军队“十一五”科技攻关课题(06G078)
- 作品数：5 被引量：33H指数：4
- 相关作者：邹全明毛旭虎陈洪章罗萍余抒更多>>
- 相关机构：第三军医大学中国药品生物制品检定所更多>>
- 发文基金：军队“十一五”科技攻关课题军队杰出人才基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 致泻性大肠杆菌疫苗研究进展被引量：6
- 2006年
- 大肠杆菌引起的腹泻多发生在儿童及发展中国家,发展致泻性大肠杆菌疫苗具有特殊的意义。除了灭活疫苗、减毒疫苗、结合多糖疫苗和亚单位疫苗外,新近出现的DNA疫苗、转基因植物疫苗和ghost疫苗技术为疫苗的研制提供了新的思路。本文综述了目前致泻性大肠杆菌疫苗研究的新进展。
- 毛旭虎邹全明
- 关键词：大肠杆菌腹泻疫苗
- 抗肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA单克隆抗体的制备及其特性鉴定被引量：8
- 2007年
- 目的:制备抗肠出血性大肠杆菌O157:H7EspA单克隆抗体(mAb)。方法:以重组EspA蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术并且联合间接ELISA筛选只针对EspA的杂交瘤细胞株。以Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig亚类,ELISA、Western blot及免疫荧光技术鉴定抗体的免疫学特性。结果:获得3株稳定分泌抗EspA杂交瘤细胞的mAb,Ig亚型分别为IgG1κ型、IgG2aκ型、IgG2bκ型。Western blot和免疫荧光分析表明,3株杂交瘤细胞制备的mAb腹水都能特异地结合重组EspA蛋白和识别O157:H7的EspA成分。结论:成功地制备了抗肠出血性大肠杆菌O157:H7EspA的mAb,并证明了该mAb的生物学活性,为深入研究肠出血性大肠杆菌O157:H7的致病机制提供新的手段。
- 余抒罗萍陈洪章李海侠毛旭虎
- 关键词：单克隆抗体
- 抗重组志贺毒素ⅡB亚基单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定被引量：5
- 2007年
- 目的制备出高效价的抗重组志贺毒素ⅡB亚基(rStx2B)单克隆抗体。方法以融合蛋白EspA-Stx2B作为抗原,免疫Balb/c小鼠,以未免疫的Balb/c小鼠脾细胞为饲养细胞;运用细胞杂交瘤技术制备,运用间接ELISA法筛选产生针对rStx2B的单克隆抗体细胞株;体内诱生法产生腹水,饱和硫酸铵沉淀法初步纯化,再采用HiTraprProteinA柱进一步纯化,快速定性试纸鉴定McAb的Ig亚型,采用间接ELISA法相加实验鉴定抗原识别表位。结果获得3株产生针对rStx2B的单克隆抗体细胞株Stx2B-1H9、Stx2B-1H10、Stx2B-3E5,Ig亚型分别为IgG1κ型,IgG2aκ型,IgG2bκ型,亲和力常数分别为7.36×108、6.94×108、5.85×108。结论成功制备3株稳定分泌抗rStx2B的杂交瘤细胞株,产生的McAb特异性好,亲和力高,为应用这些单克隆抗体建立免疫亲和层析法纯化天然志贺毒素Ⅱ,鉴定Stx2B的表位,研究针对EHECO157:H7感染的治疗性抗体奠定了基础。
- 陈洪章邹全明罗萍毛旭虎曾浩马颖余抒曾明
- 关键词：单克隆抗体生物学特性
- 肠出血性大肠杆菌(EHEC) O157∶H7志贺毒素研究进展被引量：14
- 2007年
- 陈洪章邹全明
- 关键词：肠出血性大肠杆菌志贺毒素O157:H7O157:H7感染
- 鼠源性抗EHEC O157:H7 Stx2噬菌体Fab抗体库的构建及筛选
- 2009年
- 目的构建鼠源性抗EHEC O157∶H7 Stx2噬菌体Fab抗体库,并从中筛选特异性的抗体。方法用EHEC O157∶H7 Stx2类毒素免疫BALB/c小鼠,取脾分离淋巴细胞,提取总RNA,RT-PCR分别扩增抗体轻、重链(к和Fd)基因,经双酶切依次克隆入噬粒载体pComb3X中,电转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体M13K07进行超感染,构建抗EHEC O157∶H7 Stx2的Fab噬菌体抗体库。以纯化的Stx2为抗原进行筛选,获得抗EHECO157∶H7Stx2的特异性Fab抗体,Western blot法检测噬菌体抗体与毒素抗原的结合活性,并对所得阳性克隆进行基因序列分析。结果构建了一个库容为1.56×107的Fab抗体库,筛选出3株特异性较强的阳性克隆,其中2个可与Stx2A1亚单位抗原反应,1个可与Stx2B亚单位抗原反应。基因序列分析显示,轻、重链可变区氨基酸序列与GenBank中已注册的鼠免疫球蛋白可变区氨基酸序列同源性分别为98.5%和99.6%。结论已成功构建了鼠源性抗EHEC O157∶H7 Stx2噬菌体Fab抗体库,为进一步制备抗EHECO157∶H7Stx2的治疗性人源化抗体奠定了基础。
- 刘璐曾浩罗萍吴剑张卫军毛旭虎邹全明
- 关键词：EHECO157:H7噬菌体
