江苏省自然科学基金(BK2009734)
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
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- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学更多>>
- 绿色木霉产双功能酶的体外毕赤酵母表达优化
- 2012年
- 为探索重组绿色木霉源双功能壳聚糖酶(rCCBE)在毕赤酵母中表达的最佳诱导条件,本研究在对甲醇浓度、诱导pH、诱导温度和诱导时间这4个因素进行单因素试验基础上,运用Box-Behnken设计的响应面试验对诱导条件进行了优化。根据回归分析确定了影响rCCBE表达的因子,求得最佳诱导条件为:诱导甲醇浓度为0.92%、pH为6.26,诱导温度为28.42℃、诱导时间80.85 h,此工艺条件下双功能酶的实测壳聚糖和CMC降解活力分别为7.32 kat/mL和7.15 kat/mL,比优化前提高了76.4%。回归模型的预测值与实测值的相对误差<1%,说明该回归方程与实际情况拟合很好。
- 刘靖刘萍夏文水
- 关键词：响应面毕赤酵母
- 绿色木霉产内切壳聚糖酶的鉴定及酶学性质的研究被引量：4
- 2011年
- 以实验室前期从Trichoderma viride XW01微晶纤维素诱导的发酵液中分离纯化的一种新壳聚糖酶组分Csn为对象,采用SDS-PAGE分析、不同反应时间水解产物的粘度测定和薄层层析(TLC)分析、还原糖含量的测定等手段对壳聚糖酶Csn进行了初步鉴定及酶学性质研究,结果显示:Csn的分子量为45ku,最适作用温度和最适pH分别为60℃和pH5.0,在低于50℃、pH4.8～7.5范围内非常稳定;脱乙酰度DD对Csn的催化速率影响显著,其对83%DD的壳聚糖的催化活力最高;金属离子Mn2+、Mg2+、Ca2+、Zn2+对该酶有明显的促进作用,而Fe3+、Cu2+和Hg2+则对该酶有强烈的抑制作用;该酶的米氏常数为1.10mg/mL,最大反应速度为7.15μmol/mL·min;该酶以内切方式作用于壳聚糖,主要水解GlcNAc-GlcN和GlcN-GlcN之间的糖苷键,水解产物以四糖以上的壳寡糖为主。
- 刘萍刘靖祁兴普夏文水
- 关键词：绿色木霉壳聚糖酶酶学性质
- 不同碳源诱导绿色木霉产双功能酶的表达差异分析被引量：1
- 2011年
- 采用酶活力分析、SDS-PAGE、RT-PCR等手段对不同碳源诱导Trichodrma viride XW01产双功能酶的差异表达进行分析。结果表明,酶的合成受培养基中碳源的影响。绿色木霉在不溶性多糖类独立碳源诱导条件下对双功能酶CCBE(66kDa)的合成量要优于可溶性碳源;其中羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为碳源时发酵液中壳聚糖酶活力最高,发酵96d后活力达8.29U/mL;壳聚糖次之,麸皮再次之;3种碳源均直接诱导绿色木霉产壳聚糖酶,以CBHE为主;微晶纤维素不能直接诱导产生壳聚糖酶,而是通过其水解产物间接诱导绿色木霉产生壳聚糖酶,发酵液中CBHE所占比例较低,组分中壳聚糖酶CCBEⅡ(52kDa)和Csn(45kDa)含量较高;且绿色木霉两种酶活力的合成和表达调节并不是协同发生的。可溶性淀粉和乳糖为碳源时,绿色木霉生长迅速,但是基本上不产双功能酶。
- 刘靖刘萍夏文水高勤学
- 关键词：绿色木霉碳源壳聚糖酶RT-PCR
- 绿色木霉产双功能酶二级结构的FT-IR光谱法分析被引量：4
- 2012年
- 采用傅里叶红外光谱(FT-IR)的酰胺Ⅰ带和酰胺Ⅲ带测定绿色木霉产双功能壳聚糖酶-纤维素酶(CCBEs)的天然二级构象,结果显示:FT-IR光谱酰胺Ⅰ和Ⅲ带可以用来对绿色木霉所产的双功能酶二级结构进行预测,对两种双功能酶的主要二级结构组分α-螺旋和β-折叠的测定误差分别在2%和4%范围内,CCBEⅠ的二级构象以β-折叠为主,高达70%,与其圆二色谱和Garnier-Robson预测结果基本一致;而CCBEⅡ的二级构象中的β-折叠和α-螺旋含量分别为53.6%和14.6%。
- 刘萍刘靖祁兴普夏文水
- 关键词：FT-IR光谱二级结构预测壳聚糖酶绿色木霉
- 绿色木霉非专一性产双功能酶的鉴定被引量：1
- 2010年
- [目的]对绿色木霉诱导产生的具有壳聚糖和纤维素降解活性的双功能酶组分CCBEⅡ进行酶学性质研究和酶类鉴定。[方法]采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定CCBEⅡ的壳聚糖酶和纤维素酶活力,对酶的温度、pH值稳定性、底物特异性、金属离子影响等酶学性质进行研究。[结果]双功能酶CCBEⅡ作用壳聚糖和羧甲基纤维素钠(CMC)的最适温度均为60℃,最适作用pH值分别为5.2和4.2。金属离子Mn2+、Mg2+对酶的2种活性都有激活作用,Fe3+、Cu2+、Ag+和Hg2+则能强烈抑制2种酶活。CCBEⅡ对CMC和壳聚糖(84%脱乙酰度)显示出相当的降解活力,而对对硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷无降解活性;以二糖方式切割CMC,而以单糖形式切割壳聚糖,可以水解GlcN-GlcN和GlcNAc-GlcN键或GlcN-GlcNAc键。经鉴定,CCBEⅡ与糖苷水解酶7族的绿色木霉所产的CBHⅠ(gi|295937)序列具有很高的同源性,二级结构以β-折叠为主。[结论]双功能酶CCBEⅡ与从商品纤维素酶制剂中纯化的双功能酶性质基本一致,两者为同一蛋白;经鉴定实际为具有外切壳聚糖酶活性的CBHⅠ,属于糖苷水解酶7族。
- 刘萍顾雨辰刘靖夏文水
- 关键词：绿色木霉双功能酶纤维素酶壳聚糖酶
