国家科技重大专项(2013ZX10003006-003-001)
- 作品数：7 被引量：18H指数：3
- 相关作者：张春青邵进士李军丽陈红兵宋庆德更多>>
- 相关机构：西南大学解放军第309医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 环介导等温扩增法在结核病诊断中的应用被引量：2
- 2015年
- 目的研究环介导等温扩增法在不同临床样本中的结核病诊断价值。方法使用环介导等温扩增法检测肺泡灌洗液、局部穿刺液、腹水和脑脊液中的结核分枝杆菌复合群的特异性基因IS1081,并与实时荧光定量PCR进行比较。结果在荷菌量较高的肺泡灌洗液和局部穿刺液中,环介导等温扩增法敏感性比实时荧光定量PCR低(80%vs 92%);在荷菌量极低的腹水和脑脊液中,环介导等温扩增法敏感性比实时荧光定量PCR高(34.6%vs 15.4%),但特异性略有下降(80%vs 93.3%);综合计算所有样本的敏感性,环介导等温扩增法与实时荧光定量PCR无显著差别(56.9%vs 52.9%)。结论环介导等温扩增法具有较高敏感性和特异性,可以用于结核病诊断。
- 杨秉芬王心静蒋静翟斐曹志红程小星
- 关键词：荧光实时定量PCR结核病
- 建立结核分枝杆菌抗原K6IFN-γ ELISPOT用于结核病辅助诊断被引量：4
- 2013年
- 目的:建立结核分枝杆菌抗原K6作为刺激源的IFN-γELISPOT检测方法,并初步评价该方法用于结核病辅助诊断价值。方法:结核病患者和非结核性肺部相关疾病患者外周血单核细胞(PBMC)分别加入预包被ELISPOT板对应孔,分别加入抗原K6、T-SPOT.TB试剂盒抗原A和B,每个PBMC样品设阴性对照孔和阳性质控孔。37℃、5%CO2培养20～24小时,弃细胞,依次加入酶标检测抗体、底物显色获得斑点。ELISPOT读板仪进行斑点计数和分析。结果:K6和T-SPOT.TB试剂盒检测敏感度分别为80.0%和85.9%、特异度分别为83.9%和73.2%,两者比较差异均无统计学意义。K6作为刺激原的IFN-γELISPOT诊断结核病阳性预示值为88.3%,阴性预示值为73.4%。结核病组,抗原B刺激PBMC分泌IFN-γ的细胞斑点数(SFC)平均值分别高于抗原A和K6(P=0.011和P=0.004),抗原A和K6刺激PBMC分泌IFN-γ的SFC平均值比较差异无统计学意义(P>0.05)。非结核性肺部相关疾病组,抗原A、抗原B和K6刺激PBMC分泌IFN-γ的SFC平均值两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:K6可作为结核病IFN-#ELISPOT诊断候选抗原之一。
- 蒋丽气黄香玉陈红兵李静何珂邵进士张春青何秀云
- 关键词：结核病ELISPOTIFN-Γ
- 不同佐剂和免疫途径对结核分枝杆菌多表位融合蛋白TP15免疫原性的影响被引量：1
- 2016年
- 目的探讨不同佐剂和免疫途径对结核分枝杆菌多表位融合蛋白TP15免疫原性的影响。方法制备多表位融合蛋白TP15,分别以MF59和h BCG单独或联合作为佐剂,经皮下或肌肉注射BALB/c小鼠,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗TP15特异性Ig G、Ig G1和Ig G2a抗体,流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞中多功能CD4^+T细胞含量,夹心ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中细胞因子IL-1β和IL-12的含量。结果多表位融合蛋白TP15免疫小鼠只产生抗TP15特异性Ig G和Ig G1抗体,不产生Ig G2a抗体。MF59和h BCG单独或联合作为TP15抗原佐剂,皮下注射和肌肉注射均能显著提高机体抗TP15特异性Ig G、Ig G1和Ig G2a抗体水平,且复合佐剂MF59+h BCG的免疫效果更佳。MF59和h BCG单独或联合作为TP15抗原佐剂,皮下注射较肌肉注射更有利于产生Ig G2a抗体,其中复合佐剂MF59+h BCG疫苗免疫小鼠产生Ig G2a抗体的效果最佳,且Ig G1/Ig G2a值显著低于肌肉注射。MF59和h BCG单独或联合作为TP15抗原佐剂经皮下免疫小鼠,脾淋巴细胞IL-2^+CD4^+T细胞含量增加,IL-10^+CD4^+T细胞含量减少,腹腔巨噬细胞分泌IL-1β和IL-12水平增强。结论 MF59+h BCG复合佐剂诱导Th1型细胞免疫漂移,且皮下注射免疫效果优于肌肉注射。
- 李军丽黄香玉朱传智宋庆德肖漓高钰何秀云
- 关键词：结核病免疫途径
