广西壮族自治区自然科学基金(0640158)
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 相关作者：谢裕安吴继宁李安娜罗小玲匡志鹏更多>>
- 相关机构：广西医科大学附属肿瘤医院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组腺病毒载体pAdBM5-GFP-hIL-2的构建及病毒滴度测定被引量：2
- 2009年
- 目的:构建重组腺病毒载体pAdBM5-GFP-hIL-2,并测定病毒滴度。方法:从Jurkat细胞中提取mRNA,设计特异性引物,通过RT-PCR法扩增hIL-2基因全编码区序列。将测序正确的片段用BglII和PmeI双酶切定向插入到pAdBM5-GFP腺病毒载体中。通过磷酸钙共沉淀法将线性化重组质粒和腺病毒骨架共转染HEK293A细胞,扩增纯化重组腺病毒,TCID50法测定重组腺病毒滴度。结果:成功构建出表达hIL-2基因的重组腺病毒载体(pAdBM5-GFP-hIL-2),获得了高滴度表达hIL-2基因的重组腺病毒。结论:重组腺病毒表达载体(pAdBM5-GFP-hIL-2)的成功构建及重组腺病毒的获得有利于进一步开展肝癌的转基因治疗研究。
- 匡志鹏李安娜罗小玲谢裕安梁安民尚俊英吴继宁
- 关键词：HIL-2重组腺病毒载体病毒滴度
- IL-2基因转染的CIK细胞联合DC对肝癌细胞的杀伤作用被引量：4
- 2009年
- 目的探讨IL-2基因转染的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)联合树突状细胞(DC)对肝癌细胞的杀伤作用。方法采用密度梯度离心法从健康人外周血中分离单个核细胞(PMBC),分别诱导CIK细胞和DC。用携带IL-2基因的重组腺病毒AdBM5-GFP-IL-2转染CIK细胞,HepG2肝癌冻融抗原冲击致敏DC,然后将转染IL-2基因的CIK细胞(IL2-CIK)与肝癌抗原致敏DC(Lysate-DC)共培养,制备肝癌抗原致敏DC激活的IL-2基因修饰的CIK细胞(Lysate-DC-IL-2-CIK)。采用MTT法检测单纯CIK、DC联合CIK(DC-CIK)、肿瘤抗原致敏DC激活的CIK(Lysate-DC-CIK)、DC激活的IL2基因转染的CIK(DC-IL2-CIK)和肿瘤抗原致敏DC激活的IL-2基因转染的CIK(Lysate-DC-IL2-CIK)对肝癌HepG2细胞的杀伤作用,效靶比分别为10:1、20:1、40:1,同时以肝癌细胞H7404、白血病细胞K562作为靶细胞进行杀伤对照实验。结果研究结果表明,不同效靶比的Lysate-DC-IL-2-CIK效应细胞对HepG2的杀伤活性均显著高于对照组(P<0.05或0.01),且其杀瘤作用随着效靶比的增高而增强,在效靶比为40:1时达到最佳抗肿瘤活性。结论经肝癌抗原致敏DC激活的IL-2基因转染的CIK细胞对AFP分泌功能的肝癌细胞具有更强的杀伤作用。
- 匡志鹏吴继宁罗小玲谢裕安李安娜
- 关键词：CIKIL-2DC
- 人IL-2基因克隆及其重组腺病毒载体的构建
- 2008年
- 目的克隆人白细胞介素2基因（hIL-2），构建其重组穿梭载体pAdBM5-GFP—hIL-2。方法：应用PHA体外刺激培养的Jurkat细胞以促进hIL-2基因表达．设计特异性引物，应用RT—PCR法扩增hIL-2基因。将测序正确的片段用PmeⅠ和BglⅡ双酶切定向插入到pAdBM5-GFP穿梭载体中，酶切鉴定。结果：RT—PCR方法，成功克隆了hIL-2基因，并构建出pAdBM5-GFP-hIL-2真核表达载体．克隆的hIL-2序列全长528bp，含462个碱基开放读框．结论；构建含人白细胞介素2基因片段的重组腺病毒表达载体（pAdBM5-GFP—hIL-2），为下一步扩增重组腺病毒开展肝癌的免疫与基因治疗研究奠定基础．
- 李安娜匡志鹏罗小玲谢裕安吴继宁尚俊英楼建军
- 关键词：人白细胞介素2真核表达载体构建基因治疗
