国家自然科学基金(30871755)
- 作品数：3 被引量：15H指数：2
- 相关作者：王弘孙远明董洁娴沈玉栋徐振林更多>>
- 相关机构：华南农业大学江西农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省科技厅科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学理学轻工技术与工程农业科学更多>>
- 抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库的构建
- 2010年
- 目的:构建抗呋喃它酮代谢物(AMOZ)的衍生物噬菌体单链抗体库。方法:从分泌抗AMOZ的单克隆抗体的杂交瘤细胞系(BC3-E8)中提取总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计通用简并引物,PCR扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL)。经重叠延伸PCR(SOE-PCR),将VH和VL基因用编码(G1y4Ser)3的linker随机拼接成单链抗体(scFv)基因,然后将其克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)TG1感受态细胞,经辅助噬菌体M13K07超感染,建立噬菌体单链抗体库。随机挑取10个阳性克隆,经PCR和双酶切鉴定,并测序。登陆DNAMAN软件对序列进行分析、比对。结果:成功扩增VH、VL及scFv基因,并得到库容为1.2×106的噬菌体抗体库,噬菌体的滴度为2.0×1010PFU,PCR鉴定及双酶切鉴定文库重组率较高,软件对序列比对结果显示,scFv基因全长序列之间差异为8.38%,VH序列差异为3.68%,VL序列差异为14.34%,且序列差异多集中在CDR抗原结合区域对应的核酸序列上。结论:已构建抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库,为进一步富集筛选并表达抗AMOZ的衍生物的单链抗体提供参考。
- 罗翠红王弘刘细霞沈玉栋孙远明黄佳佳张宏斌
- 关键词：单链抗体噬菌体展示
- 重组乙酰胆碱酯酶的表达及其分子进化研究进展被引量：3
- 2012年
- 乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是酶抑制法检测农药残留的核心试剂。但天然提取的AChE存在含量低、纯化困难、稳定性差等不足,因此,高性能的重组AChE制备成为研究学者关注的热点。文中综述了重组AChE的表达、和分子进化等方面的研究成果,并指出酶定向进化策略与表面展示技术结合是重组AChE活性改造的未来趋势。
- 董洁娴李振峰雷红涛何永盛王弘孙远明
- 关键词：农药残留
- 虾肉中呋喃它酮代谢物化学发光酶免疫分析方法的建立被引量：12
- 2012年
- 采用对碘苯酚增强的HRP-鲁米诺-H2O2化学发光体系,建立了虾肉中呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮(AMOZ)残留的间接竞争化学发光酶免疫分析(icCLEIA)检测方法。检测所用抗体是基因重组的抗AMOZ衍生物单链抗体。优化的icCLEIA最佳工作条件为:AMOZA-OVA包被浓度62.5μg/L,抗AMOZ衍生物单链抗体最佳稀释度为1∶10,竞争免疫反应时间45 min,HRP酶标记羊抗鼠抗体最佳稀释度为1∶10000,孵育时间50 min。本方法的IC50为1.38μg/L;灵敏度为0.09μg/L;线性范围为0.26～9.08μg/L(IC20～IC80);批内和批间相对标准偏差均小于15%;抗AMOZ衍生物单链抗体与其它硝基呋喃类抗生素及其代谢物均没有交叉反应,特异性良好。4个不同添加量的AMOZ加标样品的平均回收率分别为72.2%,73.4%,72.6%和78.6%。与HPLC-MS/MS法测定值进行比较发现,两种方法相关性良好(R2=0.9997)。本方法可用于水产品中AMOZ残留的快速检测。
- 杨武英董洁娴沈玉栋杨金易王弘徐振林杨星星孙远明
- 关键词：刀额新对虾辣根过氧化物酶
