国家自然科学基金(81171433H1816)
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
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- Fogarty球囊构建兔颈总动脉损伤及移植内皮祖细胞治疗的动物模型被引量：1
- 2015年
- 目的:利用Fogarty球囊建立兔颈总动脉球囊损伤及损伤处移植内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPCs)治疗的动物模型。方法:培养兔外周血中EPCs并以Fe2O3磁性纳米颗粒标记。将实验兔随机分为细胞组(12只)和空白组(10只),经股动脉入路利用Fogarty球囊损伤两组兔右侧颈总动脉,并用Fogarty球囊阻断血流后将标记EPCs移植至细胞组血管损伤段,将生理盐水注入空白组;术后7 d取2只细胞组兔损伤血管行普鲁士蓝染色;术后3 d,1、4、8周行MR扫描;术后8周取损伤血管,行HE、弹力纤维及PCNA染色。结果:术后7 d普鲁士蓝染色示损伤内膜可见含铁EPCs附着,MR扫描示术后4周空白组兔损伤血管壁稍有增厚,术后8周明显增厚,细胞组术后4周损伤血管管壁未见明显增厚,8周后稍有增厚。病理学检查示,术后8周细胞组与空白组内膜/中膜比(N/M)分别为0.34±0.05和1.14±0.10(P<0.01),PCNA阳性细胞指数为0.08±0.01和0.31±0.01(P<0.05)。结论:Fogarty球囊成功构建兔颈总动脉损伤狭窄模型并阻断血流实现EPCs定向移植至血管损伤处,参与内膜的修复。
- 许荣睿赵国峰丁蓉蓉李英豪秦永林赵登玲金晖邓钢
- 关键词：球囊损伤再狭窄内皮祖细胞
- 携人血栓调节蛋白基因慢病毒载体的构建及其在内皮祖细胞中的表达被引量：2
- 2014年
- 目的 构建携带人血栓调节蛋白（hTM）基因的慢病毒表达载体（plenti6.3-hTM-IRES-EGFP）,体外转染兔外周血内皮祖细胞（EPCs）,并观察其在EPCs中的表达及对其功能的影响.方法 采用DNA重组技术构建plenti6.3-hTM-IRES-EGFP慢病毒表达载体；密度梯度离心法分离兔外周血EPCs; EPCs分为实验组、病毒对照组及空白对照组；3组细胞分别转染plenti6.3-hTM-IRES-EGFP、pLenti6.3-MCS-IRES-EGFP及磷酸盐缓冲液（PBS）；流式细胞仪检测转染效率,转染72 h后激光共聚焦显微镜观察增强型绿色荧光蛋白表达,定量聚合酶链反应（Q-PCR）及Western blot检测细胞中hTM mRNA及蛋白表达；炭花青荧光燃料标记的乙酰化低密度脂蛋白（Dil-ac-LDL）和异硫氰酸荧光素标记的荆豆凝集素-1（FITC-UEA-1）双荧光法鉴定EPCs；噻唑蓝（MTT）法及Tr answell小室法检测各组细胞增殖及迁移活性.结果 成功构建plenti6.3-hTM-IRES-EGFP,转染EPCs 72 h后,绿色荧光蛋白表达率超过90.0％,流式细胞仪测定hTM阳性EPCs达92.9％,Q-PCR及Western blot显示转染组hTM mRNA表达明显高于对照组.3组EPCs的增殖及迁移活性比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 plenti6.3-hTM-IRES-EGFP慢病毒表达载体在EPCs中高效表达且不影响其生物学功能,为进一步研究hTM在动脉血栓疾病中的作用奠定了物质基础.
- 赵国峰邓钢侯居攀吴志平许荣睿秦永林金晖
- 关键词：血栓调节蛋白慢病毒内皮祖细胞基因表达
- 人血栓调节蛋白基因转染内皮祖细胞预防球囊扩张术后动脉再狭窄被引量：3
- 2013年
- 目的探讨血栓调节蛋白基因（hTM）转染的内皮祖细胞（EPCs）移植至兔颈总动脉球囊损伤局部预防动脉冉狭窄的可行性。方法兔外周血分离培养EPCs；脂质体介导基因转染，片以Fe2O3磁性纳米颗粒标记EPCs；高脂饮食联合球囊扩张制作兔双侧颈总动脉损伤模型共16只，随机分成2组，双腔Fogarty球囊阻断法分别将转染EPCs、未转染EPCs及等量生理盐水移植至兔颈总动脉损伤局部；移植后1、3、7、14d分别行磁共振（MR）扫描，观察损伤局部信号强度改变；4个月后行血管组织切片苏木素-伊红（HE）染色及弹力染色，观察再狭窄情况。结果脂质体可以成功地将外源hTM基因转染至EPCs并可获得10％～15％的转染效率；Fogarty球囊阻断法可以使部分EPCs黏附于血管损伤局部，引起局部MR信号改变；基凶修饰组、基因未修饰组、单纯损伤组内膜中膜比（N／M）分别为0．30±0．02、0．62±0．05、1．58±0．10，3组间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论血栓调节蛋白基因转染内皮祖细胞可以有效预防球囊扩张术后动脉再狭窄。
- 侯居攀吴志平金晖秦永林柏志斌柳东芳丁洁程科萍邓钢
- 关键词：血栓调节蛋白内皮祖细胞球囊损伤再狭窄
- 人血栓调节蛋白基因转染兔内皮祖细胞的体外实验研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨人血栓调节蛋白(hTM)基因转染兔内皮祖细胞(EPCs)的可行性及效率,为hTM修饰的EPCs活体移植预防经皮腔内血管成形术术后血管内再狭窄提供实验依据。方法采用基因工程方法构建重组质粒pcDNA3.1-hTM。梯度离心法分离兔外周血单个核细胞(MNCs),贴壁筛选出EPCs,通过免疫组化检测其CD34、vWF、KDR等内皮系抗原,通过Dil-ac-LDL及FITC-UEA-1荧光染料双吞实验进一步表征EPCs pcDNA3.1-hTM转染EPCs,转染48 h后行细胞免疫荧光染色,72 h后行Western印迹检测比较重组质粒转染组、空载质粒转染组和对照组hTM表达水平。转染后分别于第3、4、5天采用四氮噻唑蓝法(MTT)比较各组细胞增殖活性。结果双酶切及基因测序鉴定均证实pcDNA3.1-hTM重组质粒构建成功;细胞表面抗原及免疫荧光双标实验表明所培养细胞为EPCs。转染后的直接免疫荧光实验及Western印迹检测证实hTM在重组质粒转染组的表达高于对照组;MTT比色实验示重组质粒转染组、空载质粒组、空白对照组在第3、4、5天吸光度值差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建pcDNA3.1-hTM重组质粒,转染兔外周血EPCs后可使EPCs成功表达TM,且对EPCs的活力、增殖等生物学性质无明显影响。
- 吴志平邓钢侯居攀赵国峰许荣睿文颂秦永林柏志斌滕皋军
- 关键词：转染内皮祖细胞
