转基因生物新品种培育专项(2011ZX08009-003-001)
- 作品数：6 被引量：25H指数：3
- 相关作者：张杰束长龙王艳丽姜华王利红更多>>
- 相关机构：浙江省农业科学院中国农业科学院植物保护研究所杭州师范大学更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 水稻OsWRKY7基因的表达研究被引量：6
- 2015年
- WRKY蛋白是植物中一类重要的转录因子,不仅参与植物生长发育的调控,还参与植物对各种生物和非生物胁迫的响应。本研究从水稻日本晴中分离OsWRKY7基因的编码序列(CDS),并克隆其启动子序列进行表达研究。首先通过实时定量PCR的方法检测不同组织中OsWRKY7基因的相对表达量,结果表明,OsWRKY7在叶片中的表达水平较高,且开花期的剑叶中表达量高于7d苗龄的幼叶。进一步将OsWRKY7启动子与GUS报告基因融合,构建了植物表达载体pOsWRKY7-GUS,并将此载体转化日本晴。转基因植株不同组织染色分析结果显示,该启动子在植株的主根尖、叶片、颖壳中有GUS活性,其中叶片上可见全叶范围分布的大量蓝色斑点,这些染色结果与实时定量PCR的结果一致。进一步的接菌和激素处理还显示,OsWRKY7启动子在根和叶中的表达均受水稻白叶枯病菌[Xanthomonas oryzae pv.Oryzae(Xoo)]P10生理小种侵染的诱导,同时还受外源施加的细胞分裂素和生长素诱导,而水杨酸则会抑制其在根和叶中的表达。此外,我们还将OsWRKY7基因的CDS序列分别与绿色荧光蛋白和酵母GAL4的DNA结合域融合,对该基因进行水稻茎原生质体亚细胞定位分析和酵母自激活检验,结果显示该基因定位于细胞核中并具有转录自激活活性。上述结果表明OsWRKY7具有明显的转录激活因子特征,其很可能参与了水稻对白叶枯菌的防御反应以及对多种激素信号的转导过程。
- 李茹周洁李冬月王栩鸣杨勇余初浪程晔严成其陈剑平
- 关键词：启动子亚细胞定位转录活性
- 利用rDNA-ITS研究立枯丝核菌的遗传多样性被引量：3
- 2013年
- 立枯丝核菌是一类重要的植物病原菌,具有极为丰富的遗传多样性.已有多种手段用于该菌遗传结构复杂性的研究,其中利用核糖体DNA及转录间隔区的多态性进行遗传多样性的研究因其操作简便、结果稳定而被广泛采用.文章就rDNA-ITS技术的实现、在研究中的实际应用及目前的研究进展进行了综述.
- 王利红姜华王艳丽孙国昌
- 关键词：立枯丝核菌
- 植物叶片基因组DNA快速提取方法被引量：8
- 2014年
- 为了满足分子生物学研究中大量植株基因需要PCR检测的需求,建立了一种无需研磨、无需有机试剂抽提的快速提取植物叶片基因组DNA的方法。通过比较基因组DNA的浓度及PCR检测结果,获得了最佳提取条件,即约50 mg叶片加入150μL含1%β-巯基乙醇的TE提取液,快速破碎1 min。破碎后的样品4℃13 500×g离心1 min,上清于-20℃冷冻后室温融解,4℃、13 500×g离心1 min,离心后收集的上清溶液即可用于PCR检测。整个提取过程仅需10-12 min,具有样品用量小、操作简单、廉价、高效等优点。使用此方法提取的烟草、水稻、大豆、玉米、油菜和花生的基因组DNA均可用于PCR扩增,并可成功扩增长度为3 244 bp的基因片段。此方法提取的基因组DNA也可用于对未知基因的扩增,获得4条新的花生actin基因序列。
- 迟婧耿丽丽高继国束长龙张杰
- 关键词：基因组DNAPCR扩增
- 立枯丝核菌遗传多样性的研究方法被引量：3
- 2013年
- 立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kühn)是一个集合种,遗传多样性丰富.关于遗传多样性的研究一直是R.solani研究的热点.本文就用于R.solani遗传多样性研究的方法进行了综述.分别解释并阐述了各种方法的优缺点,其中菌丝融合法是研究R.solani遗传多样性的传统方法,该法需借助显微镜且耗时耗力;同工酶法简便、高效、低廉,但常需要与其它方法联用;脂肪酸法操作难度小,价格相对较低,但该法受菌株生长状况和脂肪酸脂化方法的限制;分子标记法方法众多,各有利弊,通过比较发现rDNA-ITS是研究R.solani遗传多样性比较合适的方法.本文还介绍了不同方法在R.solani遗传多样性研究中的具体应用.
- 王利红姜华王艳丽孙国昌
- 关键词：立枯丝核菌菌丝融合同工酶分析脂肪酸分析分子标记法
- Cry9Aa3蛋白对小菜蛾和亚洲玉米螟的最小活性区研究被引量：1
- 2015年
- 为了确定Cry9Aa3蛋白对亚洲玉米螟（Ostrinia furnacalis）和小菜蛾（Plutella xylostella）的最小活性区,根据NCBI BLAST比对结果与SWISS-MODEL同源建模结果,设计了12对截短引物,以cry9Aa3全长序列为模板,扩增出了12种不同截短片段,与pEB载体重组后的阳性克隆,转入大肠杆菌（Escherichia coli）菌株Rosetta（DE3）诱导表达,提取蛋白。对小菜蛾和亚洲玉米螟的生物学活性测定,发现截短蛋白Cry9Aa3-45~700、Cry9Aa3-1~654,对小菜蛾和亚洲玉米螟有较高的活性,其中截短蛋白Cry9Aa3-45~700对小菜蛾和亚洲玉米螟的LC50分别为5.27、7.56μg/g,截短蛋白Cry9Aa3-1~654对小菜蛾和亚洲玉米螟的LC50分别为7.76、7.79μg/g,与阳性对照无显著差异,而截短蛋白Cry9Aa3-1~653和Cry9Aa3-46~700（LC50〉200μg/g）对幼虫几乎丧失生物学活性。这说明Cry9Aa3蛋白对小菜蛾和亚洲玉米螟的杀虫活性区相同,最小活性区位于45I和654P之间。
- 方龙发王小奇束长龙宋福平黄勃张杰
- 关键词：苏云金芽胞杆菌小菜蛾亚洲玉米螟
