国家自然科学基金(39470733)
- 作品数：11 被引量：30H指数：3
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- 白介素-4基因修饰对儿童肝母细胞瘤多药耐药的逆转及其机制研究被引量：2
- 2001年
- 目的 探讨白介素 4 (IL 4 )基因修饰对儿童实体瘤多药耐药 (MDR)的逆转作用及可能机制。方法 用逆转录病毒载体将人IL 4基因导入人肝母细胞瘤细胞系HepG2 ,采用MTT生物活性法检测瘤细胞对化疗药物的敏感性。间接免疫荧光分光光度分析瘤细胞P 糖蛋白 (P gp)的表达率。微量荧光分光光度法分析瘤细胞内阿霉素 (ADM)聚集量。结果 IL 4基因修饰显著降低瘤细胞对种化疗药物的半数抑制浓度 (IC5 0 ) ,表现出MDR逆转效应 (耐药逆转倍数在 6～ 32倍数间 )及明显增加化疗药物在瘤细胞内聚集 ,同时IL 4基因修饰瘤细胞P gp阳性表达率 (5± 0 6 % )较野生型及空载体修饰细胞 (98 5± 0 5 %、97 0± 1 0 % )明显减低。IL 4基因修饰对瘤细胞的MDR逆转作用可为PKC激活剂TPA所阻断。IL 4基因修饰瘤苗及其培养上清与野生型细胞共培养 ,也可使野生型瘤细胞产生MDR逆转效应。结论 IL 4基因修饰瘤苗可通过自分泌、旁分泌形式逆转瘤细胞MDR ,此作用可能与其抑制PKC活性及下调P
- 付劲蓉李成荣杨锡强周雅德
- 关键词：白细胞介素4基因治疗法儿童肝母细胞瘤MDR
- 人IL-4基因修饰诱导肝母细胞瘤细胞凋亡及分化的研究被引量：3
- 2003年
- 目的 研究人白细胞介素 4(IL 4)基因修饰对肝母细胞瘤细胞凋亡及分化的影响及可能机制。方法 以逆转录病毒为载体将人IL 4基因导入人肝母细胞瘤细胞系 (HepG2 )细胞。台盼蓝拒染、瑞氏染色、放射免疫测定、流式细胞仪细胞周期分析、原位杂交等方法检测人IL 4基因修饰后细胞形态、甲胎蛋白合成以及原癌基因c fos、c jun、c myc表达的变化。流式细胞仪AnnexinⅤ /PI双染色法及间接免疫荧光染色法检测凋亡细胞及凋亡调控基因p5 3、bcl 2的蛋白表达。结果 (1)人IL 4基因修饰较空载体修饰及野生型HepG2细胞的细胞周期发生G0 /G1期阻滞 ,甲胎蛋白分泌量及原癌基因c fos、c jun、c myc表达降低 (P <0 .0 0 1)。细胞在形态及功能上趋向正常肝细胞转化 ;(2 )较空载体修饰及野生型HepG2细胞 ,IL 4基因修饰后部分细胞形态上出现核固缩等典型凋亡细胞的特征 ,流式细胞仪亦检测到 18.5 %± 4.7%的凋亡细胞 ;(3)人IL 4基因修饰增加p5 3而抑制bcl 2表达 (P <0 .0 5 )。结论 人IL 4基因修饰可诱导肝母细胞的凋亡及分化 ,诱导凋亡细胞可能与上调p5 3蛋白及抑制bcl 2蛋白表达有关。
- 付劲蓉李成荣周玉峰周雅德
- 关键词：基因修饰肝母细胞瘤细胞凋亡细胞分化
- 白细胞介素4诱导人肝母细胞瘤系细胞分化的实验研究被引量：3
- 2000年
- 目的 研究人白细胞介素 4(IL 4)对肝母细胞瘤细胞系 (HepG2 )分化诱导作用及诱导分化过程中端粒酶活性的变化及可能机制。方法 用锥虫蓝拒染活细胞染色法、流式细胞仪细胞周期分析、瑞氏染色形态学检测、放射免疫测定、原位杂交等方法检测IL 4处理前、后细胞的增殖、形态、甲胎球蛋白合成及原癌基因c fos、c myc表达情况。聚合酶链反应结合酶联免疫吸附实验 (PCR ELISA)半定量检测瘤细胞端粒酶活性。用无血清培养使细胞周期同步于静止期 (G0 G1 )的方法 ,探讨端粒酶在瘤细胞被诱导分化过程中的活性变化与细胞周期时相的关系。