浙江省医药卫生科学研究基金(2011RCA030)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：郑晓群余玲玲王慧燕田可港更多>>
- 相关机构：杭州市滨江医院温州医学院附属第二医院温州医学院更多>>
- 发文基金：浙江省公益性技术应用研究计划项目浙江省医药卫生科学研究基金温州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 定点诱变法构建β地中海贫血IVS-2-654(C>T)突变基因质粒被引量：1
- 2012年
- 目的构建含β地中海贫血(简称β地贫)IVS-2-654(C>T)突变基因的质粒。方法以含β珠蛋白野生型基因的质粒DNA为模板,采用重叠延伸PCR(OE-PCR)定点诱变后行TA克隆的方法构建含IVS-2-654(C>T)突变基因的质粒。结果双向测序结果表明:重组质粒的确含β地贫IVS-2-654(C>T)突变基因,β珠蛋白IVS-2-654处的碱基已由C突变成T,其余序列与野生型完全相同,成功实现了定点诱变。结论成功地构建了含β地贫IVS-2-654(C>T)突变基因的质粒,进一步为该病基因诊断与筛查技术的研究奠定了实验基础;OE-PCR定点诱变法简便、经济,值得推广应用。
- 余玲玲田可港冯晶晶王慧燕郑晓群
- 关键词：Β地中海贫血基因突变重叠延伸PCR定点诱变
- 重叠延伸PCR法构建β地中海贫血基因突变质粒标准品被引量：3
- 2012年
- 目的:构建含β地中海贫血(简称β地贫)-28(A>G)与IVS-2-654(C>T)突变基因的质粒标准品。方法:以含β珠蛋白野生型基因的质粒DNA为模板,采用重叠延伸PCR(Overlap extension PCR,OE-PCR)定点诱变后行TA克隆的方法分别构建含-28(A>G)与IVS-2-654(C>T)突变基因的质粒。结果:DNA测序表明:重组质粒1的确含β地贫-28(A>G)突变基因,β珠蛋白-28处的碱基已由A突变成G,其余序列与野生型完全相同;重组质粒2的确含IVS-2-654(C>T)突变基因,β珠蛋白IVS-2-654处的碱基已由C突变成T,其余序列与野生型完全相。成功实现了定点诱变。结论:分别成功地构建了含β地贫-28(A>G)与IVS-2-654(C>T)突变基因的质粒标准品,进一步为HRM技术检测β地贫基因突变方法的建立及该病其它基因诊断与筛查技术的研究奠定了实验基础。
- 余玲玲冯晶晶田可港王慧燕郑晓群
- 关键词：Β地中海贫血基因突变重叠延伸PCR定点诱变
