陕西省社会发展科技攻关项目(2011K15-01-02)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 相关作者：刘梓谕徐志凯时莹许晶王媛更多>>
- 相关机构：第四军医大学陕西省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：陕西省社会发展科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 天花粉蛋白突变体TCS_(FYY163-165CSA)的构建表达与纯化
- 2012年
- 目的:构建天花粉蛋白(TCS)突变体基因,并在原核系统进行表达及纯化。方法:应用计算机预测TCS分子上可能的抗原决定簇(FYY163-165),并进行定点突变。以栝楼基因组DNA为模扳,经PCR扩增突变基因,与pRSET-A表达载体连接,转化感受态E.coli DH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序。将阳性重组质粒转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,对表达产物进行Western blot法鉴定和Ni-NTA层析纯化。结果:构建了带有TCS突变体基因(TCSFYY163-165CSA)的重组表达质粒,使目的蛋白在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,表达产物经纯化后,得到均一的TCS突变体蛋白。结论:成功地构建了TCS突变体基因TCSFYY163-165CSA,并获得高效表达,为基因工程方法改造TCS提供了新的途径。
- 王媛李友红刘梓谕时莹徐志凯许晶黎志东
- 关键词：天花粉蛋白人类免疫缺陷病毒定点突变原核表达纯化
