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一种改良的纤维平板法被引量：3: 2012年; 介绍一种改良的用以快速地定性和半定量检测纤溶活性蛋白的纤维平板法.对该方法中的几个关键因素作了详细的研究和探讨.纤维平板中纤维蛋白原和纤溶酶原的浓度对裂解面积不产生任何影响,但是纤维蛋白原的浓度会对裂解圈的观察产生影响,纤维蛋白原浓度低于0.2 mg/mL时会使背景色过淡而不能清晰地观察到裂解圈.尿激酶浓度在2～250 mU/μL范围时,尿激酶浓度的对数和裂解圈相互垂直的两条直径乘积的对数之间存在明显的线性关系.在本实验设计方案下,尿激酶的最佳使用浓度为10～20 mU/μL.同时,本文还探讨了纤维平板中纤溶酶原的去活条件,当琼脂纤维平板凝固后很难完全去活纤溶酶原,但是,在琼脂纤维蛋白原混合物凝固前于95℃持续温浴40 min,则能彻底去活纤维蛋白原中残留的纤溶酶原.; 黄明星叶韵谭竹钧韩雅莉; 关键词：纤维蛋白原纤溶酶原尿激酶

黄粉虫纤溶活性蛋白免疫原性与抗血栓作用的研究被引量：6: 2015年; 为了研究黄粉虫纤溶活性蛋白(Tenebrio Fibrinolytic Proteins,TFP)的免疫原性及其抗血栓作用,本研究将纯化的TFP经皮下注射免疫小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清中的抗体含量及抗体效价;小鼠灌胃TFP后,取血浆检测凝血酶时间(thrombin time,TT)、凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、组织型纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator,t-PA)和其抑制物(plasminogen activator inhibitor,PAI),角叉菜胶使小鼠尾部形成血栓,测量血栓形成长度.结果显示,TFP免疫小鼠后产生特异性抗体且随着免疫次数的增加,抗体含量逐渐升高,末次免疫后产生的抗体效价为1∶640;TFP可以显著延长TT,增强t-PA的活性,抑制PAI的活性,同时显著抑制由角叉菜胶引起的小鼠尾部血栓的形成.这说明TFP具有良好的免疫原性且具有一定的抗血栓作用.; 张冰谭竹钧; 关键词：黄粉虫免疫原性抗血栓

黑蚂蚁纤溶活性蛋白的分离纯化及其性质研究被引量：5: 2015年; 通过硫酸铵分段盐析、DEAE-52离子交换和Sephacryl S-100分子筛层析从黑蚂蚁（Polyrhachis vicina Roger）中纯化到一种纤溶活性蛋白,再通过SDS-PAGE凝胶电泳测定其分子质量,Braford法测定蛋白浓度,蒽酮硫酸法测定其含糖量,纤维蛋白平板法测定其酶活性。并研究温度、pH改变及不同金属离子对其活性的影响。结果显示,分离得到的活性蛋白具有纤溶活性,其分子质量约为25 kD,蛋白浓度为2.8041 mg/mL,糖含量为8.171 4%,酶活力为67.455 2 U/g。研究表明,该活性蛋白最适温度为45℃,最适pH为3.0,pH在4.0-8.0基本稳定,Na^＋、K^＋对其酶活性影响较小,Mg^2＋对该酶纤溶活性有强烈的激活作用,而Zn^2＋、Ba^2＋、Mn^2＋、Ca^2＋等对此酶活力有没明显的抑制作用。; 冼永权谭竹钧韩雅莉; 关键词：分离纯化纤溶活性

黄粉虫胰蛋白酶样酶基因TMTLSP全长cDNA的克隆和序列分析被引量：3: 2012年; 以黄粉虫(Tenebrio molitor)幼虫全RNA逆转录得到的cDNA为模板,参照地鳖(Eupolyphagasinensis)纤溶酶(fibrinolytic enzyme)简并引物,进行温度梯度PCR.以得到的扩增产物为基础,采用RACE得到基因全长cDNA,命名为黄粉虫胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶(Tenebrio molitor trypsin-likeserine protease,TMTLSP).TMTLSP全长869 bp(GenBank No.JN662461),开放阅读框为777 bp,编码258个氨基酸,并具有蛋白酶样特有的起始位点、活性中心预计底物结合位点.经过比对分析,该基因编码的氨基酸序列与赤拟谷盗、谷蠹、光亮扁角水虻、美洲大蠊等多种昆虫的胰蛋白酶或丝氨酸蛋白酶有较高的相似性.本研究将为胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶的提取及研究提供更为广泛的材料及研究依据.; 叶韵韩雅莉黄明星孙建平代春迎林非凡; 关键词：黄粉虫 RACE 克隆

人CYP2E1基因编码蛋白主要特性与结构的生物信息学分析: 2015年; 采用生物信息学方法对人CYP2E1基因编码蛋白质的结构、理化性质、亲疏水性、信号肽、跨膜结构域、亚细胞定位、二级结构、三级结构、酶活性中心等进行预测,并对人和其他6物种的CYP2E1编码蛋白序列进行系统进化分析.研究结果表明,人CYP2E1编码493个氨基酸组成多肽,其相对分子质量约为172386.6,等电点理论值为7.04,分子式为C6778H10986N2074O2429S374.该蛋白定位于细胞膜外,属跨膜蛋白,为疏水性不稳定蛋白;该蛋白二级结构有6个β折叠、6个α-螺旋、6个跨膜结构区和32个转角,该酶活性中心由Asn202残基、Ser298残基及Phe205残基与铁卟啉环构成,CYP2E1蛋白血红素铁和底物催化位点之间的距离在0.3-0.6 nm之间.; 林非凡韩雅莉; 关键词：生物信息学

苦瓜提取物的抗氧化活性研究: 2014年; 探讨了苦瓜提取物的抗氧化活性.采用水杨酸比色法、邻苯三酚自氧化法和DPPH·法,分别研究了苦瓜不同提取物的体外抗氧化活性.实验结果显示苦瓜各提取物对自由基均有较好的清除作用,说明苦瓜各提取物都有一定的抗氧化活性.; 吕雅韩雅莉; 关键词：苦瓜黄酮多糖抗氧化活性清除自由基

黄粉虫纤溶活性基因的克隆及在毕赤酵母中的表达及活性检测: 2017年; 采用PCR技术,以含有TFP(Tenebrio Fibrinolyric Proteins,TFP)c DNA质粒作为模板,扩增出TFP基因片段.将克隆获得的目的基因插入到毕赤酵母表达载体p PIC9K中,经测序无误后,获得重组表达质粒p PIC9K-TFP.将重组表达质粒线性化后电击转化到毕赤酵母GS115中,经筛选并PCR验证获得多拷贝整合型酵母工程菌,对工程菌进行发酵和甲醇诱导表达.阳性样品经纤溶平板实验验证,表明该表达蛋白具有生物活性.; 韩雅莉林非凡林泽飞段雪娟朱晓琳; 关键词：黄粉虫纤溶酶毕赤酵母

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海口市重点科技计划项目(2011-0044)