广东省自然科学基金(04009386)
- 作品数：7 被引量：19H指数：3
- 相关作者：杨林范红梅谢奇峰张富程陈幼明更多>>
- 相关机构：中山大学附属第三医院深圳市第二人民医院更多>>
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- 乙型肝炎病毒X蛋白的生物学功能研究进展被引量：1
- 2006年
- 乙型肝炎病毒(HBV)X基因编码的X蛋白(HBx)是一种多功能病毒调节蛋白,具有广泛的基因转录调控作用,并能与宿主细胞的多种蛋白质直接作用,从而调节基因表达及宿主细胞蛋白质功能,进而影响病毒的复制、宿主细胞信号转导、细胞增殖与分化、细胞凋亡及癌变等。
- 范红梅杨林
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白细胞凋亡肝细胞癌
- HBV X蛋白对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡的影响
- 2010年
- 目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis BvirusX protein,HBVX)对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡及p53、PTEN表达的影响。方法:用阿霉素(2.5g/mL)分别处理HepG及稳定表达GFP、GFP-HBVX融合蛋白的细胞系HepG/GFP、22HepG/GFP-HBVX,处理后不同时间在显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:流式细胞术检测显2示阿霉素处理后36h,HepG/GFP-HBVX细胞凋亡率为3.94%,明显低于HepG(59.03%)、HepG/GFP细胞(61.38%)222(P<0.05),而与未处理对照组细胞(2.12%、2.78%、2.55%)无明显差别(P>0.05)。结论:HBVX蛋白能够抑制阿霉素诱导的细胞凋亡。
- 佘吉佳杨林王霞范红梅张富程陈幼明谢奇峰
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白阿霉素细胞凋亡
- 乙型肝炎病毒HBx蛋白抑制阿霉素诱导的HepG2细胞凋亡被引量：8
- 2008年
- 目的探讨乙型肝炎病毒HBx蛋白对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡的影响。方法将adr亚型HBx基因片段定向插入绿色荧光蛋白（GFP）真核表达载体pEGFPCl，构建重组体pGFP—HBx。将pEGFPCl、pGFPHBx转染HepG2细胞，采用G418筛选抗性克隆、荧光显微镜观察及RT—PCR检测HBx基因表达情况以建立稳定表达细胞株HepG2／GFP、HepG2／GFPHBx。用阿霉素（2．5μg／m1）分别处理HepG2、HepG2／GFP、HepG2／GFPHBx细胞，处理后不同时间在显微镜下观察细胞形态变化，并用锥虫蓝染色计数死亡细胞；流式细胞仪检测阿霉素处理36h后细胞凋亡率。结果HepG2／GFP、HepG2／GFPHBx细胞传70代后，仍表达强的GFP；RTPCR检测显示在HepG2／GFP—HBx细胞有HBx基因转录表达。锥虫蓝染色检测表明阿霉素处理的HepG2、HepG2／GFP细胞发生了明显的时间依赖性细胞死亡，而在HepG2／GFPHBx和对照组细胞未见明显细胞死亡；流式细胞仪检测显示阿霉素处理36h后，HepG2／GFP—HBx细胞凋亡率为3．94％，明显低于HepG2（59．03％）、HepG2／GFP细胞（61．38％）（P〈0．01），而与未处理对照组细胞凋亡率（2．12％，2．78％，2．55％）差异无统计学意义（P〉0．05）。结论成功建立了稳定表达GFP、GFPHBx的HepG2细胞株；HBx能够抑制阿霉素诱导的HepG2细胞凋亡。
- 范红梅杨林谢奇峰韩晓燕吴盟张富程姚春斓李刚高志良
- 关键词：细胞凋亡HBX蛋白阿霉素绿色荧光蛋白
- 乙型肝炎病毒X蛋白对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡及p53、PTEN表达的影响被引量：3
- 2010年
