国家自然科学基金(81000774)
- 作品数：6 被引量：41H指数：4
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- 相关机构：军事医学科学院中国人民解放军总医院中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 基于上转发光免疫层析技术的常见食源性致病菌快速检测方法研究与评价被引量：15
- 2015年
- 目的研制针对4种常见食源性致病菌：甲型副伤寒沙门菌（Salmonella paratyphi A）、乙型副伤寒沙门菌（Salmonella paratyphi B）、大肠埃希菌O157∶H7（Escherichia coli O157∶H7）、副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）的基于上转发光免疫层析技术（UPT-LF）的快速定量检测试纸,并对其检测性能进行评价。方法以上转发光纳米颗粒（UCP-NPs）作为示踪物,基于双抗体夹心检测模型,研制针对上述4种靶标菌的UPT-LF试纸;以4种靶标菌的系列浓度标准菌悬液作为标准样品,评价试纸的敏感性、特异性、线性和精密性,并进行模拟染菌食品的检测,评价模拟样品阳性检出率。结果针对4种靶标菌的UPT-LF试纸均具有良好的线性,相关系数r为0.985-0.996;检测敏感性达10^5-10^6CFU/ml,与其他近缘菌株无交叉反应;对乳制品、饮料、小食品、水产、肉类等细菌污染的食品检出率较高。结论该研究建立的对4种常见食源性致病菌进行快速检测的UPT-LF,简便快速,具有良好的敏感性、特异性和线性定量能力,操作性能可满足食品安全检测的要求。
- 李春凤赵勇王晓英张平平刘晓孙崇云杨瑞馥王成彬周蕾
- 关键词：食源性致病菌甲型副伤寒沙门菌副溶血弧菌
- 多重生物检测技术研究进展被引量：9
- 2012年
- 多重生物检测因其快速、耗费少、所需样品量少等优点,被广泛用于细菌、病毒、真菌、寄生虫及自身免疫相关抗体等抗原或抗体的快速筛查诊断。多重核酸检测的新技术包括巢式PCR(nPCR)、多重串联PCR、基于毛细管电泳的GeXP平台和luminex xMAP多重分析技术平台,多重免疫检测的新技术包括基于上转换发光、多线点、表面等离子共振技术的多重生物检测及基于蛋白芯片的阵列array-ELISA检测。本文综述了近年来多重生物检测新技术在呼吸道感染、腹泻、自身免疫性缺陷和肿瘤等疾病中的应用进展。
- 张平平王浩然郭兆彪杨瑞馥周蕾
- 关键词：多重PCR病原体
- 基于上转发光免疫层析技术的鼠疫耶尔森菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌快速检测方法研究与对比评价被引量：6
- 2015年
- 目的研制基于上转发光免疫层析技术（UPT-LF）检测鼠疫耶尔森菌（简称鼠疫菌）、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌的试纸，与BioThreatAlert免疫层析（BTA）试纸的检测和操作性能进行对比。方法以上转发光纳米颗粒作为生物示踪物，采用双抗体夹心模式分别研制检测鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌的uPT．LF试纸。分别配制10^10、10^9、10^8、10^7、10^6、10^5、0CFU／ml系列浓度的鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌标准品以及10^9CFU／ml系列浓度的27种特异性评价菌株菌液，采用UPT-LF试纸对其进行检测，对3种UPT-LF试纸的敏感性、精密性、线性和特异性进行分析评价。配制模拟阳性样品，分别采用uPT-LF和BTA试纸对10^7、10^6、10^5、0CFU／ml系列浓度的标准品以及模拟阳性样品进行检测，比较UPT-LF和BTA试纸的检测时间、敏感性以及鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌的检出率。