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脐孢木霉菌中tri基因簇的克隆及tri基因在不同产素水平下的表达分析: 2016年; 木霉素(trichodermin)是单端孢霉烯类化合物的一种,其对多种植物病原真菌具有较强的抑制作用。为分析脐孢木霉菌Trichoderma brevicompactum tri基因簇中各基因与木霉素合成的关系,本研究首先克隆得到了脐孢木霉菌0248的tri基因簇,其全长24793 bp且含有7个开放阅读框。利用实时荧光定量PCR分析基因簇中各基因在产木霉素能力不同的培养基中表达,结果表明,高产素培养基中tri基因表达量在培养40 h时较高,随后的时间里表达量大幅降低。在低产或不产素培养基中,tri基因在培养40 h时表达量远低于其在高产素的培养基中基因表达量,在52 h时表达量有所提高,但在随后的时间里呈下降趋势,即tri基因簇表达量与木霉素的产量呈正相关。该研究为进一步阐明木霉素合成途径中相关基因的功能和提高脐孢木霉菌0248的生物防治效果奠定了基础。; 袁小枫申屠旭萍俞晓平; 关键词：木霉素碳源实时荧光定量PCR

基因组重排技术在微生物菌种改良中的应用被引量：4: 2018年; 基因组重排作为一种快速改良细胞表型的方法,不仅能有效提高微生物合成活性产物的能力,也能提高微生物的耐受性和对底物的利用率,还能激活沉默基因的表达产生新的化合物.本文综合论述了基因组重排的概况和基因组重排的过程,并讨论了基因组重排对微生物表型改良的应用以及对基因组重排的展望.; 申屠旭萍姚佳忆俞晓平; 关键词：基因组重排耐受性原生质体融合

脐孢木霉菌Trichoderma brevicompactum 0248 tri5基因片段的克隆及表达分析被引量：3: 2013年; 脐孢木霉菌Trichoderma brevicompactum能合成木霉素等单端孢霉烯类化合物,而基因tri5编码的单端孢霉二烯合酶是合成途径中的关键酶,它催化反式法呢基焦磷酸(tFPP)合成单端孢霉二烯。为分析基因tri5与木霉素合成的关系,本研究从脐孢木霉菌0248中克隆了基因tri5片段,并运用实时荧光定量PCR技术分析了基因tri5在不产木霉素培养基和产木霉素培养基中的差异表达。在相同培养时间下,基因tri5在不同产木霉素状态间的表达量差异显著;在培养96 h时基因tri5在2种培养基中均达到最大值,基因tri5在产木霉素状态下的表达量是不产木霉素状态下的107.18倍。通过检测产木霉素培养基中基因tri5表达量与木霉素含量的变化,结果显示木霉素的含量随着基因tri5表达量的增加而不断增加,在培养96 h时达到最大值118.71 mg L 1,推测基因tri5表达量与木霉素合成相关。该研究为基因tri5功能的进一步研究和对脐孢木霉菌0248进行基因工程菌改造奠定了理论基础。; 詹晓奂申屠旭萍刘卫平马正俞晓平; 关键词：木霉素基因克隆实时荧光定量PCR

HPLC法测定发酵液中丰加霉素的研究被引量：6: 2013年; 丰加霉素是核苷类抗生素的一种,多由链霉菌发酵产生.本研究建立了放线菌发酵液中丰加霉素的高效液相色谱检测方法,采用SHIMADZU C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),甲醇为流动相A,水为流动相B,梯度洗脱,洗脱程序为0～15min,5%～37%A;15～30min,37%～100%A;30～40min,100%～5%A;流速1.0mL·min-1,检测波长279nm,柱温30℃.该色谱条件下,丰加霉素能得到良好的分离,定量法的线性范围为5～150mg·L-1(r=0.999 7),平均加样回收率为101.01%,RSD(%)为0.62.本测定方法为今后高产丰加霉素的菌种选育和发酵工艺等研究提供了一套准确的检测技术.; 申屠旭萍于冰李丹婷王康泉俞晓平; 关键词：高效液相色谱梯度洗脱