- 目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡及p53、PTEN表达的影响。方法用阿霉素(2.5μg/ml)分别处理HepG2及稳定表达GFP、GFP-HBx融合蛋白的细胞系HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx,处理后不同时间在显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR检测p53、PTENmRNA水平;Westernblotting检测p53、PTEN蛋白水平。结果流式细胞术检测显示阿霉素处理后36h,HepG2/GFP-HBx细胞凋亡率为3.94%,明显低于HepG2(59.03%)、HepG2/GFP细胞(61.38%)(P<0.001),而与未处理对照组细胞(2.12%、2.78%、2.55%)无显著差别(P>0.05)。RT-PCR分析显示HepG2/GFP-HBx细胞PTENmRNA水平低于HepG2及HepG2/GFP细胞,而p53mRNA水平无明显差别。Westernblotting检测显示HepG2/GFP-HBx细胞PTEN蛋白明显低于HepG2及HepG2/GFP细胞,而p53蛋白无明显差别。结论 HBVX蛋白能够抑制阿霉素诱导的细胞凋亡及PTEN表达,HBVX蛋白对其细胞凋亡的抑制可能与其对p53-PTEN的抑制有关。
- 王霞杨林佘吉佳范红梅张富程陈幼明谢奇峰
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白阿霉素P53PTEN细胞凋亡
- GFP/HBV X融合蛋白重组载体的构建及稳定表达细胞系的建立被引量：5
- 2007年
- 目的构建绿色荧光蛋白(GFP)与人乙型肝炎病毒(HBV)X基因的重组表达载体,建立稳定表达HBVX蛋白(HBx)与GFP融合蛋白的HepG2细胞系,以进一步研究HBx的生物学功能及其在肝癌发生中的作用。方法应用PCR法从adr亚型HBV质粒pHBV DNA中扩增HBV X基因片段,PCR产物经HindⅢ和KpnⅠ双酶切后定向插入绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1的相应酶切位点,转化宿主菌DH5#,采用上述双酶切及DNA测序鉴定重组质粒pGFP-HBx;采用脂质体转染法将pEGFP-C1质粒、pGFP-HBx重组质粒DNA转染人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞,G418选择抗性细胞克隆,荧光显微镜下观察GFP表达,挑取表达GFP的抗性克隆扩大培养、传代。采用RT-PCR检测转染细胞HBV X基因的表达。结果经酶切及测序鉴定成功构建了GFP-HBV X重组表达载体pGFP-HBx;将pEGFP-C1、pGFP-HBx重组质粒转染HepG2,经G418筛选15d获得抗性细胞克隆。将带绿色荧光的抗性克隆细胞扩大培养并经传代70次,细胞仍表达强的荧光蛋白。RT-PCR检测表明转染pGFP-HBx重组体的HepG2/GFP-HBx细胞有HBV X转录、表达。结论成功构建了GFP-HBV X真核重组表达载体pGFP-HBx;获得了稳定表达GFP-HBx融合蛋白的HepG2细胞系,这为进一步研究HBx的生物学功能以及HBx在肝癌发生中的作用与机制打下了基础。
- 杨林范红梅陈幼明谢奇峰吴盟陈雪娟李刚高志良
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白绿色荧光蛋白重组体细胞系
- HBV大分子表面蛋白基因真核重组载体的构建与鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的构建包含人乙型肝炎病毒(HBV)大分子表面蛋白基因的重组载体,以便进一步研究其基因免疫以及对宿主细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)p38等信号传导通路的影响。方法设计合成2对寡核苷酸引物,以adr亚型HBV质粒pHBVDNA为模板,采用PCR法分别扩增HBV大分子表面蛋白基因(preS1/S2/S基因)片段;用HindⅢ和BamHI双酶切后,连接到质粒pcDNA3.1(+)相应酶切位点,转化宿主菌DH5α,分别用上述内切酶双酶切及DNA测序鉴定重组质粒。结果酶切鉴定示所切下的片段大小均与预计相符。测序结果与文献报道序列及预计结果一致。结论成功构建了HBV大分子表面蛋白基因的重组载体。
- 李志刚杨林江元森顾琳姚集鲁
- 关键词：乙型肝炎病毒
- 乙型肝炎病毒X蛋白与细胞信号转导途径被引量：1
- 2008年
- HBVX蛋白（HBx）是泛宿主多功能蛋白质，能影响多种细胞信号转导途径。HBx可以调节相关蛋白激酶的活性，包括蛋白激酶C、Janus激酶／STAT、IKK、PI-3-K、应激调节蛋白激酶／Jun N末端激酶、Ca^2＋通道以及蛋白激酶B／Akt，还能上调一系列转录因子、多肽分子的活性，包括NF-κB、AP-1、CREB和p53等，此文就相关研究进行综述。
- 邝建玉杨林
- 关键词：X蛋白细胞信号转导
