国家自然科学基金(81000744)
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- 麦胚系统真核表达小鼠伯氏疟原虫TIP样蛋白的实验研究
- 2013年
- 目的体外真核表达小鼠伯氏疟原虫TIP样蛋白(PbTIP)胞外域重组蛋白。方法合成PbTIP胞外域DNA片段,克隆入真核表达载体pEU-E01-His-TEV-MCS,采用CFS真核无细胞蛋白表达系统(麦胚系统),在体外表达可溶性PbTIP胞外域重组蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳和Western-blot检测并鉴定目的蛋白表达情况。结果获得了可溶性表达的PbTIP胞外域重组蛋白,分子量约70 000 Mr,与预期相符,目的蛋白浓度约为0.1 mg/ml。结论采用麦胚系统在体外获得了较高浓度的可溶性PbTIP胞外域重组蛋白,不但为后续的PbTIP胞外域功能研究打下了良好的基础,也为众多疟原虫未知蛋白的功能研究提供了新的方法。
- 王军沈燕李英辉刘学武黄豫晓梁姣刘文文赵亚
- 关键词：伯氏疟原虫真核表达
- PbTIP多克隆抗体对恶性疟原虫生长抑制作用的初步研究
- 2013年
- 首先构建了伯氏疟原虫TIP样蛋白(以下简称PbTIP)的原核表达载体pET32a/PbTIP,在大肠杆菌中成功诱导表达了带His标签的PbTIP融合蛋白。SDS-PAGE分析显示该融合蛋白主要以包涵体形式表达。Western-Blot鉴定虽然证明该融合蛋白表达正确,但即便在变性条件下该蛋白的亲和层析纯化效果也不佳。以PbTIP融合蛋白经过初次和三次加强免疫获得的小鼠PbTIP多克隆抗体滴度达到1∶105以上。进一步的研究表明,小鼠PbTIP抗血清对体外培养恶性疟原虫的生长具有一定的抑制作用,这显示PbTIP多克隆抗体对恶性疟原虫感染具有一定的交叉保护作用。以上实验结果为后续PbTIP在疟原虫免疫抑制中的功能及其机制研究奠定了一定的基础。
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- 关键词：疟原虫免疫抑制