- 水油微球/BCG复合佐剂对结核杆菌融合蛋白PstS1-LEP免疫原性的影响被引量：1
- 2018年
- 目的探讨水油微球与热灭活BCG(heat-killed BCG,HKBCG)或无细胞BCG(acellular BCG,ABCG)复合佐剂对结核杆菌融合蛋白PstS1-LEP免疫原性的影响。方法制备水油微球/HKBCG、水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗,经皮下注射免疫BALB/c小鼠3次,间隔2周,末次免疫后2周采血,处死小鼠并无菌摘脾;ELISA法检测小鼠血清抗Pst S1-LEP的IgG、IgG1和IgG2a抗体,ELISPOT法检测小鼠脾淋巴细胞经PstS1-LEP刺激分泌IFNγ、IL-4和IL-17的斑点形成细胞数(spots forming cell,SFC)。结果水油微球/HKBCG、水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗免疫小鼠诱导Pst S1-LEP特异性IgG、IgG1和IgG2a水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗免疫小鼠的IFNγ-SFC、IL-17-SFC及IL-17-SFC/IL-4-SFC均高于水油微球/HKBCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗,而两种疫苗免疫小鼠的IL-4-SFC、IFNγ-SFC/IL-4-SFC和IFNγ-SFC/IL-17-SFC比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗诱导偏向Th1和Th17型细胞免疫,IFNγ-SFC、IL-4-SFC和IL-17-SFC的两两比值显示,水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗更有利于诱导Th17型细胞免疫漂移。
- 何秀云朱传智李彬钰刘培霞张文慧
- 关键词：蛋白疫苗免疫原性
- 复合佐剂 MF59／hBCG 对结核病蛋白疫苗免疫原性的影响被引量：3
- 2014年
- 目的：探讨复合佐剂[MF59和热灭活BCG（hBCG），MF59/hBCG]对结核分枝杆菌重组融合蛋白PstS1-LEP 免疫原性的影响。方法 BALB/c 小鼠分为6组，1组：MF59＋PstS1-LEP；2组：MF59/hBCG＋PstS1-LEP；3组：hBCG＋PstS1-LEP；4组：MF59；5组：PstS1-LEP；6组：hBCG。分别于第0、2、4周皮下免疫小鼠。末次免疫2周后解剖小鼠，PstS1-LEP体外刺激培养脾细胞和腹腔巨噬细胞。间接ELISA检测血清抗PstS1-LEP抗体，夹心ELISA检测培养上清细胞因子含量。结果1组IFN-γ、IL-1β、IgG、IgG1和IgG2a水平显著高于4组、5组和6组（P＜0.05），IL-2和IL-4水平显著高于4组和6组（P＜0.05）。2组IFN-γ、IL-1β、IL-12、IgG、IgG1和IgG2a水平显著高于4组、5组和6组（P＜0.05），IL-2水平显著高于4组和6组（ P＜0.05）。3组IL-4水平显著高于4组（ P＝0.05），IL-1β水平显著高于4组和5组（ P＜0.05），IgG水平显著高于4组和6组（ P＜0.05）， IgG1水平显著高于4组、5组和6组（ P＜0.05）。结论以PstS1-LEP为抗原，hBCG佐剂偏向诱导Th2型免疫反应，MF59佐剂诱导Th1/Th2型免疫反应，MF59和hBCG联合抑制脾细胞分泌IL-4，但增强巨噬细胞分泌IL-12。
- 张春青黄香玉邵进士李军丽宋庆德庄玉辉何秀云
- 关键词：结核分枝杆菌重组融合蛋白佐剂免疫原性
- MF59佐剂增强热灭活卡介苗的免疫原性被引量：4
- 2014年
- 目的 研究MF59佐剂[一种由角鲨烯、山梨糖醇三油酸酯（Span85）、吐温80和柠檬酸缓冲液组成的水包油乳剂]对热灭活BCG（hBCG）免疫小鼠诱导免疫应答的影响,验证自制MF59增强hBCG诱导细胞免疫反应的作用.方法 BALB/c （SPF级）小鼠分成A～G组,每组8只,于第0、2、4周皮下注射0.2 ml MF59、低剂量hBCG（0.025 mg/ml）、中剂量hBCG（0.25 mg/ml）、高剂量hBCG（2.5 mg/ml）、MF59＋低剂量hBCG、MF59＋中剂量hBCG、MF59＋高剂量hBCG.末次免疫2周,解剖小鼠.