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西尼罗病毒特异性抗原片段筛选及ELISA方法的研究被引量：1: 2013年; 目的筛选西尼罗病毒特异抗原片段,并建立其ELISA快检方法。方法参考亲水性、抗原性、可塑性、表面可及性及二级结构信息,对西尼罗病毒抗原表位进行系统分析,预测得分值较高的抗原区域经原核表达、Western blot筛选及亲和层析纯化后,包被ELISA微孔板,对ELISA反应条件进行系统优化,建立其ELISA快检方法。结果预测获病毒特异性抗原表位29个,对其中11段进行了表达,经筛选,获得西尼罗病毒特异抗原片段及西尼罗与乙型脑炎病毒共同抗原片段各一段。利用西尼罗病毒特异抗原片段WnAg16建立了检测西尼罗病毒抗体的ELISA方法,与所试相近病毒无交叉反应,S/N比值均在23以上,对鼠抗西尼罗病毒多抗的检出下限达1∶204 800。结论利用特异性抗原初步建立了检测西尼罗病毒抗体的ELISA方法。; 任瑞文唐博恒骆康杰张新军胡文龙梁克峰; 关键词：西尼罗病毒抗原表位原核表达 ELISA

登革2型病毒特异性抗原片段的筛选及验证: 2012年; 目的筛选、鉴定登革2型病毒特异性抗原,为进一步研究其生物学功能奠定基础,并利用纯化抗原建立检测登革2型病毒抗体的ELISA方法。方法分别利用DNAStar及ANTHEPROT软件对登革病毒1-4型、流行性乙型脑炎及黄热病毒M、E蛋白进行分析,分析登革2型病毒型特异性抗原表位,并参考GenBank中的序列信息进行比对,分析其在不同登革2型病毒株中的保守性。然后选择预测得分值较高的表位,利用pET32a原核表达系统进行原核表达,Western blotting验证其免疫学反应特异性,特异性片段经亲和层析纯化后,包被ELISA微孔板,并对ELISA反应条件进行系统优化。结果经系统的生物信息学分析,初步预测获得登革2型病毒特异性抗原表位8个,并对其中得分值较高的6段进行了高效表达,经Western blotting分析,获得登革2型病毒特异性抗原片段1段。经纯化后作为检测用抗原,建立了检测登革2型病毒抗体的ELISA方法。初步应用表明,所建立方法具备良好的特异性,可检测1～200倍稀释的患者血清,S/N比值均在10以上。结论获得登革2型病毒特异性抗原片段1段,并建立检测登革2型病毒抗体的ELISA方法。; 任瑞文唐博恒张培胡文龙洪文艳刘建伟; 关键词：登革2型病毒抗原表位原核表达 ELISA

黄热病毒特异性抗原片段的筛选与鉴定被引量：2: 2013年; 目的通过系统的生物信息学分析和实验验证,筛选黄热病毒的特异抗原片段,为免疫诊断试剂的研制奠定基础。方法分别利用DNAStar及ANTHEPROT软件对黄热病毒蛋白进行分析,参考亲水性、抗原性、可塑性、表面可及性及二级结构信息,对黄热病毒可能的共有及特异性抗原表位进行系统的预测分析,分析其在不同毒株中的保守性,并对预测得分值较高的抗原区域进行RT-PCR扩增,利用pMal-c2x原核表达系统进行原核表达,Western blot验证其免疫学反应原性,检测阳性抗原片段经亲和纯化后,包被ELISA微孔板,进一步验证其免疫学反应特异性及检测敏感性。结果其中27段抗原片段获高效表达,经Western blot筛选及ELISA进一步验证,原核表达抗原片段YFV22表现良好特异抗,可检测低至1∶12 800倍稀释的黄热病毒多克隆抗体,与所试其他参考病毒多克隆抗体无交叉反应。结论经系统筛选、验证,获黄热病毒特异性抗原片段1段,为其免疫学诊断试剂的研制奠定了基础。; 胡文龙唐博恒任瑞文李瑞生沓世远马美茵杨虹梁克峰; 关键词：黄热病毒抗原表位原核表达 ELISA

稳定表达人SidT2基因细胞系的建立及其dsRNA转运功能的研究: 2013年; 目的:构建稳定表达人SidT2基因的BHK及MDCK细胞系,探讨SidT2基因过表达与细胞转运双链RNA(dsRNA)能力的关系。方法:根据人SidT2基因序列设计引物,克隆其编码区序列,经双酶切后与pEGFP-N3载体连接,构建其真核表达载体,分别瞬时转染BHK及MDCK细胞,并使用G418筛选稳定表达细胞系;在此基础上,体外转录合成绿色荧光蛋白(GFP)dsRNA,以GFP基因为报告基因,进一步分析过表达人SidT2基因对BHK及MDCK细胞转运dsRNA能力的影响。结果:经基因克隆、酶切、连接后,构建了人SidT2基因真核表达载体pEGFP-SidT2;经瞬时转染及G418筛选,获得稳定过表达人SidT2基因的BHK及MDCK细胞系,实时荧光定量RT-PCR分析表明,其SidT2基因转录水平分别提高71、64.5倍;稳定表达SidT2基因后,在培养液中添加GFP dsRNA,GFP荧光强度较对照细胞分别降低88.1%、73.7%,表明稳定表达SidT2基因的BHK、MDCK细胞转运dsRNA的能力显著增强。结论:构建了稳定表达人SidT2基因的BHK及MDCK细胞系,SidT2基因过表达可显著提高外源性dsRNA的转运能力。; 任瑞文张新军唐博恒张培洪文艳刘建伟; 关键词：真核表达细胞转运双链RNA

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广州市科技计划项目(2010Y1-C151)