国家自然科学基金(31000897)
- 作品数：5 被引量：15H指数：2
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- 相关机构：浙江农林大学学研究院浙江省丽水市农业局更多>>
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- ‘无籽’瓯柑CsLTP和CsLOX基因的克隆与表达分析被引量：2
- 2014年
- 采用同源序列法,结合cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术,克隆获得‘无籽’瓯柑Citrus suavissima‘Seedless’脂转移酶基因CsLTP和脂氧合酶基因CsLOX的全长cDNA序列;CsLTP cDNA全长667 bp,1个开放阅读框,编码215个氨基酸,与脐橙C.sinensis,粗柠檬C.jambhiri的脂转移蛋白的相似性分别为95%和60%;CsLOX cDNA全长2 915 bp,1个开放阅读框,编码895个氨基酸,与粗柠檬、美洲黑杨Populus deltoids的相似性分别为99%和51%。荧光定量聚合酶链式反应(PCR)表明:CsLTP和CsLOX的表达量均在‘无籽’瓯柑花粉粒形成期开始显著下降,并显著低于普通瓯柑Citrus suavissima。‘无籽’瓯柑花粉发育过程中油脂的转运及氧化的异常,可能成为‘无籽’瓯柑花粉败育的原因之一。
- 张敏刘志辉宋雪恩朱咪咪党婉誉颜福花张迟
- 关键词：园艺学花粉败育荧光定量PCR
- ‘无籽瓯柑’CsRAD51基因的克隆及在花粉发育过程中的表达分析被引量：1
- 2017年
- ‘无籽瓯柑’的雄性不育主要表现为花粉败育,起始于小孢子母细胞减数分裂时期。本研究克隆了‘无籽瓯柑’减数分裂相关基因Cs RAD51,并采用荧光定量PCR检测其在瓯柑及‘无籽瓯柑’中的表达差异。结果显示,Cs RAD51基因的c DNA全长1210 bp,含有一个1029 bp的ORF区;其编码的蛋白质属于疏水性蛋白,分子量45740.1D,氨基酸数388,原子总数6 555,等电点10.20。同源性比对发现,‘无籽瓯柑’Cs RAD51的氨基酸序列与甜橙、麻疯树、油棕、黄瓜、黑杨等的RAD51蛋白高度同源,分别达99%,98%,98%,98%,98%。RT-PCR结果显示‘无籽瓯柑’Cs RAD51在小孢子母细胞、四分体以及单核花粉粒时期的相对表达量显著高于瓯柑。Cs RAD51的过量表达可能影响了DSBs的同源重组修复,致使‘无籽瓯柑’小孢子母细胞时期减数分裂异常。
- 吴莹莹张迟陈高峰孙靳俭朱咪咪张敏
- 关键词：雄性不育减数分裂RAD51
- ‘无籽’瓯柑小孢子母细胞减数分裂特性基因RAD51和MS1的表达差异分析被引量：1
- 2016年
- ‘无籽’瓯柑Citrus suavissima‘Seedless’是野生型瓯柑Citrus suavissima的芽变,其花粉完全败育,败育起始于小孢子母细胞减数分裂形成四分体时期。研究‘无籽’瓯柑小孢子母细胞减数分裂异常的分子机制,有利于深入认识果树芽变的发生机制。随机选择"无籽"瓯柑和瓯柑各3株,根据花蕾直径采集花粉母细胞时期(Ⅰ),四分体时期(Ⅱ),单核花粉粒时期(Ⅲ),双核花粉粒时期(Ⅳ)及花粉粒成熟期(Ⅴ)共5个时期的花蕾并分离花药,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)分析减数分裂特性基因RAD51和MS1的相对表达量,3次重复。