北京市科委基金(H020220010390)
- 作品数：6 被引量：31H指数：3
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- 相关机构：北京大学第三医院北京大学哥本哈根大学更多>>
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- 人胚胎视网膜来源神经干细胞体外培养尝试被引量：3
- 2005年
- 目的从人胚胎视网膜中分离、培养神经干细胞。方法人16～20周胚胎视网膜制备的单细胞悬液,分别在无血清和有血清条件下进行体外培养,采用免疫荧光法检测培养的细胞对nestin和视网膜终末细胞抗原的表达,采用RTPCR方法和实时荧光定量PCR法检测诱导前后细胞nestin基因在mRNA水平的表达差异。结果可从人胚胎视网膜神经感觉层中培养出神经干细胞。该细胞具有自我复制能力,表达nestin,经不同条件诱导后细胞表达视网膜视杆细胞、无长突细胞、双极细胞、节细胞和米勒细胞等标志。诱导后细胞nestin基因表达量较诱导前细胞明显降低。结论人胚胎视网膜神经感觉层中存在具有自我更新能力和多分化潜能的神经干细胞。
- 俞海燕沈丽王薇
- 关键词：神经干细胞体外培养细胞分化
- 成人骨髓间充质干细胞体外向视网膜细胞的诱导分化被引量：3
- 2014年
- 目的研究取材于成人骨髓的间充质干细胞在一定诱导条件下向视网膜神经细胞的分化。方法成人骨髓经密度梯度离心得到的细胞,根据其高黏附特性体外培养获得间充质干细胞。利用流式细胞仪分析其细胞表型,在体外诱导使其向视网膜神经细胞分化并用免疫荧光法进行鉴定。结果从骨髓中分离培养的细胞具有成纤维细胞样形态,贴壁生长,表型相对均一,表面标志为CD90、CD44、CD147阳性;而CD34、CD38、CD45、CD14、HLA-DR阴性。体外诱导后可以得到表达nestin(神经干细胞标志物)、GFAP(神经胶质细胞标志物)和Rhodopsin(视网膜光感受器细胞标志物)阳性的细胞。结论从人骨髓中分离培养得到的间充质干细胞具有向视网膜神经细胞分化的潜能。
- 俞海燕吴文涛王薇张纯
- 关键词：间充质干细胞视网膜体外诱导分化免疫荧光染色RHODOPSIN
- 大鼠视网膜光损伤前、后视觉介导的行为变化被引量：5
- 2005年
- 目的通过观察大鼠视细胞光损伤模型的视觉运动行为,评价光感受器细胞的损伤、死亡和视功能的对应关系,以期建立评估动物视功能的方法。方法21只SD大鼠分为3组,暗适应24h后选用(950±50)流明绿色光分别照射3、12、24h,光照后暗适应24h,暗适应完成48h后摘除眼球,冷冻切片分别行HE、rhodopsin免疫荧光染色;以大鼠视觉意识障碍反应、前置刺激反应作为视功能的判断指标,分别于光损伤前、后2d测定大鼠的视觉运动行为,对SD大鼠光损伤前、后的平均运动速度作统计学分析。对照组为7只双眼球摘除术后的大鼠。结果视觉意识障碍反应、前置刺激反应结果表明,随着光照时间的延长,动物的视觉意识障碍反应逐渐丧失,前置刺激反应逐渐增强。统计学结果显示,SD大鼠的视觉运动行为变化是与视功能相关的。随着损伤程度的加重,SD大鼠视觉运动的平均运动速度出现渐进性下降的变化。结论随着视细胞损伤程度的加重,SD大鼠的视功能呈现渐进性的下降,其视觉运动的平均运动速度亦出现相应的变化。视觉运动行为测试可以用于对SD大鼠的视功能进行定量的评估。
- 李学民陈晓勇沈丽张纯由德勃陈雪俞海燕王薇
- 关键词：光感受器视觉障碍