取小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞,并在体外经BCG PPD刺激培养,ELISA检测培养上清γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素（IL）-1β、Ib-2、IL-4、IL-12含量,酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测脾细胞分泌IFN-γ、IL-2和IL-4的斑点形成细胞数（SFCs）.所有试验组的平均值比较采用一元方差分析、每两组平均值比较采用最小显著差异法,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 MF59作为高剂量hBCG的佐剂（G组）免疫小鼠,其脾细胞体外经BCG PPD刺激培养,分泌IFN γ的SFCs[（151.3±66.6）个]、IL-2的SFCs[（247.8±58.0）个]和IL-4的SFCs[（65.8±24.6）个]显著高于其他组[其他组IFN-γ、IL-2和IL-4的SFCs的最高平均值分别为（30.4±13.0）个、（37.1±10.8）个和（16.4±9.7个）]（分泌IFN-γ的SFCs比较,t=3.2,P=0.007;分泌IL-2的SFCs比较,t=3.6,P=0.003;分泌IL-4的SFCs比较,t=3.0,P=0.01）.MF59与不同剂量hBCG联合免疫小鼠,其腹腔巨噬细胞体外经BCG PPD刺激培养,培养上清IL-1β水平分别为（663.3±177.5） pg/ml、（813.8±193.4）pg/ml和（742.3±316.1）pg/ml,均显著高于A、B和C组[分别为（104.7±65.8）pg/ml、（82.9±54.8） pg/ml和（66.5±53.5） pg/ml]（E、F和G与A组比较：t=2.9,P=0.01;t=3.5,P=0.004;t=2.5,P=0.031.E、F和G与B组比较：t=3.1,P=0.007;t=3.6,P=0.003;t=2.6,P=0.024.E、F和G与C组比较：t=3.0,P=0.01;t=3.5,P=0.004;t=2.5,P=0.031）.A、C和G组小鼠的腹腔巨噬细胞体外经
- 黄香玉张春青李军丽邵进士何秀云
- 关键词：卡介苗细胞因子类
- PstS1-ESAT-6抗原血清学和γ-干扰素释放试验辅助诊断结核病的价值被引量：5
- 2016年
- 目的分析重组融合蛋白PstS1-ESAT-6抗原血清学和r干扰素释放试验辅助诊断结核病的潜在价值。方法选取40只无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级BALB／c小鼠和18只SPF级豚鼠，均分别注射卡介苗（BCG）或热灭活结核分枝杆菌。选取解放军第三0九医院全军结核病研究所于2012年3—8月收治入院的129例结核病患者（结核病组）、54例非结核性肺部相关疾病患者（非结核病组）和194名健康者（健康对照组）作为研究对象。研究对象均采集外周静脉血。外周血单个核细胞（PBMC）和免疫的小鼠脾淋巴细胞经重组融合蛋白PstS1-ESAT-6体外刺激，应用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测经抗原刺激后释放r干扰素（IFN-γ）的效应T淋巴细胞即斑点形成细胞（SFC）；应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测外周血血浆和免疫小鼠血清抗重组融合蛋白PstS1-ESAT-6的IgG；应用孟都法（Mantoux）检测健康者BCG-PPD皮试、免疫豚鼠BCG-PPD皮试及重组融合蛋白PstS1-ESAT-6皮试。结果结核病组PBMC体外经重组融合蛋白PstS1-ESAT-6刺激，分泌IFN-γ的SFC数为（45．02±68．03）／z．5x10。个PBMC，高于非结核病组的（11．87±38．63）／2．5×10。个PBMC和健康对照组的（5．24±15．46）／2．5×10。个PBMC（F=32．96，P=0．000）。ELISPOT诊断结核病患者的敏感度为82．2％（106／lZ9），诊断非结核病组患者和健康者的特异度分别为87．0％（47／54）和90．2％（175／194），两者特异度比较差异无统计学意义（χ^2=0.45，P=0．500）。结核病组血浆中抗重组融合蛋白PstS1-ESAT-6的IgG水平（平均A492值为0.82±0.66）高于非结核病组[平均A492值为（0.60±0.30）]和健康对照组[平均A492为（0．36±0．20）1（F=43．60，P=0.000）；ROC分析确定检测临界值为0.49，其用于诊断结核病的敏感度为62．2％（69／111）、诊断非结核病组的特异度为40．4％（19／
- 何秀云黄香玉朱传智陈红兵张翠英肖漓高钰孔祥瑞
- 关键词：结核结核菌素试验酶联免疫斑点检测酶联免疫吸附测定