几个常用内参基因在淀粉酶产色链霉菌1628抗药性突变株中稳定性的评估被引量：2: 2016年; 淀粉酶产色链霉菌Streptomyces diastatochromogenes 1628是一株重要的生防菌株,其代谢产物对多种植物病原真菌具有较强的抑制效果。为了筛选在其不同抗药性高产突变株中均能稳定表达的内参基因,选择16S rRNA、sigB、hrdB、thyA、gyrB和rpoA共6个常见内参基因,分别探究它们在野生型菌株、链霉素抗性突变株、利福平抗性突变株和巴龙霉素抗性突变株中的表达情况,并用geNorm软件和NormFinder软件对结果进行分析。结果表明,使用不同软件分析得出的最佳内参基因略有差异。geNorm软件认为在上述4株菌株中,表达最稳定的内参基因分别是gyrB、gyrB、thyA、rpoA;而NormFinder软件认为rpoA基因在所有菌株的表达都是最稳定的。利用平均等级的算法平衡两个软件的分析差异,最终确定rpoA基因为表达最稳定的内参基因。通过检测toyG基因的表达水平,发现以rpoA作为内参基因能得到更合理的结果。; 汤谷姚佳忆申屠旭萍俞晓平; 关键词：荧光定量PCR 内参基因

淀粉酶产色链霉菌1628发酵培养基及发酵条件的优化被引量：1: 2015年; 淀粉酶产色链霉菌1628(Streptomyces diastatochromogenes)是一株具有广阔应用前景的生防菌株,其合成的主要活性物质为核苷类抗生素——丰加霉素.为了提高淀粉酶产色链霉菌的发酵水平,本研究采用单因素和正交实验设计,对菌株1628的发酵培养基和发酵条件进行了优化,优化后的最佳培养基配方为:可溶性淀粉1.5%、黄豆粉5%、FeSO40.1%、CaCO30.5%、NH4NO3 0.3%、KH2PO4 0.3%,最适初始pH7.0.在供试的发酵条件内,装液量60mL/250mL,发酵温度28℃,摇床转速180r/min,发酵时间为92h.活性物质丰加霉素的产量最高156.17mg·L-1,比优化前提高了3.3倍.; 李丹婷袁小枫申屠旭萍俞晓平; 关键词：发酵优化单因素正交设计

杀菌剂与吡虫啉混合配剂对褐飞虱种群增长的影响被引量：4: 2018年; 褐飞虱Nilaparvata lugens St?l是亚洲国家水稻产区的主要害虫,其腹部脂肪体内存在大量类酵母共生菌(Yeast-like symbiotes,YLS)。YLS对褐飞虱的生长发育和繁殖起着至关重要的作用。以YLS为靶标,通过抑制褐飞虱体内YLS从而控制褐飞虱的发生必将是今后有效防治褐飞虱的新途径。前期研究表明,与单一的化学杀虫剂相比,杀虫剂和杀菌剂的混配制剂因能有效抑制褐飞虱体内YLS的数量从而导致褐飞虱更高的死亡率。本研究利用生命表和Morris-Watt数学模型分析了27%丰加霉素&四霉素P&四烯菌素B&四霉素A和75%肟菌酯&戊唑醇分别与吡虫啉的混合配剂对褐飞虱种群增长影响。结果表明,2种混合配剂处理后褐飞虱体内YLS的数量均明显下降,且褐飞虱种群增长指数显著低于吡虫啉处理组,混合配剂对褐飞虱的抑制作用主要表现在卵孵化期和成虫产卵期。本研究结果为褐飞虱防治提供了新的思路和方法。; 何林懋申屠旭萍李丹婷孙帆俞晓平; 关键词：褐飞虱类酵母共生菌种群增长生命表

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浙江省自然科学基金(LY12C14012)