- 大鼠胚胎视网膜前体细胞的分离、体外培养及鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的探讨流式细胞分析技术、免疫荧光及3HThymidine分析对大鼠胚胎视网膜前体细胞性质及其体外增殖进行鉴定的可行性。方法来源于19d胚胎大鼠视网膜的视网膜前体细胞,使用流式细胞分析及免疫荧光技术从数量及形态上对细胞性质进行鉴定。采用无血清培养基体外培养,通过3HThymidine分析、形态学观察及统计学分析,研究细胞增殖情况。结果从胚胎大鼠全层视网膜分离出的原代视网膜前体细胞,流式细胞分析结果显示:培养0d时,22.23%的细胞神经上皮干细胞蛋白(Nestin)呈阳性表达,16.04%的细胞Sox2呈阳性表达,19.66%的细胞钙结合蛋白呈阳性表达,其余终末视网膜细胞标记物(胶质纤维酸性蛋白、CD90、视紫红质、C反应蛋白、突触前膜列阵蛋白)均呈极微量阳性或阴性。免疫荧光结果显示大部分细胞及细胞球(>90%)Nestin呈阳性表达。培养6d后,流式细胞分析显示43.36%的细胞Nestin阳性,免疫荧光显示Nestin及胶质纤维酸性蛋白呈阳性。连续4d3HThymidine分析及形态学观察、统计学分析原代视网膜前体细胞初期增殖良好。结论流式细胞分析、免疫荧光及3HThymidine等免疫学技术可很好的对视网膜前体细胞性质及其增殖情况进行鉴定。大鼠胚胎原代视网膜前体细胞表现出神经干细胞的特性,根据检测手段不同,阳性结果不同,其原代视网膜前体细胞体外培养初期增殖良好。
- 杨静Mogens Holst Nissen王薇
- 关键词：视网膜干细胞细胞分裂流式细胞术
- 体外培养人胚胎来源视网膜干细胞的诱导分化被引量：17
- 2004年
- 目的探讨培养的人胚胎来源视网膜干细胞向视网膜终末细胞分化的可能性。方法来自16-20周人胚胎的视网膜干细胞进行无血清体外培养,并分别进行有血清条件下体外诱导和用含视网膜色素上皮的眼杯模拟体内条件诱导的观察,采用免疫荧光法检测干细胞和视网膜终末细胞表面抗原的表达,采用实时荧光定量PCR法检测诱导前后细胞nestin基因在mRNA水平的表达差异。结果从人胚胎视网膜神经感觉层分离出的视网膜干细胞,在体外诱导的条件下,可表达视网膜终末细胞标记PKCα、GFAP、Thy1,少数细胞表达nestin和MAP2;在模拟体内环境诱导后,则不仅表达上述细胞标记,而且rhodopsin和syntaxin表达阳性。实时荧光定量PCR法检测显示:诱导后细胞nestin基因表达量较诱导前细胞明显降低。结论RPE可以促进体外培养的视网膜干细胞向视杆细胞和无长突细胞分化。(中华眼科杂志,2004,40:448-452)
- 俞海燕沈丽陈雪由德博陈晓勇王薇
- 关键词：体外培养胚胎视网膜干细胞细胞分化视网膜疾病
- 大鼠视网膜光损伤模型的行为观察被引量：3
- 2005年
- 目的 进行可见光照射所致大鼠视网膜光性损伤后的行为测试 ,探讨动物视功能与行为的关系。方法 2 1只SD大鼠在 (95 0± 5 0 )lx绿色光损伤仪光照 3、12、2 4h ,实验前及实验后暗适应 2 4h ,光损伤前 2d及光损伤后 2d测定大鼠的头部视动跟踪反应、前置刺激反应。光损伤后 72h摘除眼球 ,冰冻切片后行HE、Rhodopsin免疫荧光染色 ,光镜观察。实验对照组为 7只双眼球摘除术后的大鼠。结果 随着光照时间的延长 ,动物的头部视动跟踪反应逐渐丧失 ,对照组反应最弱 ,前置刺激反应逐渐增强 ,对照组反应最强。结论 不同程度的视细胞损伤后的动物行为是不同的 ,随着损伤程度的加重 。
- 陈晓勇沈丽张纯由德勃陈雪俞海燕王薇
- 关键词：视网膜光损伤免疫荧光染色动物光照时间摘除
