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Asia 1型口蹄疫病毒抗原表位突变株的构建及其生物学特性分析: 2015年; 为了研制口蹄疫抗原表位突变标记疫苗,本研究以含有Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)c DNA全长的感染性克隆p Asia 1-FMDV作为骨架,将3D蛋白中第27位氨基酸的H和31位的氨基酸N分别突变成Y和R,从而突变3D蛋白的一个抗原表位,将构建的带有突变表位的重组质粒转染BHK-21细胞,成功拯救出一株突变FMDV。经比较后发现,重组病毒的生物学特性与亲本毒株相似。病毒中和试验结果显示,抗重组病毒的血清与亲本病毒有良好的反应性。Western blotting结果表明重组病毒诱导的抗体能与突变的表位合成肽反应而不与野生型病毒的表位合成肽发生反应,从而区分重组病毒与亲本病毒。综上所述,这株抗原表位突变FMDV有望作为口蹄疫标记疫苗候株进一步评估。; 张岩胡永浩杨帆杨波王松豪朱紫祥郑海学; 关键词：口蹄疫病毒

羊口疮病毒B2L基因的原核表达、纯化及反应原性分析被引量：3: 2016年; 【目的】克隆和表达羊口疮病毒(ORFV)的B2L基因,进而纯化并分析其反应原性.【方法】根据GenBank已发表的ORFV(GQ328006)的B2L基因序列设计一对特异引物,以提取阳性临床样品的总DNA为模板,通过PCR方法获得ORFV的B2L基因,将该基因片段连接至原核表达载体pET-30a(+)上,获得重组质粒pET-30a(+)-B2L.将此重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,挑取单克隆进行扩大培养,经IPTG诱导获得重组融合蛋白.用SDS-PAGE和Western-blotting对表达的目的蛋白进行分析.【结果】成功获得重组质粒pET-30a(+)-B2L,读码框正确.获得了43ku的表达产物,与预期目的蛋白大小相符;纯化后的目的蛋白能与ORFV阳性血清发生特异反应.【结论】成功对ORFV-B2L蛋白进行了原核表达,且纯化后蛋白具有良好的反应原性.; 石正旺刘华南胡永浩郑海学; 关键词：羊口疮病毒 B2L基因原核表达纯化

口蹄疫病毒外源序列插入位点的研究进展: 2014年; 伴随着对口蹄疫病毒(FMDV)蛋白结构功能的深入研究,发现FMDV能够表达外源基因片段。通过对FMDV的基因进行改造和修饰研究,进而实现了不同应用目的,如提高病毒滴度、引入标记、提高免疫应答、降低致病性等。文中主要从FMDV接受外源基因插入位点角度来介绍现阶段关于FMDV表达外源基因相关进展。; 张岩胡永浩杨帆郑海学; 关键词：口蹄疫病毒外源基因插入位点

启动子p7.5/p11在山羊痘病毒和羊口疮病毒中的启动功能验证被引量：3: 2014年; 为验证痘苗病毒启动子p7.5/p11在山羊痘病毒(GPV)和羊口疮病毒(ORFV)中的启动功能,本研究通过p TKpp质粒以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,构建含有p7.5/p11-GFP表达盒的重组质粒p TKp-gpt-i-GFP-p和p TKpp-H-i-GFP,将其利用脂质体转染预感染GPV或ORFV的羔羊睾丸(LT)细胞中。结果显示,两种重组质粒转染LT细胞24 h后均可以检测到绿色荧光,表明p7.5/p11均能够有效的启动目的蛋白的瞬时表达。同时,构建用于GPV重组的通用转移载体p TKfpgigp,将含有小反刍兽疫病毒(PPRV)的F基因的重组质粒p TKfpgigp-F与GPV共转染LT细胞,经同源重组制备表达PPRV F基因的重组GPV(r GPV)。结果显示,r GPV在感染的LT细胞中F基因能够稳定表达。结果证明,痘苗病毒启动子p7.5和p11均能够被GPV或ORFV编码的RNA聚合酶所识别,从而启动外源目的基因的表达。因此,p7.5和p11可以用于表达外源基因的GPV或ORFV重组病毒的构建。; 李继东朱学亮李辉骆学农窦永喜才学鹏; 关键词：山羊痘病毒羊口疮病毒启动子 P11