通过SPSS 16.0的最小显著差法(LSD)在0.01水平上进行各样品间的相对表达量差异分析。结果表明:RAD51和MS1基因的表达高峰均集中在第Ⅰ时期和第Ⅱ时期,且此时花药中的相对表达量均极显著(P<0.01)高于花蕾。第Ⅰ时期花药中,‘无籽’瓯柑RAD51的相对表达量为瓯柑的3.7倍,MS1可达300倍;但同时期花蕾中,RAD51的相对表达量仅1.1倍,MS1为140.0倍。‘无籽’瓯柑RAD51基因在第Ⅰ时期和第Ⅱ时期的相对表达量极显著(P<0.01)高于瓯柑,说明‘无籽’瓯柑小孢子母细胞和四分体时期的细胞内均存在DNA受损现象;‘无籽’瓯柑MS1基因在第Ⅰ时期的相对表达量极显著(P<0.01)高于瓯柑,但第Ⅱ时期极显著(P<0.01)低于瓯柑,推测‘无籽’瓯柑败育花粉的形成与MS1基因表达紊乱引起油脂分泌、转运异常密切相关。
- 朱咪咪张迟常爱玲党婉誉周彩红俞狄虎吴莹莹张敏
- 关键词：园艺学减数分裂MS1
- ‘瓯柑’及其无子突变体花粉发育的细胞学观察被引量：12
- 2014年
- 【目的】观察‘瓯柑’及其无子突变体的花粉形态和花药发育过程,探讨‘无子瓯柑’花粉败育的时期和方式。【方法】以雄性不育的‘无子瓯柑’和可育的有子瓯柑为试材,采用半薄树脂切片、扫描电镜、透射电镜等方法对其花药发育过程和花粉形态进行观察。【结果】有子瓯柑花粉粒饱满,‘无子瓯柑’花粉粒多干瘪、畸形。‘无子瓯柑’小孢子母细胞形成期正常,在四分体时期开始出现异常,在单核期出现明显异常,虽然能形成花粉壁,但小孢子细胞质收缩、解体,最终只剩余空瘪的花粉壳。在成熟花粉粒时期,‘无子瓯柑’花药的绒毡层附近有大量的脂类物质残存,营养物质未能被花粉粒充分利用,有子瓯柑绒毡层附近无脂类物质残存,营养物质被花粉粒利用充分。【结论】‘无子瓯柑’花粉母细胞正常,花粉败育开始于小孢子母细胞减数分裂期至四分体时期,小孢子母细胞减数分裂过程的不正常是导致其花粉败育的主要原因。
- 张迟张敏朱铨刘志辉颜福花吴连海徐象华周晓音陈翔
- 关键词：花粉败育小孢子母细胞
- ‘无子瓯柑’CHS基因家族的克隆和表达分析被引量：2
- 2019年
- 为研究查尔酮合成酶基因(CHS)家族在‘无子瓯柑’Citrus suavissima‘Seedless’雄性不育发生过程中的作用,以克里曼丁橘Citrus clementina基因组数据库为参照,在‘无子瓯柑’和瓯柑Citrus suavissima的转录组和蛋白质组测序结果中筛选出4个CHS同源差异表达基因,并对其克隆和表达量分析,对克里曼丁橘CHS基因家族成员进行生物信息学分析。结果表明:‘无子瓯柑’和瓯柑CHS基因编码区核苷酸序列相似度达98%以上。小孢子母细胞发育各时期CHS基因表达量在瓯柑和‘无子瓯柑’间差异显著。与瓯柑相比,‘无子瓯柑’小孢子母细胞时期Ciclev10005133m,Ciclev10030093m和Ciclev10015535m的表达量显著下调;减数分裂时期Ciclev10005133m,Ciclev10001405m和Ciclev10015535m的表达量显著下调;四分体时期Ciclev10001405m和Ciclev10030093m的表达量显著减少。在花粉粒成熟时期的花蕾中,Ciclev10001405m与Ciclev10005133m在花药中特异性表达。CHS同源基因在花药不同时期中的差异表达可能是‘无子瓯柑’花药发育异常的重要原因,并最终导致‘无子瓯柑’雄性不育。
- 俞狄虎张迟柯甫志敬露阳顾雪娇吴宝玉张敏
- 关键词：园艺学查尔酮合成酶雄性不育基因家族
