国家自然科学基金(31070575)
- 作品数：6 被引量：16H指数：3
- 相关作者：李荣贵郭道森于洁李子李丽更多>>
- 相关机构：青岛大学华中农业大学青岛奥克生物开发有限公司更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金青岛市科技发展计划项目山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 杀松材线虫海洋真菌ML-5的鉴定及培养条件研究被引量：5
- 2015年
- 针对危害松属植物的重要病原物松材线虫，本文对采自青岛附近海域的样品进行真菌分离，采用浸渍法对分离得到的35株真菌的培养滤液进行杀线活性测定，从中筛选得到了1株具有高杀松材线虫活性的真菌ML-5，用其培养滤液处理松材线虫72h时，线虫的校正死亡率可达86．51％。通过形态学观察和18SrDNA序列分析，将其鉴定为青霉属（Penicillium）的一种真菌。对ML-5的培养条件进行了研究，确定菌株ML-5在PD培养基中杀线活性最佳的培养条件是：100％海水浓度，初始pH值5．0～6．0，培养温度25℃，培养时间7d。该研究为海洋真菌活性物质的开发及在松萎蔫病防治方面的应用提供了理论依据。
- 李子周长景陈聪聪杜桂彩李丽郭道森
- 关键词：海洋真菌青霉菌松材线虫杀线活性
- 两株具有杀松材线虫活性海洋细菌的筛选和鉴定被引量：8
- 2012年
- 为对松材线虫病进行生物防治,利用海洋微生物资源,对采自青岛近海域的海水、海泥、海藻和海洋动物样品进行了细菌分离,共得到14株细菌,并采用浸渍法对这些菌株进行杀线活性的测定,从中筛选出对松材线虫具有较强杀线活性的2株海洋细菌PX3-1和PX3-2,用它们的培养滤液处理松材线虫8h,实验结果表明,松材线虫的校正死亡率分别达89.1%和91.6%。通过形态特征观察、生理生化特征测定、16SrDNA序列及其系统发育分析,鉴定菌株PX3-1和PX3-1同属于巨大芽孢杆菌(Bacillus Megaterium)。此二菌株对松材线虫具有较强的杀线活性,该研究为海洋微生物资源的利用及对松材线虫病的防治提供了生物材料和理论基础。
- 郑海营于洁李荣贵郭道森
- 关键词：海洋细菌杀线活性松材线虫
- 黑松过氧化物酶cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达
- 2014年
- 采用RT-PCR的方法,从黑松愈伤组织中获得过氧化物酶cDNA,其开放阅读框全长981bp,编码326个氨基酸残基。将该开放读框克隆到表达载体pET-15,构建重组表达质粒pET-15b-POD,转化E.coli BL21(DE3)构建工程菌,IPTG诱导工程菌高效表达过氧化物酶,通过Ni 2+螯合亲和层析得到了电泳纯的重组过氧化物酶。生物信息学分析表明,该蛋白具有植物过氧化物酶的典型结构,以及具有过氧化物酶家族保守的活性位点。活性分析表明该蛋白的确是黑松过氧化物酶,这一结果为松萎蔫病抗性机理的研究奠定了基础。
- 刘国华窦维旺林璐璐纪旭艳王艳士李荣贵
- 关键词：黑松过氧化物酶CDNA克隆纯化
- 黑松银松素合成酶的cDNA克隆及表达研究
- 2014年
- 松萎蔫病是由松材线虫引起的一种危害性极大的森林病害,为研究黑松对松材线虫的抗性机制,本文利用RT-PCR技术对黑松体内经转录组分析获得的与银松素合成酶mRNA高相似度的序列进行扩增,获得了银松素合成酶cDNA,然后将此银松素合成酶基因(PSL)克隆到表达载体pET-15b上,构建了重组表达质粒pET-15b-PSL,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)后构建工程菌,通过IPTG诱导,工程菌高效表达重组蛋白,经Ni 2+螯合柱亲和层析得到了纯化重组银松素合成酶。该研究为了解黑松银松素合成酶的功能及松萎蔫病抗性松树的培育奠定了基础。
- 杨晓宋修明王艳士李荣贵
- 关键词：黑松CDNA克隆
- 杀线虫海洋细菌G-23的鉴定及培养条件研究被引量：5
- 2014年
- 针对危害松属植物的重要病原物松材线虫,本文对采自于青岛近海海域的样品进行细菌分离,得到49株细菌,并采用浸渍法对这些菌株的培养液进行杀线虫活性测定,从中筛选出1株具有较高杀线活性的海洋细菌G-23,将该菌株鉴定为产黑假交替单胞菌(Pseudoalteromonas nigrifaciens),对菌株G-23的培养条件及所产杀线虫活性物质的稳定性进行研究,结果表明,该菌株产杀线活性物质的最佳培养条件为:初始pH8.0,培养温度25℃,菌龄19h,培养时间3d;在海水浓度为100%的Zobell 2216E培养基中生长,有利于活性物质的产生;该菌株产生的杀线虫物质热稳定性较好,既有极性小的物质,也有水溶性物质,在弱碱性(pH8.0)条件下活性较稳定。该研究可为海洋微生物活性物质的开发利用以及松萎蔫病的生物防治提供了理论依据。
- 于洁李子周长景艾桂花李丽郭道森
- 关键词：海洋细菌杀线活性松材线虫
- 荧光假单胞菌GcM5-1A重组鞭毛蛋白的表达及其对黑松细胞的毒性研究被引量：2
- 2013年
- 针对松萎蔫病的早期诊断及生物防治,本文利用PCR技术从荧光假单胞菌GcM5-1A的基因组中克隆了鞭毛蛋白编码基因fliC,再将该基因克隆到表达载体pET-15b的NcoI和XhoI位点,构建重组质粒pET-15b-fliC,再将重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3),构建工程菌,IPTG诱导工程菌高效表达C-末端具有多聚组氨酸标签的重组鞭毛蛋白,重组蛋白主要以包涵体的形式存在,包涵体经8mol/L尿素溶解,复性并经Ni2+螯合柱亲和层析得到了电泳纯的重组鞭毛蛋白。生测结果表明,重组鞭毛蛋白可引起黑松细胞的大量死亡,与天然鞭毛蛋白对黑松愈伤组织细胞有相似的毒性。该研究为松萎蔫病致病机理的研究奠定了基础。
- 肖莉张蕾牟卉李荣贵
- 关键词：荧光假单胞菌鞭毛蛋白
