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绵羊痘病毒固原株的分离与鉴定被引量：3: 2015年; 取发病绵羊的皮肤痘疹研磨制成病料样品悬液,将该悬液感染未免疫的健康绵羊,同时接种原代绵羊羔羊睾丸(LT)细胞,盲传5代后,转接Vero细胞,进行间接免疫荧光试验和PCR鉴定。样品悬液感染未免疫的健康绵羊后出现绵羊痘的典型发病症状,经过LT细胞传代后转接Vero细胞,出现了特征性细胞病变;间接免疫荧光试验和PCR均检测出病毒存在。PCR产物的核酸序列测定结果显示,分离毒株的RPO30基因与已发表的绵羊痘病毒毒株的相应基因的同源性在99%以上。上述结果表明,本研究从宁夏固原市疑似绵羊痘病毒感染的绵羊体内成功分离到1株绵羊痘病毒,并将其命名为绵羊痘病毒固原株。; 王曼叶奕优赵志荀吴国华颜新敏朱学亮李应国朱海霞李健张强; 关键词：绵羊痘病毒间接免疫荧光试验 PCR

痘病毒F10L基因的克隆及生物信息学分析: 2014年; 将古浪山羊痘病毒的基因组DNA提取出来,并设计引物进行PCR扩增,克隆F10L基因的DNA序列.为了分析山羊痘病毒F10蛋白的分子特征,将PCR产物连接到p GEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物信息学软件对F10L基因序列进行预测分析.结果显示,F10L基因序列由1 335个核苷酸组成的开放阅读框,编码444个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量的理论值53.01 ku,理论等电点为7.14.该蛋白的二级结构中,α螺旋占12.44%,β折叠占15.73%,其余71.83%为无规则卷曲.多序列比对分析显示,不同羊痘病毒分离株F10L序列高度保守,一致性在97%以上.此研究结果为进一步研究F10蛋白的生物学功能和羊痘病毒早期蛋白的分子相互作用奠定了基础.; 赵银龙吴国华吴健朱海霞颜新敏赵志荀李健吴娜张强穆晓峰; 关键词：痘病毒基因克隆生物信息学分析

山羊痘病毒A6L基因的克隆及序列分析被引量：2: 2015年; 为了分析山羊痘病毒A6蛋白的分子特征,本试验提取了山羊痘病毒古浪分离株的基因组DNA,设计引物进行PCR扩增,克隆A6L基因的DNA序列。将PCR产物连接到pGEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物信息学软件对A6L基因序列进行预测分析。结果显示,A6L基因序列含有1个由1 128个核苷酸组成的开放阅读框,编码375个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量的理论值为43.68ku,理论等电点为7.50。该蛋白的二级结构中,α螺旋占53.30%,β折叠占10.24%,其余39.46%为无规则卷曲。多序列比对分析结果显示,不同羊痘病毒分离株A6L序列高度保守,同源性在97%以上。上述研究结果为进一步研究A6蛋白的生物学功能和羊痘病毒早期蛋白的分子相互作用奠定了基础。; 赵银龙吴国华朱海霞吴健颜新敏赵志荀李健吴娜穆晓峰张强; 关键词：山羊痘病毒基因克隆

山羊痘病毒ORF014蛋白的结构预测及其真核表达被引量：1: 2014年; 以山羊痘病毒古浪株基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得山羊痘病毒ORF014基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-)/Myc-His(-)B,通过脂质体法将重组质粒转入Vero细胞,Western-blot分析目的基因表达情况。使用WabLab、SWISS-MODEL和ExPASY等在线软件预测GTPV014蛋白的功能结构域和二、三级结构以及氨基酸组成,对其作为凋亡抑制蛋白的真实性、可靠性做出理论上的判断。结果显示,重组表达载体可以在Vero细胞中表达出大小约为20ku的重组融合蛋白,该蛋白具有与黏液瘤病毒M11L蛋白相似的一些结构特征。上述结果为GTPV014蛋白在山羊痘病毒感染过程中抑制凋亡的研究提供了一些理论依据。; 卢昌吴国华颜新敏赵志荀王曼吴娜朱海霞李健张强; 关键词：山羊痘病毒真核表达

山羊痘病毒A11R基因的克隆及生物信息学分析: 2016年; 为了分析绵羊痘病毒A11R蛋白质的分子特征,提取了山羊痘病毒古浪分离株(GL)的基因组DNA,设计引物进行PCR扩增,将PCR产物连接到p GEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物信息学软件对A11R基因序列进行预测分析。结果显示,A11R基因序列由954个核苷酸组成的开放阅读框,编码317个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量的理论值为36 091.7,理论等电点为5.14。A11R蛋白质的二级结构中,α螺旋占29.02%,β折叠占10.41%,其余60.57%为无规则卷曲。多序列比对分析显示,不同羊痘病毒分离株A11R序列高度保守,同源性在98%以上。进化树分析结果显示,GL株与NK株、TU株以及SA株在一个分支,说明它们之间具有较近的亲缘关系,上述研究结果为进一步研究A11R蛋白质的生物学功能和羊痘病毒早期蛋白质分子间相互作用奠定了基础。; 吴健朱海霞赵志荀颜新敏赵银龙吴娜李健张志东张强李影吴国华; 关键词：羊痘病毒基因克隆生物信息学