结果 IL 4处理后HepG2 细胞生长速度减慢 (n =10 ,F =16 .7,P <0 .0 5 ) ,c fos和c myc基因表达积分从 (2 79± 2 1) %、(2 10±39) %降至 (38± 8) %及 (16± 5 ) % (n =10 ,t值分别为 13 6、8 4,P均 <0 .0 1)。G0 G1 细胞由 (4 5 .4± 2 .7) %增至 (5 7.8± 3 .3) % (n =10 ,t=4.2 ,P <0 .0 5 ) ;细胞形态趋向正常肝细胞形态转化 ;2 4h每 10 6个肿瘤细胞甲胎球蛋白分泌量从 (15 .6± 0 .7)ng降至 (4 .5± 1.2 )ng(n =10 ,t=9.8,P <0 .0 5 )。同时还发现IL 4处理后 48h端粒酶活性即见明显下降 ,A值 (代表端粒酶活性 )即由处理前的 1.2降至0 .7(t=8.4,P <0 .0 1) 。
- 付劲蓉李成荣杨锡强周雅德
- 关键词：白细胞介素4细胞分化
- IL-4基因转染诱导肝母细胞瘤分化及抑制端粒酶活性被引量：4
- 2000年
- 目的 研究人白细胞介素 4(human interleukin- 4,h IL- 4)基因转染对肝母细胞瘤细胞的诱导分化和对端粒酶活性的影响。方法 以逆转录病毒载体 (PL- IL- 4- SN)将 h IL- 4基因导入人肝母细胞瘤细胞系 Hep G2细胞。台盼蓝拒染、瑞式染色、放射免疫测定、流式细胞仪细胞周期分析、原位杂交、PCR-EL ISA等方法检测基因转染后细胞形态、甲胎蛋白合成、原癌基因的表达及端粒酶活性变化。结果 转染IL- 4基因后 Hep G2细胞生长速度减慢 (P<0 .0 5 ) ,细胞周期发生 G0 /G1 期阻滞 ,细胞形态趋于向正常肝细胞转化。甲胎蛋白分泌量 (3.2 6± 1.43ng· 10 6 cells- 1 · 2 4h- 1 )较未转基因细胞 (15 .6± 0 .6 7ng.10 6 ·cells- 1· 2 4h- 1 )降低 (P<0 .0 5 ) ;原癌基因表达及端粒酶活性降低 (P<0 .0 1)。结论 h IL- 4基因转染可诱导肝母细胞瘤分化及下调端粒酶活性。
- 付劲蓉李成荣杨锡强李欣
- 关键词：基因转染肝母细胞瘤端粒酶IL-4
- IL—4基因修饰逆转肝癌细胞多药耐药
- 2000年
- 目的 探讨IL—4基因修饰对肝细胞癌多药耐药(MDR)的逆转作用及可能机制。方法 用逆录病毒载体将IL—4基因导入人肝癌细胞细胞系HepG2,采用MTT生物活性法检测药物敏感性。间接免疫荧光染色流式细胞仪分析P—糖蛋白(P—gP)。微量荧光分光光度法分析癌细胞内ADM聚集量。结果 IL—4基因修饰显著提高癌细胞对多种化疗药物的敏感性(耐药逆转倍数在6～32倍间)及增加ADM在癌细胞内聚集;P—gP阳性表达率(5％±0.6％)较野生型及空载体修饰细胞(98.5％+0.5％)明显降低。逆转作用可为PKC激活剂TPA所阻断。IL—4基因修饰瘤苗及其培养上清与野生型细胞共培养,也可使野生型瘤细胞产生逆转效应。结论 IL—4基因修饰可通过自分泌、旁分泌形式逆转肝癌细胞MDR,此作用可能与其下调P—gP表达及抑制PKC活性有关。
- 付劲蓉李成荣周雅德汤为学
- 关键词：IL-4基因修饰肝癌细胞系HEPG2多药耐药性
- 重组人白细胞介素4对白血病细胞HL-60/VCR的多药耐药逆转研究被引量：10
- 2000年
- 付劲蓉李成荣杨锡强王莉佳
- 关键词：白血病HL-60多药耐药
- 白细胞介素4基因修饰抗白血病效应的体外研究被引量：1
- 2000年
