广西大学科学技术研究重点基金(2003ZD01)
- 作品数：8 被引量：29H指数：4
- 相关作者：罗廷荣陆芹章杨坚李晓宁熊艳芸更多>>
- 相关机构：广西大学更多>>
- 发文基金：广西大学科学技术研究重点基金广西壮族自治区科技攻关计划广西壮族自治区科学研究与技术开发计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 广西巴马小型猪IFN-Y基因的克隆和序列分析被引量：5
- 2005年
- 将猪外周淋巴细胞进行体外培养 ,在刀豆球蛋白A(conA)刺激培养 1 5h后 ,提取培养淋巴细胞总RNA ,应用RT PCR技术扩增广西巴马小型猪Y 干扰素 (IFN Y)基因 ,并克隆到PMD1 8 T载体上 ,进行测序。测序结果表明 ,扩增的cDNA全长 558个碱基 ,包含 50 1个碱基开放阅读框架 ,编码 1 66个氨基酸 ,分子量为 1 9.42ku。此cDNA与人、牛、山羊、马、狗和鼠的IFN Y基因核苷酸比较 ,同源性分别为 74.9% ,86.5% ,86.9% ,81 % ,58.7%和 63 .3 % ,与其它猪种的IFN Y基因核苷酸比较同源性为 1 0 0 %。
- 韦祖樟黄伟坚卢桂娟孙文博颜建华罗廷荣陆芹章
- 关键词：巴马小型猪测序
- 猪Fas基因的克隆及序列分析被引量：4
- 2006年
- 从PK-15细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出猪F as基因,将其克隆到PM D 18-T载体上,进行序列分析。结果表明,克隆的猪F as基因序列与G enB ank上登录的猪F as基因同源性为100%,与人、牛、羊的F as基因核苷酸及推导的氨基酸序列同源性分别为73.4%、79.2%、76.4%和56.2%、67.0%、64.6%。F as蛋白胞内区的死亡域,其氨基酸序列在猪、人、牛和羊的F as基因中呈现较高的同源性。
- 李军李晓宁杨坚罗廷荣
- 关键词：FAS克隆
- 广西巴马小型猪白细胞介素17基因的克隆及其序列分析被引量：4
- 2005年
- 用ConA刺激巴马小型猪的外周血淋巴细胞,22 h后提取总RNA,用RT-PCR方法成功扩增出巴马小型猪白细胞介素17(IL-17)基因,将其克隆到pMD18-T载体上,进行序列分析。结果表明,克隆的IL-17的基因序列与GenBank上登录的猪IL-17基因序列同源性为99.4%。
- 熊艳芸谢琪辉罗廷荣陆芹章廖素环
- 关键词：白细胞介素17克隆外周血淋巴细胞
- 广西巴马小型猪IL-4和IL-10基因的克隆和序列分析被引量：6
- 2005年
- 为研究猪白细胞介素4(IL-4)和白细胞介素10(IL-10)在机体免疫应答中的作用,从ConA刺激的巴马小型猪的外周血淋巴细胞提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出IL-4和IL-10基因,将其分别克隆到PMD18-T 载体上,进行序列分析.结果表明,克隆的IL-4和IL-10基因的核苷酸和氨基酸序列与GenBank上登录的其它猪种的IL-4和IL-10基因的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为98.8%～100%、97.0%～99.3%和99.2%、97.7%.