结果鼠疫菌UPT—LF、炭疽杆菌芽孢uPrr—LF、布鲁菌UPT-LF试纸的敏感性均达到10^5CFU／ml，各系列浓度检测带信号／质控带信号（T／C）值的变异系数均≤15％，lg[T／C值-临界值（cut—off值）]与lg（标准品浓度）的相关系数分别为0．996、0．998、0．999（F=1647．57、743．51、1822．17，P值均〈0．001）。鼠疫菌UPT-LF和布鲁菌UPT-LF试纸检测特异性评价菌株时，均无非特异性交叉反应，炭疽杆菌芽孢UPT—LF试纸检测枯草芽孢杆菌分离株2#芽孢、蜡样芽孢杆菌分离株1#芽孢存在非特异交叉反应，检测其他特异性评价菌株均无非特异性交叉反应。UPT-LF试纸检测鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌样品的时间分别为33、36、37min，BTA为115、115、111min；UPT-LF和BTA试纸检测0CFU／ml标准品的阴性率均为5／5；UPT-LF试纸检测炭疽杆菌芽孢、鼠疫菌、布鲁菌的敏感性均达到10^5CFU／ml，BTA试纸分别为10^6、10^6、10^5CFU／ml；模拟样品检测中，UP
- 李春凤张平平王晓英刘晓赵勇孙崇云王成彬杨瑞馥周蕾
- 关键词：耶尔森菌鼠疫免疫层析
- 基于上转发光免疫层析技术快速检测单核细胞增生李斯特菌被引量：4
- 2014年
- 目的建立可快速检测单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）的上转发光免疫层析技术（up-converting phosphor technology based lateral flow assay,UPT-LF）,即LM-UPT-LF。方法针对LM特异的p60蛋白制备单克隆抗体,并与上转发光纳米颗粒（up-converting phosphor nanoparticles,UCP-NPs）共价偶联作为结合物,采用双抗体夹心免疫层析模式建立LM-UPT-LF,并对其敏感性与特异性进行评价。结果建立了可快速检测LM的LM-UPT-LF平台,在样本〈10 cfu、10~99 cfu、100~1000 cfu绝对LM污染量条件下可分别在培养20、18、16 h检出阳性。其他13种食源性致病菌在高浓度（109cfu/ml）时无非特异性交叉。结论所建立的LM-UPT-LF操作简便快速,具有良好的敏感性和特异性,适用于一线病原调查与检测。
- 刘旭李春凤王晓英冯娜杨瑞馥王成彬周蕾
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌
- 6种沙门菌单克隆抗体的制备和效能评价
- 2012年
- 目的:制备稳定、特异、高亲和性的分别针对甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的单克隆抗体。方法:用甲醛灭活的菌液抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合;用灭活的菌液包被酶标板,ELISA筛选阳性克隆株,建立细胞系;选取高效分泌杂交瘤细胞,常规制备腹水并纯化,进行单抗特异性与亲和性评价。结果:筛选得到分泌6种沙门菌相应单克隆抗体的杂交瘤细胞株,获得高亲和性单抗;所有单抗与大部分病原菌(包括7种沙门菌、3株志贺菌、2株李斯特菌、4株致病性大肠杆菌、2株霍乱弧菌)无交叉反应,但由于同类型O抗原的广泛分布,抗乙型副伤寒沙门菌单抗与鼠伤寒沙门菌、抗伤寒沙门菌单抗与肠炎沙门菌有明显的交叉反应。结论:沙门菌单抗的制备,为感染性腹泻的监测、诊断奠定了基础。
- 张平平张丽丽王浩然王津杨瑞馥周蕾
- 关键词：沙门菌单克隆抗体特异性评价
- 降钙素原上转发光免疫层析定量检测方法的建立被引量：11
- 2014年
- 降钙素原（procalcitonin，PCT）以其高灵敏度、高诊断特异性以及持续稳定的特点作为脓毒症诊断指标之一，2009年JAMA文章报道基于PCT为指导可以减少抗生素使用。目前PCT的临床检测方法主要有半定量胶体金比色法、电化学发光法和酶联免疫荧光法，此3种方法各有缺陷，均无法满足急诊科、重症监护室等对患者体征状况进行快速、及时的评价监测的需求。
- 李鲁平于洋谷海峰闵微赵焕生郭兆彪杨瑞馥周蕾
- 关键词：电化学发光法降钙素原免疫层析诊断特异性免疫荧光法重症监护室
