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代谢综合征相关新基因MSRG实时荧光PCR检测方法的建立: 2007年; 目的建立测定MSRG mRNA表达量的实时荧光定量PCR检测方法,为新基因的功能研究奠定基础。方法根据MSRGcDNA序列设计荧光PCR适用的引物和探针,构建质粒标准品,建立标准曲线用于荧光PCR相对定量,检测荧光PCR方法的灵敏性、特异性和重复性。荧光PCR检测不同浓度葡萄糖[5.6mmol/L(G5.6)、22mmol/L(G22)、33.3mmol/L(G33.3)]刺激人肝癌细胞株HepG2细胞MSRG的表达并与半定量RT-PCR方法进行比较。结果建立了MSRG mRNA表达的实时荧光PCR检测方法。荧光PCR检测显示G33.3、G22和G5.6组HepG2细胞MSRG表达均有显著差异,半定量RT-PCR方法检测G33.3组MSRG表达显著增加,但不能检测出G22和G5.6组间有差异。结论本实验建立的MSRG mRNA表达实时荧光PCR检测方法灵敏性、特异性和重复性较好,为MSRG功能的研究提供了一种重要手段。; 陈瑾歆方定志; 关键词：代谢综合征实时荧光定量PCR 半定量RT-PCR HEPG2

低脂高糖膳食对不同体质量指数的健康青年生理生化指标的影响: 2012年; 目的探讨低脂高糖(low-fat and high-carbohydrate,LF-HC)膳食对不同体质量指数(BMI)的健康青年生理指标及糖脂代谢指标的影响。方法给予7名超重青年〔BMI=(27.82±1.64)kg/m2〕和49名年龄匹配的正常对照〔BMI=(20.06±2.41)kg/m2〕7d平衡膳食和6dLF-HC膳食。平衡膳食含31.1%脂肪和54.1%碳水化合物,LF-HC膳食含14.8%脂肪和70.1%碳水化合物。于膳食干预的第1d、第8d和第14d清晨进行体检,测量各项生理指标;同时抽取12h空腹静脉血,制备血清并测定糖脂代谢相关指标,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果基础值时,正常组体质量(P=0.000)、BMI(P=0.000)、腰臀比(P=0.000)、收缩压(P=0.001)、舒张压(P=0.016)和甘油三酯(TG)(P=0.006)均低于超重组;高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)高于超重组(P=0.005)。LF-HC膳食后,总胆固醇(TC)(P<0.05)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)(P<0.05)在正常组和超重组中均降低,胰岛素(P<0.05)和HOMA-IR(P<0.05)在正常组和超重组中均升高;TG仅在正常组升高(P=0.000);HDL-C仅在超重组升高(P=0.018)。结论在健康青年中,LF-HC膳食对血清TG和HDL-C的影响与体质量指数有关。; 宋永燕龚仁蓉张荣荣张珍李元昊胡敏珊李蓉晖方定志; 关键词：体质量指数糖脂代谢超重

载脂蛋白AI基因+83C/T多态性对高糖膳食诱导的血清糖脂代谢指标变化的影响被引量：1: 2011年; 目的探讨载脂蛋白AI基因(apoA1)+83C/T多态性对高糖膳食诱导的血脂、血糖、胰岛素及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)变化的影响。方法给予56名健康青年7d平衡膳食和6d高糖膳食。平衡膳食的热量组成为15%蛋白质、31%脂肪和54%碳水化合物;高糖膳食的热量组成为15%蛋白质、15%脂肪和70%碳水化合物。于膳食干预的第1d、第8d和第14d清晨抽取12h空腹静脉血,测定血脂、血糖及胰岛素浓度,计算HOMA-IR。提取全基因组DNA,聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)分析apoA1+83C/T多态性。结果高糖膳食后甘油三酯(TG)(P=0.000)和胰岛素(P=0.023)仅在CC基因型受试者中升高。膳食后总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)在CC基因型受试者和T携带者中均降低(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)在CC基因型受试者(P=0.048)和T携带者(P=0.028)中均升高。结论高糖膳食诱导的TG及胰岛素变化受apoA1+83C/T多态性的调节,T等位基因可以抵消高糖膳食引起的TG和胰岛素升高。; 宋永燕龚仁蓉李蓉晖李玉佳张珍方定志; 关键词：载脂蛋白AI 遗传多态性