RNA病毒阻断RIG-I样受体识别dsRNA机制研究进展被引量：6: 2014年; RIG-I样受体(RIG-I-like receptors,RLRs)是一类重要的模式识别受体,其在机体抵抗病毒感染过程中发挥着至关重要的作用。RLRs通过级联放大效应,诱导I型干扰素的表达,激活干扰素通路,最终发挥抗病毒效应。而病毒为了自身长期的生存和繁殖,在长期的进化和演化过程中,不断的与机体免疫系统进行着抗衡和斗争,由此演化出了一系列的拮抗策略。RLRs主要识别5′端带有三磷酸基团的RNA(包括单链和双链RNA)和双链RNA,其在启动免疫应答过程中可以通过与病毒RNA结合而得以激活,然后招募下游分子,激活整个通路的信号转导。病毒为了阻断RLRs对病毒RNA的识别,拮抗RLRs通路的激活,进化出了非常精细的对抗策略,主要分为:躲避、伪装和攻击三种策略。了解清楚病毒拮抗RLRs抗病毒的分子机制对于研制新的抗病毒药物及发展新的抗病毒策略具有深远意义。本文主要对RNA病毒阻断RLRs识别dsRNA机制的研究进展进行综述。希望为研究不同RNA病毒拮抗RLRs分子机制提供一定的参考和依据。; 王国庆朱紫祥曹伟军刘磊郑海学; 关键词：DSRNA RNA病毒拮抗作用

凸隆病毒研究进展被引量：3: 2013年; 凸隆病毒(torovirus)作为套式病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)家族的重要成员,包括马凸隆病毒(EToV)、牛凸隆病毒(BToV)、猪凸隆病毒(PToV)和人凸隆病毒(HToV),该病毒感染人和动物,主要引起消化道和呼吸道疾病。自该病毒首次于1982年在美国Lowa州被分离得到,迄今已有30余年的研究历史,随着分子生物学和病毒分离培养技术的不断发展,病毒与其宿主间相互作用的机制也得以不断被认知,此篇综述介绍了有关凸隆病毒的最新研究进展,包括病毒的发现及分类,病毒粒子特征、基因结构及功能,引起细胞凋亡的机制,同时包含了病毒变异、血清流行病学、病理变化、诊断方法和关于研究前景的概括。; 刘华南曹伟军杨帆郑海学; 关键词：基因结构流行病学

口蹄疫反向疫苗研究进展被引量：1: 2014年; 利用反向遗传技术对口蹄疫病毒基因的改造和修饰,可以实现对疫苗种毒的生产性能、抗原匹配性、抗原稳定性、免疫应答能力、生物安全性等特征的改良,能够迅速获得预期生物学特性的疫苗候选株,进而可以减少和避免流行毒株驯化环节带来的负面影响。不仅改变了对流行毒株筛选驯化受病毒自然属性制约、费时费力、成功率低的缺陷,而且可以实现更为主动有效的疫苗毒株的设计,对整体提升疫苗品质和效力具有重大意义。本文以口蹄疫病毒为例,从改良疫苗毒株的生物学特性方面进行了综述,为相关研究提供参考和借鉴。; 杨波杨帆王松豪张岩曹伟军殷宏郑海学; 关键词：口蹄疫标记疫苗

组氨酸标签标记的口蹄疫重组病毒的制备及鉴定被引量：2: 2014年; 为了鉴定口蹄疫病毒(FMDV)插入位点并获得标记的重组病毒,本研究利用口蹄疫病毒反向遗传操作技术,在RGD基序后第9位和第10位氨基酸处(+9)引入组氨酸(His)标签,获得了含有His标签的FMDV全长cDNA克隆(命名为prAsia1-9His)。将prAsia1-9His质粒转染BHK-21细胞后,能够出现典型的细胞病变,对收获的病毒分别用RT-PCR、间接免疫荧光进行鉴定,结果证实,成功拯救了含His标签的重组病毒(命名为rAsia1-9His),该重组毒株能够稳定表达His标签。最后,比较测定了其对BHK-21细胞和乳鼠的致病性,结果表明,该重组毒株与亲本毒株(rAsia1)具有相似的生物学特性。含有标签标记的口蹄疫病毒的成功拯救,为深入研究口蹄疫病毒的致病机制以及分子标记疫苗奠定了基础。; 杨波杨帆王松豪张岩岳城郑海学殷宏; 关键词：口蹄疫标签标记疫苗

干扰素诱导蛋白鸟苷酸结合蛋白1研究进展被引量：4: 2014年; 鸟苷酸结合蛋白1(Guanylate-binding protein 1,GBP1)为一种干扰素诱导蛋白,其属于鸟苷酸结合蛋白家族的一员。GBP1在抗病原微生物与抗肿瘤等多种生物学反应中发挥着重要作用。随着对GBP1的深入研究,发现IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL1α、IL1β、TNF-α和LPS均能够诱导GBP1的表达;因此,GBP1发挥的生物学效应也越来越广泛,并逐步地被挖掘和展现出来。尤其是GBP1发挥的抗病原微生物与抗肿瘤功能受到了极为广泛的关注。本论文综述了GBP1的分子结构、生物学活性、抗病原微生物特性以及已发现的一些其他功能的研究进展,为GBP1的后续研究提供参考和依据。; 朱紫祥曹阳春曹伟军杨帆马志永郑海学; 关键词：抗病毒抗肿瘤

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国家高技术研究发展计划(2011AA10A211-1)

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