- 目的 观察白细胞介素 4(IL 4)基因修饰对白血病细胞株HL 6 0和K5 6 2生长及其诱导的T淋巴细胞功能的影响。方法 采用逆转录病毒载体pLXSN将IL 4基因导入上述细胞株。以野生型和载体修饰的相应细胞为对照 ,检测了IL 4基因修饰HL 6 0和K5 6 2细胞 (每株细胞检测 12孔 )的增殖、死亡特性及其诱导的T淋巴细胞增殖反应 ;用逆转录聚合酶链反应技术 (RT PCR)检测T淋巴细胞产生IL 2、IL 6和干扰素γ(IFN γ) ;用 51铬 ( 51Cr)释放法检测淋巴杀伤细胞活性。结果 HL 6 0和K5 6 2表达IL 4的最高水平可达 6 5 .4pg/ ( 10 6细胞·2 4h)和 10 6 .6pg/ ( 10 6细胞·2 4h) ,IL 4基因修饰的HL 6 0和K5 6 2细胞增殖反应明显受抑制 ,K5 6 2培养过程中死亡细胞增多 ;白血病细胞所诱导的T淋巴细胞增殖反应 ,产生细胞因子能力及细胞毒性T细胞 (CTL)杀伤活性均明显高于对照组。结论 IL 4基因修饰不仅可直接抑制HL 6 0、K5 6 2细胞的生长 ,而且可能通过促进T淋巴细胞功能及CTL杀伤活性控制其生长。
- 赵晓东李成荣杨锡强蒋利萍李永柏王莉佳
- 关键词：白细胞介素4白血病HL-60细胞基因修饰
- 自分泌IL-4对K_(562)细胞诱导的CTL杀伤活性的影响被引量：1
- 2000年
- 探讨ＩＬ－４基因修饰对Ｋ５６２细胞诱导的肿瘤特异性ＣＴＬ杀伤活性的促进作用及可能机理。采用逆转录病毒体ＬＸＳＮ将ＩＬ－４ｃＤＮＡ导入Ｋ５６２细胞，经Ｇ４１８筛选后获得表达ＩＬ－４蛋白的Ｋ５６２克隆。以野生型和载体修饰的相应细胞为对照，检测了ＩＬ－４基因修饰Ｋ５６２细胞诱导的Ｔ细胞增殖反应，用５１铬（５１Ｃｒ）释放法检测ＣＴＬ杀伤活性。结果发现ＩＬ－４基因修饰的Ｋ５６２细胞诱导的Ｔ细胞增殖反应及ＣＴＬ杀伤活性均明显高于对照组。提示ＩＬ－４基因修饰可能通过上调Ｔ细胞功能促进肿瘤特异性ＣＴＬ杀伤活性。
- 赵晓东李成荣杨锡强蒋利萍王莉佳
- 关键词：IL-4基因治疗CTL
- 外源性IL-4基因表达对K562细胞增殖及死亡的影响
- 2000年
- 目的 :观察外源性IL 4对K5 6 2增殖及死亡的影响。方法 :用逆转录病毒载体将IL 4cDNA导入K5 6 2细胞 ,检测其增殖反应 ,用流式细胞仪及DNA片段凝胶电泳检测细胞增殖周期及凋亡情况 ,用台盼蓝排除法计数死亡细胞。结果 :高表达IL 4的K5 6 2细胞增殖反应明显低于低表达株、亲代K5 6 2株 ;前者培养过程中死亡细胞百分率明显升高且可被IL 4单克隆抗体阻断 ,但其自发凋亡细胞数及增殖周期均无明显改变。结论 :外源性IL 4基因表达产物可诱导K5 6 2细胞死亡 。
- 赵晓东李成荣杨锡强李欣黄贵清蒋利萍
- 关键词：IL-4基因治疗白血病细胞增殖K562
- IL-4基因修饰增强脑胶质瘤细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性机制的探讨被引量：2
- 2002年
- 目的 进一步探讨白细胞介素 4(IL 4)基因修饰瘤苗增强细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)杀伤活性的机制。方法 通过逆转录病毒载体PL IL 4 SN将人IL 4基因导入神经胶质瘤系SHG44细胞 ,以IL 4基因修饰瘤苗和野生型瘤细胞作刺激细胞诱导CTL反应 ,通过流式细胞仪检查瘤细胞表面分子的表达。结果 (1 )IL 4基因修饰诱导瘤细胞表达MHC Ⅱ类抗原、B7 1及ICAM 1等免疫刺激分子 ,对MHC I类抗原表达无影响 ,其瘤苗诱导的CTL杀伤活性为野生型瘤细胞的 7倍 (P <0 0 1 )。(2 )加入抗IL 4单抗可完全阻断IL 4诱导的细胞表面分子的表达 ,IL 4基因修饰瘤苗诱导CTL反应时培养上清可检测到大量IL 2的产生。抗IL 4或抗细胞表面分子单抗可降低IL 2产生及抑制CTL反应。结论 IL 4基因修饰可能是通过诱导MHC Ⅱ类抗原等表面分子表达 ,促进IL
- 李成荣付劲蓉
- 关键词：脑胶质瘤白细胞介素4T淋巴细胞基因修饰瘤苗