高密度脂蛋白对HepG2细胞代谢综合征相关新基因MSRG表达的影响: 2007年; 目的:观察高密度脂蛋白对HepG2细胞代谢综合征相关新基因MSRG表达的影响。方法:实验于2006-03/10在四川大学华西基础医学与法医学院医学分子生物学省级重点开放实验室完成。设计MSRG引物及Taqman探针,构建标准质粒,建立RealtimePCR定量检测MSRG表达的方法。以含5%无脂蛋白血清的低糖DMEM培养基培养HepG2细胞,分别加入不同浓度的高密度脂蛋白(0,25,50,100,200mg/L)孵育24h;以含100mg/L高密度脂蛋白的5%LPDS低糖DMEM培养基孵育HepG2细胞不同时间(0,6,12,24,36h),分别以0mg/L及0h为对照,通过RealtimePCR检测MSRG的表达。结果:①不同浓度高密度脂蛋白孵育细胞时,在0～100mg/L范围,MSRG表达随高密度脂蛋白浓度的增加有下降趋势;与0mg/L组相比,MSRG在50,100mg/L组表达差异具有显著性意义(P<0.05);与100mg/L组相比,高密度脂蛋白200mg/L组基因表达有所回升,但差异无显著性意义(P>0.05)。②不同高密度脂蛋白孵育时间0～24h组,MSRG表达随时间延长有下降趋势;与0h相比,12,24,36h组基因表达降低(P<0.05),24h组MSRG表达最低;与24h组相比,MSRG在高密度脂蛋白孵育36h组表达有所回升,但差异无显著性意义(P>0.05)。结论:在低浓度(0～100mg/L)及短时间内(0～24h)高密度脂蛋白可以抑制HepG2细胞MSRG的表达。; 王鹏方定志; 关键词：高密度脂蛋白 HEPG2细胞 REALTIME PCR

蛋白质组学技术在动脉粥样硬化标志物筛选中的应用被引量：1: 2012年; 动脉粥样硬化（ atherosclerosis,AS）是严重危害人类健康的多因素疾病.冠状动脉、颈动脉、腹主动脉等发生AS后会导致常见的心脑血管疾病如心肌梗死、脑卒中和周围血管疾病等.近30年来,我国心血管病的发病率和死亡率逐年上升,发病年龄提前[1].AS多发于中老年人,并随着年龄增长而加重[2].AS的发病机制目前尚未阐明.一般认为,高脂血症引起血管内皮损伤和内皮细胞通透性增加,促使氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）沉积于动脉内膜,引起巨噬细胞的炎症反应和动脉中膜平滑肌细胞增生,最终导致动脉内膜脂纹、纤维斑块和（或）粥样斑块形成.; 宋永燕李元昊方定志; 关键词：动脉粥样硬化蛋白质组学技术标志物氧化型低密度脂蛋白内皮细胞通透性平滑肌细胞增生

固醇调节元件结合蛋白-1c基因54G／C多态性对高糖低脂膳食诱导的健康青年人血脂比值的影响被引量：1: 2010年; 目的探讨固醇调节元件结合蛋白一lc（sterol regulatory element—binding protein-1c，SREBP-1c）基因54G／C多态性对健康青年血脂比值的影响及在高糖低脂（high—carbohydrate／low—fat，HC／LF）膳食诱导的变化中的作用。方法对56名健康志愿者，给予7d平衡膳食和6dHC／LF膳食，平衡膳食蛋白、脂肪、碳水化合物含量分别为15％，31％，54％，HC／LF膳食分别为15％，15％，70％。于第1d，第8d及第14d抽取空腹12h静脉血，测定血脂及血糖水平，计算血脂比值。分离血基因组DNA，聚合酶链反应-限制性酶切法分析SREBP-1c基因54G／C多态性。分析不同基因型间血脂比值及血糖的差异。结果不同基因型受试者血脂比值及血糖基础值差异无统计学意义。平衡膳食后，无论是在受试人群整体还是将男女分组分析，不同基因型之间血脂比值及血糖均无统计学意义。HC／LF膳食后，女性C等位基因携带者低密度脂蛋白胆固醇／高密度脂蛋白胆固醇比值（low density lipoprotein cholesterol／high density lipoprotein cholesterol，LDL-C／HDL-C）较GG纯合子显著升高（P〈0．05）。与HC／LF膳食前相比，在受试人群整体，总胆固醇（total cholesterol，TC）／HDL—C比值和LDL-C／HDL-C在各基因型中均显著降低（P〈0．05）。男女分组分析发现，HC／LF膳食后甘油三酯triglyceride（TG）／HDL-C比值和血浆致动脉硬化指数log（TG／HDL-C）在女性GG基因型受试者较膳食前显著升高（P〈0．05）；而TC／HDL—C、LDL—C／HDL-C在HC／LF膳食后显著下降（P〈0．05），且不受性别和SREBP-1c基因54G／C位点多态性影响。结论SREBP-1c基因54G／C多态性影响HC／LF膳食诱导的健康青年女性TG／HD-C、log（TG／HDL—c）改变。C等位基因可能是一个对防止女性HC／LF膳食诱导的甘油三酯升高的保护性因素。; 张珍方定志龚仁蓉杜娟汤慧黄鑫甘婵芬; 关键词：固醇调节元件结合蛋白-1C 高糖低脂膳食血脂比值

