国家自然科学基金(39370272)
- 作品数：6 被引量：23H指数：2
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- 相关机构：解放军第307医院军事医学科学院更多>>
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- 新霉素耐药基因(Neo^R)的整合与表达并不改变人乳癌细胞(MDA)的原有生物学特性
- 1999年
- 目的：通过对比ＭＤＡ－ ＮｅｏＲ 与ＭＤＡ 人乳癌细胞的生物学特征，阐明原核标志基因ＮｅｏＲ 的长期稳定整合与表达是否对乳癌细胞原有的生物学特性产生影响。方法：对已建立且证实表达ＮｅｏＲ 基因＞ ６ 个月的７ 株ＭＤＡ－ＮｅｏＲ 细胞系进行Ｇ４１８ 抗性、表面抗原、细胞倍增时间、细胞周期、肿瘤细胞集落形成及裸鼠体内成瘤能力的检测。结果：ＭＤＡ－ ＮｅｏＲ 细胞对高浓度的Ｇ４１８ 仍产生抗性并表达Ｎｅｏ Ｒ 基因；其细胞倍增时间、Ｓ 期分数、肿瘤细胞体外集落形成率与ＭＤＡ 无明显区别（ Ｐ＞ ０－０５） ；角蛋白ＣＫ１９ 与表面膜抗原ＥＭＡ 的表达在两组是等同的；并且ＭＤＡ－ ＮｅｏＲ ７ 细胞系在裸鼠体内的成瘤能力与ＭＤＡ 细胞也是相似的。结论：外源标志基因ＮｅｏＲ 的长期稳定整合与表达对ＭＤＡ
- 郭斯启奚永志宋三泰金荔陈兴国孔繁华
- 关键词：新霉素耐药基因
- 体外培养扩增的人脐血CD34^+细胞形成HPP-CFC的能力被引量：1
- 2000年
- 目的 :评价CD34 +细胞体外扩增时高增殖潜能集落形成细胞 (HPP CFC)的变化。方法 :利用mini MACS分离脐血CD34 +细胞 ,流式细胞仪 (FACS)测定细胞纯度 ( 86%～ 95% )。应用含rhSCF、rhIL 3、rhIL 6和rhGM CSF的培养体系扩增CD34 +细胞。分别于培养的第 1,2和 4周收取细胞进行HHP CFC测定 ,测试体系为含重组人SCF、GM CSF、IL 3、IL 6、EPO等细胞因子的半固体甲基纤维素。结果 :测试体系中加入单个细胞因子不能产生HPP CFC ,含rhIL 3和rhGM CSF体系产生的集落小且主要为巨噬细胞集落 ,由所有因子组成的体系产生的集落大而致密 ,包含粒系 3种类型。此外 ,尽管细胞总数显著增加 ,扩增的CD34 +细胞HPP CFC形成率随培养时间的延长而减少。结论 :本方法显示 ,CD34 +细胞体外扩增中可以保持HPP CFC数量。
- 李秀森郭子宽刘晓丹侯春梅张毅郭宁毛宁
- 关键词：脐带血CD34^+细胞细胞因子体外培养
- CD34^+造血细胞免疫磁性高效富集仪CMSI-100的研制及应用被引量：2
- 2002年
- 根据免疫磁性分离原理 ,选用能产生高磁场强的磁性材料钕铁硼 ,其核心是将其设计成由低碳钢间隔的 4块钕铁硼 ,并且使每块钕铁硼的规格必须限制在 3.5cm× 2 .0cm× 0 .3cm ,以确保每块钕铁硼平面所具有的磁场强度平均可达 2 70 0高斯。当所切磨的钕铁硼规格达不到该标准时 ,由此产生的磁场强度 >2 70 0高斯或 <2 70 0高斯 ,对CD34+造血细胞的分离效果均不理想。经对人正常骨髓CD34+ 造血细胞的免疫磁性分离证实 ,采用CMSI 10 0富集后的CD34+ 造血细胞纯度平均 >90 % ,细胞活力 >95 % ,达到国际上最好水平 ,其性能完全可与国际通用先进的IsolexTM5
- 奚永志张双喜孙玉英郭斯启刘楠屠敏孔繁华
- 关键词：免疫磁性分离钕铁硼磁场强度CD34^+造血细胞
- 人正常骨髓CD34^+造血干/祖细胞的超微结构被引量：5
- 1997年
- 时至今日,人类究竟有无造血干细胞(HSC)已不再是争论的焦点,对该问题的答案是肯定的.目前所认识HSC的某些特性已远非简单的高度自我更新与多向分化这一定义就能概括其全貌.此概念仅基于细胞的功能,而无任何形态学的特征.并且在80年代中期致力于造血干/祖细胞(HSC/HPC)形态学或本质的探索还被认为是“浪费时间”,喻作恰似以生化或电子显微镜手段是不可能证明细胞因子的生物活性一样.
- 奚永志孔繁华张双喜江飞子唐佩弦魏文
- 关键词：祖细胞超微结构CD34骨髓细胞
- CD_(34)分子及其单克隆抗体应用被引量：14
- 2003年
- 任素萍奚永志
- 关键词：单克隆抗体CD34
- 人CD34抗原胞外区cDNA的克隆、真核表达载体的构建及在基因免疫制备CD34单克隆抗体中的初步应用被引量：1
- 2003年
- 目的 克隆含编码人CD34抗原胞外区的cDNA ,并构建其真核表达载体 ,探讨基因免疫制备抗人CD34单克隆抗体的可行性。方法 从KG 1a细胞提取总RNA ,RT PCR扩增含编码人CD34抗原胞外区的cDNA并酶切测序鉴定 ,构建其真核表达载体pcD NA3 1 CD34。选取 4～ 6周龄的BALB/c小鼠 12只 ,随机分为 3组 ,预先在股四头肌注射 2 5 %的蔗糖溶液 5 0 μl,然后在相同部位分别注射PBS空白对照、PBS稀释的空载体pcDNA3 1以及PBS稀释的pcDNA3 1 CD34,每 2周 1次共 3次。免疫结束后定期FACS检测鼠尾静脉血抗人CD34抗体产生情况。结果 所扩增的人CD34抗原胞外区cDNA全长 886bp ,扩增片段大小与理论值相符 ,测序结果与文献报道完全一致 ,并且在 5′端引入HindⅢ酶切位点 ,3′端引入EcoRI酶切位点及终止密码TGA。随后将其定向插入真核表达载体 pCD NA3 1中 ,称之为pcDNA3 1 CD34,经阳性克隆筛选、酶切鉴定证实 pcDNA3 1 CD34真核表达载体构建成功。FACS检测结果表明 ,用pcDNA3 1 CD34真核表达载体免疫的小鼠中仅 1/ 4只在免疫结束后的第 2～ 6周有较低滴度的CD34抗体产生 ,其余 3只血清中均未检测到CD34抗体。结论 成功地构建了人CD34抗原胞外区cDNA的真核表达载体 pcDNA3 1 CD34。
- 孙玉英奚永志王丽英崔建武刘楠梁飞
- 关键词：抗原CD34单克隆基因免疫
