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脱细胞天然骨基质与诱导性成骨细胞的体外相容性: 2011年; 背景:前期工作表明TritonX-100处理的脱细胞骨基质已满足组织学和免疫学方面的修复要求。如果细胞能在材料表面很好地生长,将利于进一步进行体内动物实验。目的:采用细胞培养法在体外评估脱细胞骨基质与诱导后成骨细胞的生物相容性。方法:第3代骨髓基质干细胞经成骨诱导分化培养液诱导分化为成骨细胞,接种于TritonX-100处理的脱细胞骨基质及羟基磷灰石表面,检测成骨细胞的碱性磷酸酶表达并用扫描电镜观察材料表面的细胞生长情况。结果与结论:碱性磷酸酶活性分析均表明,TritonX-100处理的脱细胞骨基质在培养48h之后比羟基磷灰石更利于诱导成骨细胞生长;扫描电镜下可见,成骨细胞在脱细胞骨基质表面呈现立体生长方式,细胞呈球形,并且聚集成簇。体外实验结果显示成骨细胞与脱细胞天然骨基质有较好的生物相容性。; 李康杰孙抒; 关键词：骨髓基质干细胞成骨细胞

去除移植免疫反应抗原成分脱细胞天然骨基质的制备被引量：5: 2011年; 背景:同种异体骨来源广泛,便于大量加工贮存,如能去除其免疫排斥反应用于骨支架修复骨缺损,将很好地解决骨源问题,但目前去除免疫排斥的方法不尽理想。目的:运用低渗-脱细胞联合过氧化氢去除骨基质中引起免疫排斥反应的抗原成分。方法:将SD大鼠股骨经低渗-脱细胞、过氧化氢处理制备天然脱细胞基质,再通过苏木精-伊红和甲苯胺蓝染色、扫描电镜与透射电镜观察、有机成分分析、洗脱剂残留量测定和移植免疫分析方法评估处理效果,并与新鲜大鼠股骨标本作比较。结果与结论:组织学观察可见处理后的脱细胞骨基质中胶原纤维排列规则,骨陷窝空虚,未见细胞,纤维连接蛋白和层粘连蛋白多存留在骨陷窝周边部。扫描电镜观察见处理后的骨基质板层连接疏松,板层之间出现大量孔隙;透射电镜见骨陷窝区已无高密度影;高效液相色谱仪检测TritonX-100在脱细胞骨基质中几无残留。光镜及扫描电镜均可见新鲜骨中有大量细胞成分。淋巴细胞刺激实验表明新鲜骨引起的免疫排斥反应明显强于脱细胞骨基质(P < 0.01)。说明联合应用低渗-脱细胞和过氧化氢处理基质的方法去除免疫排斥反应较为理想。; 李康杰孙抒; 关键词：免疫排斥反应生物材料

细胞培养法评价镁合金能化型共聚酯涂层的生物相容性: 2011年; 背景:与聚乳酸、聚羟基乙酸和乳酸-羟基乙酸共聚物等生物材料相比,3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚酯结构多元化,具有更好的生物相容性能、生物可降解性和热加工性能。目的:采用细胞培养法评估含不同质量浓度阿魏酸的3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚酯涂层的生物相容性。方法:室温下使用乙酸乙酯配制含0(对照组),50,100,130,150g/L阿魏酸的3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚酯,观察成膜外观。通过MTT吸光度检测、荧光显微镜观察以及扫描电镜观察方法对比评估骨髓间充质干细胞在其表面的生长状态。结果与结论:含50g/L阿魏酸的3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚酯成膜后外观均匀半透明,未见白色结晶析出物,含100,130,150g/L阿魏酸的3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚酯在成膜后均出现点状白色结晶物。MTT吸光度检测表明含50,100g/L阿魏酸的3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚酯均能较好地促进骨髓间充质干细胞生长;荧光显微镜及扫描电镜观察均见骨髓间充质干细胞能够在含50,100g/L阿魏酸的3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚酯表面黏附生长。说明含50g/L阿魏酸的3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚酯最适合作为镁合金的涂层材料。; 潘锋柏树令; 关键词：阿魏酸镁合金涂层生物相容性

