国家自然科学基金(30570266)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 丙型肝炎病毒全基因重组质粒的构建及其转染细胞系的建立
- 2009年
- 目的构建丙型肝炎病毒(HCV)全基因重组质粒,并建立其转染细胞系。方法双酶切质粒JFH1,回收HCVDNA,分别与真核表达载体pIRESneo和逆转录病毒载体pLNCX连接,构建重组质粒pIRESneo-HCV和pLNCX-HCV。将重组质粒pIRESneo-HCV转染BHK细胞,pLNCX-HCV转染pA317细胞,通过PCR、间接ELISA和免疫荧光试验鉴定转染细胞。结果重组质粒PCR和酶切鉴定证明构建正确。转染细胞上清经PCR检测均可见目的基因条带;ELISA结果表明,转染细胞冻融上清均可与抗HCV小鼠血清发生强的结合反应;转染细胞均可与抗HCV小鼠血清反应,产生荧光,但荧光不多且斑点不亮。结论已成功构建HCV全基因重组质粒,并建立了可表达HCV蛋白的转染细胞系,为转基因动物模型的建立奠定了基础。
- 张丽颖赵志辉扈荣良
- 关键词：丙型肝炎病毒全基因真核表达
- 乙型肝炎病毒(adr亚型)重组逆转录病毒包装及滴度测定
- 2006年
- 目的包装乙型肝炎病毒(adr亚型)重组逆转录病毒并进行滴度测定,为下一步构建乙型肝炎病毒(adr亚型)转基因小鼠奠定基础。方法将乙型肝炎病毒(adr)全基因组插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了乙型肝炎(adr)重组逆转录病毒载体,鉴定正反向后,脂质体转染PA317包装细胞,G418抗性压力下进行筛选得到阳性细胞克隆,扩大培养后进行滴度测定,选取产毒率高细胞克隆株,然后扩大培养、浓缩,进行滴度测定。结果分别获得HBV(adr)全基因组正向和反向插入的重组逆转录病毒。正连重组逆转录病毒载体经PA317细胞包装,经筛选、浓缩后滴度为106CFU/m l,反连重组逆转录病毒载体经PA317细胞包装,经筛选、浓缩后滴度为105CFU/m l。结论PA317细胞包装了含乙型肝炎病毒(adr)全基因组的重组逆转录病毒。
- 王岚杨世忠于志凤赵颖
- 关键词：重组逆转录病毒载体滴度测定