蛋白质互作研究技术被引量：2: 2016年; 蛋白质在生物体的机制中是必不可少的,担任着生物系统内启动以及执行的任务。生物体的每一个生物过程,从遗传物质复制到细胞衰老与死亡,依赖于几种甚至几百种蛋白质之间的功能协调。蛋白质的功能,结构的改变会破坏这种平衡,导致疾病的发生,通常这种情况是由于蛋白间的相互作用引起的。目前有很多蛋白质的结构功能是未知的,所以蛋白质组学发展的也尤为迅速。论文主要综述了双向电泳、噬菌体展示技术、GST pull-down、酵母双杂交、串联亲和纯化、双分子荧光互补技术、蛋白质芯片、Far Western blot、免疫共沉淀9个蛋白质组学相关研究技术,并简单介绍了近几年这些技术在生物学中的应用。; 吴健朱海霞赵志荀颜新敏赵银龙吴娜李健张志东张强李影吴国华; 关键词：蛋白质相互作用生物信息学

绵羊痘病毒E3L基因在Vero细胞中的表达: 2014年; 为了构建组成型表达绵羊痘病毒E3蛋白的真核表达载体,并检测E3蛋白在Vero细胞中瞬时表达的情况,将绵羊痘病毒E3L基因亚克隆至pcDNA3.1(+)表达载体,构建重组质粒pcDNA3.1(+)-E3L,经酶切和测序鉴定正确后转染至Vero细胞,利用Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)对E3蛋白的表达水平进行鉴定。结果显示,转染后第48小时可检测到E3L基因高水平的表达。这一研究结果为进一步研究绵羊痘病毒E3蛋白的生物学功能奠定了基础。; 于少雄颜新敏赵志荀吴国华叶奕优卢昌王曼吴娜朱海霞李健张强; 关键词：绵羊痘病毒 VERO细胞真核表达

蛋白激酶PKR在HeLa细胞中的过表达及其siRNA干扰的鉴定: 2016年; 为了研究双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)信号通路对羊痘病毒复制的影响,试验构建了PKR基因的真核表达载体,并在He La细胞中实现了PKR的过表达;从相关文献中筛选了靶向PKR的2对siRNA,检测其对PKR的干扰效果,以RT-PCR方法扩增PKR基因,克隆入表达载体pc DNA3.1(-)/Myc-His(B),对重组质粒进行双酶切及测序鉴定,将阳性重组质粒或siRNAs分别转染He La细胞,Western-blot检测PKR蛋白的表达水平。结果表明:试验成功构建了PKR基因的真核表达载体pc DNA3.1(-)-PKR,重组质粒在He La细胞中得到了表达;2对siRNA具有较好的干扰效果,其中siRNA1、siRNA2对PKR的干扰效率分别达到76%和52%。; 吴娜赵志荀吴国华颜新敏叶奕优李应国朱海霞李健张志东张强; 关键词：羊痘病毒真核表达 SIRNA HELA细胞

同源重组介导的重组病毒研究进展被引量：3: 2016年; 病毒同源重组是以同源臂为基础的将目的基因整合到病毒基因组中的技术。将表达盒串联到转移载体,通过同源重组构建重组病毒从而实现病毒基因改造、外源基因表达以及重组活载体疫苗制备等。就重组病毒的优缺点、构建原理及应用进展进行了概述,对重组病毒构建的难点进行了分析,全面系统地阐述了重组病毒的构建模式,针对基因框(启动子-报告基因-目的基因-调控元件-终止子)给出具体的构建方案,同时对其未来发展前景进行了展望,以期为今后重组病毒的构建提供理论基础。; 赵银龙李健朱海霞颜新敏赵志荀吴健张强穆晓峰吴国华; 关键词：同源重组重组病毒病毒载体

绵羊痘病毒E3L基因的克隆和表达及其结构分析被引量：1: 2013年; 以绵羊痘病毒古浪株基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得绵羊痘病毒E3L基因,将其克隆至pGEX4T-1表达载体,以大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株为宿主菌进行了诱导表达。结果显示,重组菌可以表达出大小约为46ku的重组融合蛋白,表达的蛋白绝大部分以可溶形式存在于菌体中;表达产物经GST结合树脂纯化后可得到纯度较高的目的蛋白,经Western-blot分析,所纯化的蛋白能与绵羊痘病毒阳性血清进行特异的免疫印迹反应,证明表达的蛋白具有良好的反应原性。用纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠获得鼠抗血清,经间接ELISA测定效价为1∶100 000。; 于少雄颜新敏吴国华赵志荀卢昌叶奕优朱海霞李健张强; 关键词：痘苗病毒绵羊痘病毒

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