镁锌合金促成骨细胞增殖作用及其相关机制研究被引量：2: 2012年; 目的观察镁锌合金(Mg-Zn)共同培养对成骨细胞MC3T3-E1的促增殖作用及相关的作用机制。方法实验分为对照组、Mg-Zn组、聚L-丙交酯(PLLA)组。采用细胞毒实验(MTT)法检测细胞增殖活性,酶联免疫分析(ELISA)法检测整合素β2的表达变化,免疫印迹法(Western blotting)检测细胞BMP-2和p-Smad1蛋白的表达变化。结果培养到第2天,3组间细胞增殖活性差异无统计学意义(P>0.05)。第4、6、8、10天时,Mg-Zn组MC3T3-E1细胞增殖显著高于对照组和PLLA组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组与PLLA组细胞增殖活性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组MC3T3-E1细胞整合素β2的表达在第2、4、6天逐渐升高,第8天又逐渐减低,差异有统计学意义(P<0.05),在同一时间点Mg-Zn组整合素β2的表达显著高于对照组和PLLA组,差异有统计学意义(P<0.01),对照组和PLLA组之间整合素β2的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Mg-Zn共培养可以促进成骨细胞的增殖,上调整合素β2的表达和激活BMP/Smad信号通路能是其主要的作用机制。; 刘波潘琦王希明田启俊周华江潘锋; 关键词：整合素类 SMAD蛋白质类骨形成蛋白 SMAD蛋白

细胞培养法评价含硅羟基磷酸钙涂层镁合金的生物相容性被引量：4: 2011年; 目的采用细胞培养法在体外评估镁合金表面不同硅含量的羟基磷酸钙涂层对成骨细胞的毒性反应。方法采用经鉴定的SD大鼠成骨细胞接种于三种含有不同浓度硅含量的羟基磷酸钙涂层的镁合金及对照组裸镁合金,MTT法检测细胞活力并检测成骨细胞的碱性磷酸酶表达;扫描电镜观察细胞生长情况。结果细胞活力检测和碱性磷酸酶活性分析均表明,硅含量在5%及10%的羟基磷酸钙涂层利于成骨细胞在镁合金表面的生长;扫描电镜下可见,成骨细胞在5%及10%硅含量的涂层上呈聚集性生长且分布均匀,而在裸镁合金上生长缓慢且稀疏分布。结论镁合金表面硅含量为5%及10%的羟基磷酸钙涂层都利于成骨细胞的体外黏附和生长。; 王佐周潘锋张二林; 关键词：成骨细胞细胞培养法镁合金 SD大鼠

细胞凝集态在钙结节形成过程中的显微结构观察: 2011年; 目的观察兔骨髓基质细胞来源的细胞凝集态在体外钙结节形成过程的形态变化。方法通过全骨髓培养方法分离培养兔骨髓基质细胞,并在培养瓶中进行扩增,使用成骨诱导液作为培养基;再通过四环素标记、碱性磷酸酶染色、茜素红染色、扫描电镜及透射电镜方法,研究细胞凝集态在钙结节形成过程中的形态变化。结果荧光显微镜下观察可见,四环素标记的钙结节发出金黄色荧光;光镜下见结节中的细胞凝集态与周边铺壁细胞相比呈碱性磷酸酶及茜素红的强阳性反应;扫描电镜下见结节中的凝集态细胞均呈球状生长并分泌基质;透射电镜下见细胞中基质小泡丰富。结论骨髓来源的基质细胞在体外形成的钙结节需要三维空间状态下细胞的高度凝集。; 潘锋柏树令; 关键词：扫描电镜透射电镜

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国家自然科学基金(81000791)