCR检测、Dot-Southern检测及PCR产物测序,证明已将cry1Ac基因整合到其中22株甘蔗基因组中。; 高世武郭晋隆许莉萍陈如凯傅华英; 关键词：甘蔗 CRY1AC基因 BAR基因基因枪

Cry2A基因植物表达载体构建及其转化子生长曲线的建立: 2010年; 根据定向克隆原则,以pCAMBIA2301为载体骨架,Cry2A基因为目的基因,构建了大小为15354 bp的植物表达载体p2AST2301。新载体带有抗虫基因Cry2A和筛选标记基因NPTⅡ,适合通过农杆菌进行遗传转化,并以抗生素G418为筛选底物。同时将新载体转化根癌农杆菌EHA105,获得了用于植物遗传转化的工程菌,并且明确了工程菌D600 nm值在1.0-1.6之间活力最强。; 高世武郭晋隆许莉萍杨颖颖陈如凯; 关键词：根癌农杆菌

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