高糖膳食对载脂蛋白AI基因-75 G/A多态性不同基因型健康青年血脂及载脂蛋白比值的影响被引量：1: 2012年; 目的探讨高糖膳食对载脂蛋白AI基因(APOA1)启动子区-75 G/A多态性不同基因型健康青年血脂及载脂蛋白比值的影响。方法给予56名平均年龄为(22.89±1.80)岁的健康青年7 d平衡膳食和6 d高糖膳食。平衡膳食的热量组成为15%蛋白质、31%脂肪和54%碳水化合物;高糖膳食的热量组成为15%蛋白质、15%脂肪和70%碳水化合物。于膳食干预的第1天、第8天和第14天清晨抽取12 h空腹静脉血,测定血脂及载脂蛋白浓度,计算甘油三酯(TG)/高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、总胆固醇(TC)/HDL-C、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)/HDL-C及载脂蛋白B100(APOB100)/载脂蛋白AI(APOAI)的比值。提取全基因组DNA,聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法分析APOA1-75 G/A多态性。结果基础值时,血脂及载脂蛋白比值在男性基因型之间的差异无统计学意义(P>0.05);在女性中,A等位基因携带者LDL-C/HDL-C显著高于GG基因型受试者(P<0.05)。高糖膳食后,TC/HDL-C在各性别和基因型分组中均显著降低(P<0.01)。LDL-C/HDL-C在男性各基因型中显著降低(P<0.05);在女性中,LDL-C/HDL-C仅在A等位基因携带者中显著降低(P<0.01),在GG基因型受试者中差异无统计学意义(P>0.05)。结论 APOA1-75 G/A多态性A等位基因可能对其女性携带者的LDL-C/HDL-C比值有一定的影响。; 宋永燕欧国进龚仁蓉张珍胡敏珊樊梅李元昊方定志; 关键词：载脂蛋白AI 基因多态性

激素敏感性脂肪酶基因C-60G多态性对高糖膳食诱导的健康青年血浆糖脂代谢指标变化的影响被引量：1: 2011年; 目的探讨激素敏感性脂肪酶(HSL)基因(LIPE)启动子C-60G多态性在高糖膳食诱导的健康青年血浆糖脂代谢指标变化中的作用。方法广告招募56名平均年龄为(22.89±1.80)岁的在校健康志愿者(男性27名,女性29名),给予7 d平衡膳食(31%脂肪、54%碳水化合物、15%蛋白质)和6 d高糖膳食(15%脂肪、70%碳水化合物和15%蛋白质),于第1、8、14 d取12 h空腹静脉血,测定血脂、血糖、胰岛素水平,并计算体重指数(BMI)及稳态模型估算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)值。提取基因组DNA,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法分析LIPEC-60G多态性。结果不论在高糖膳食前还是高糖膳食后,CC基因型女性高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)(P<0.01或P<0.05)和载脂蛋白A-Ⅰ(apo A-Ⅰ)(P<0.01或P<0.001)较CC基因型男性升高;高糖膳食后,CC基因型女性总胆固醇(TC)(P<0.01)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)(P<0.05)较CC基因型男性升高。与高糖膳食前相比,高糖膳食后CC基因型男性BMI(P<0.05)、TC(P<0.001)和LDL-C(P<0.01)降低,HDL-C(P<0.01)和apo A-Ⅰ(P<0.05)升高;CG基因型男性BMI(P<0.05)和TC(P<0.01)降低。CC基因型女性TC(P<0.001)、LDL-C(P<0.01)降低,甘油三酯(TG)(P<0.01)和胰岛素(P<0.05)升高;CG基因型女性TC降低(P<0.05),TG升高(P<0.05)。结论 LIPEC-60G变异能够抑制高糖膳食诱导的健康青年男性LDL-C降低及HDL-C和apoA-Ⅰ的升高,抑制高糖诱导的健康青年女性LDL-C降低和胰岛素升高。; 李元昊龚仁蓉山本真衣姜喆樊梅方定志

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教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-04-0863)

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