- 李军熊艳芸梁湘廖素环罗廷荣
- 关键词：白细胞介素4白细胞介素10基因克隆广西巴马小型猪
- 正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库部分EST序列的电子克隆及验证
- 2011年
- 【目的】探讨从EST序列电子克隆全长基因序列的有效性,为今后快速克隆和研究免疫相关基因提供新方法。【方法】以正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库测序所得的EST序列作为起始材料,应用生物信息库对文库中的部分EST序列进行电子克隆,并用RT-PCR验证其准确性。【结果】电子克隆正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库序列,共获得20条片段重叠群(Contigs),经基因注释,证实其均得到了有效延伸,具有完整开放阅读框(ORF),其中已知的猪基因序列14条,猪新基因序列6条;从已知猪基因序列和未知猪新基因序列中各抽取1条感兴趣序列(ESTcontig110和ESTcontig133)进行全长cDNA预测,发现电子克隆所得序列ESTcontig110和ESTcontig133的预期扩增片段(ORF)与实际扩增片段(ORF)基本一致,核苷酸相似性在98.0%以上,氨基酸相似性在93.0%以上。而对ESTcontig133的ORF序列(猪的60S核糖体蛋白L18a亚基)进行基本特性及结构预测,发现ORF133蛋白为非分泌型蛋白,由6个折叠和6个螺旋结构组成,含有8个不同的磷酸化位点。【结论】从EST序列电子克隆全长基因是可行的,为今后快速克隆和研究免疫相关基因提供了参考。
- 李晓宁苏丽娟尹珊李晓泉章民李延生孙石开蔡新斌杨坚罗廷荣
- 关键词：外周血淋巴细胞电子克隆
- 健康猪扁桃体和流产胎儿分离猪瘟病毒E2基因的序列分析被引量：7
- 2008年
- 用RT-PCR技术对来自广西不同地区的120份健康猪扁桃体和84份流产胎儿材料进行猪瘟病毒检测,得到9份阳性病料,选取其中1份健康扁桃体和5份流产胎儿阳性材料进行猪瘟病毒E2基因克隆测序,应用DNAstar序列分析软件对6个广西毒株与HCLV、Shimen等国内外毒株进行同源性比较。结果显示,广西毒株之间核苷酸和推导的氨基酸同源性分别为93.1%-99.6%和86.3%-99.2%,6个广西毒株E2基因的所有Cys位点都没有变异,可推测CSFV E2蛋白在抗原结构方面依然保持很高的稳定性;与标准毒株和疫苗毒相比,广西毒株在具有中和特性的B、C区域内721和724氨基酸位点发生了变异;遗传进化树分析表明,猪瘟病毒主要分为两大群和一个另类,广西株皆属于基因群,与我国的主要参考毒株HCLV、Shimen属于同一基因群,说明广西CSFV株与HCLV、Shimen变异不大。
- 袁朝霞甘浪帆余艳娟张远波张红云宁艳红韩改会陆芹章罗廷荣
- 关键词：猪瘟病毒E2基因同源性
- 从母猪白细胞检出猪瘟病毒被引量：1
- 2008年
- 本研究应用RT-PCR对广西不同地区的老母猪白细胞172份、猪流产胎儿与死胎162份、新生仔猪33份和120份健康猪扁桃体进行猪瘟病毒检测。检出母猪白细胞阳性2份、流产胎儿与死胎阳性12份,健康猪扁桃体阳性1份和新生仔猪阳性3份。对其中1份母猪白细胞阳性材料、1份健康猪扁桃体阳性材料和4份流产胎儿材料进行猪瘟病毒E2基因的测序分析。结果显示,来自母猪白细胞的GXXJB1与HCLV、Shi-men株的核苷酸同源性分别为96.9%和94.0%,推导的氨基酸同源性分别为95.9%和94.2%;与其他的广西毒株的核苷酸同源性为81.1%～99.5%,推导的氨基酸同源性为89.6%～99.2%。根据遗传进化树分析,样品GXXJB1属于基因Ⅰ群。
- 蒋毅立韦柳青郭冬冯励陆芹章罗廷荣
- 关键词：猪瘟病毒E2基因同源性
- 正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库构建及EST初步分析被引量：2
- 2011年
- 【目的】构建猪淋巴细胞基因文库,初步绘制正常猪外周血淋巴细胞的基因表达谱,为进一步筛选免疫相关基因提供平台。【方法】以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与质粒载体连接后转化大肠杆菌,进一步扩增后,获得猪外周血淋巴细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合,并进行序列分析和注释。【结果】构建了正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库,获得库容量为1.2×106PFU/mL、重组率为93.3%、85%插入片段处于750～2000bp的高质量文库;随机测定1100条ESTs,经拼接和聚类,获得152条高表达的基因重叠群(Contigs)和619条低表达基因——单拷贝的EST(Singletons);经序列比对分析,发现23.3%ESTs为与任何物种都没有匹配的新基因,75.9%ESTs为与猪没有匹配的新基因。用GO数据库对获得的EST进行基因功能分类和KEGG路径图分析,发现丝裂原活化蛋白激酶途径(Mi-togen-activatedproteinkinase,MAPK)、钙信号通路、胰岛素信号通路、脂肪细胞因子信号通路、Toll-like受体信号通路、B细胞受体信号通路和T细胞受体信号通路的基因均有较高表达。【结论】大部分的猪外周血淋巴细胞基因尚未被分离和鉴定出来,但这些基因mRNA转录和表达丰度均较高,且在猪外周血淋巴细胞中起着非常重要的作用。
- 李晓宁孙石开蔡新斌杨坚苏丽娟章民李晓泉尹珊李延生罗廷荣
- 关键词：外周血淋巴细胞CDNA文库
