国家自然科学基金(81000710)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体的制备及活性分析被引量：1
- 2013年
- 目的在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体,并对其活性进行分析。方法将具有保护活性的鼠源单克隆抗体(mAb)的轻、重链可变区基因,分别与人κ型轻链恒定区、IgG1重链恒定区基因融合后构建轻重链嵌合抗体基因,克隆到T载体上进行序列测定确证。然后分别构建含有嵌合轻、重链基因的表达载体pcDNA3.1-L和pcDNA3.1-H。构建完成的表达载体电转化CHO-S细胞,G418筛选获得稳定表达细胞株。扩大培养、收集上清用MabSelect Sure亲和层析填料纯化。纯化后的抗体进行SDS-PAGE、ELISA、Western blot分析以及小鼠体内保护活性评价。结果 PCR鉴定及测序结果表明pcDNA3.1-H和pcDNA3.1-L构建完成,序列正确;Dot blot结果表明获得表达量高的稳转株细胞;SDSPAGE及Western blot法证明抗体纯化获得成功,ELISA结果表明该抗体具有结合与F1抗原的活性;小鼠体内攻击实验表明其保护活性与鼠mAb大致相同。结论成功在CHO-S细胞中表达了具有中和活性的抗F1人-鼠嵌合抗体。
- 张金龙任军于婷宋小红付广成刘树玲张章李冰李建民
- 关键词：鼠疫F1嵌合抗体中国仓鼠卵巢细胞
- 无标签鼠疫耶尔森菌Ⅴ抗原突变体在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性分析
- 2012年
- 目的:在大肠杆菌中表达、纯化无标签鼠疫耶尔森菌低钙反应V抗原突变体,并对其免疫原性进行研究。方法:采用融合PCR方法将Ⅴ抗原基因中编码半胱氨酸的碱基缺失突变,将获得得Ⅴ抗原突变体基因克隆到原核表达载体pET32a(+)后转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达并进行柱层析纯化,纯化产物以Western印迹进行鉴定并免疫BALB/c小鼠,通过ELISA检测免疫血清效价。结果:目的蛋白在大肠杆菌中获得了可溶性高表达,经三步柱层析后纯度高于95%,经Western印迹检测可与野生型V抗原单克隆抗体特异性结合,免疫小鼠后获得高效价免疫血清。结论:获得了无标签的鼠疫耶尔森菌Ⅴ抗原突变体蛋白,并证实其具有免疫原性,将对V抗原结构和功能的研究提供帮助。
- 王猛任军张金龙李浩蔡晨光李建民陈薇
- 关键词：鼠疫耶尔森菌表达纯化免疫原性
