广州市科技计划项目(2007J1-C0131)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 相关作者：王菊芳杨忠张颋王小宁冯延叶更多>>
- 相关机构：华南理工大学华东理工大学南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 利用绿色荧光蛋白建立包涵体变-复性新方法被引量：2
- 2010年
- 为提高常规稀释复性方法的复性效率,以重组绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)包涵体为模型,开发一种新的双变性-稀释复性方法。新方法选取含有精氨酸的碱性复合溶液作为第一变性剂溶解GFP包涵体,通过梯度降低变性液的酸碱度析出溶解目的蛋白,再以尿素为第二变性剂溶解析出的蛋白,随后进行稀释复性。结果显示:与常规方法比,新方法复性的绿色荧光蛋白活性收率提高至1.5～2.3倍,复性蛋白对温度、溶液酸碱度及变性剂的稳定性提高。增强型绿色荧光蛋白(enhanced GFP,EGFP)及其融合蛋白的包涵体采用新方法进行复性,均取得80%以上的活性回收率,说明新方法对GFP系列融合蛋白的包涵体具有一定的适用性。新方法从变性剂使用与包涵体结构的关系出发,突破常规操作中变性剂单次使用的局限,既保留了简便性又提高了常规稀释复性方法的效率。
- 张颋冯延叶沈亚领金维荣杨忠王菊芳王小宁
- 关键词：大肠杆菌包涵体复性绿色荧光蛋白
- 可溶性预测模型在包涵体复性中的应用被引量：5
- 2009年
- 目的研究包涵体复性后可溶性的预测方法,区分复性类型,提高复性效率。方法利用可溶性预测模型对43个疾病相关重组蛋白的表达进行预测,并采用双变性-复性方法对表达形成的包涵体进行复性。结果预测有可溶性表达倾向的14个蛋白表达的包涵体,复性后均收率高、可溶性好。预测为高不溶性表达倾向的29个蛋白,表达的包涵体复性后高收率与低收率并存,对这两种收率包涵体特性的统计学分析显示理论等电点间存在显著性差异(P<0.05)。结论可溶性预测模型可以应用于区分包涵体复性类型,预测复性后蛋白可溶性,为提高复性效率提供了新方法。同时提示蛋白的理论等电点在模型应用中有重要作用。
- 张颋王菊芳冯延叶杨忠马骊王小宁
- 关键词：蛋白表达包涵体复性
