国家自然科学基金(302000137)
- 作品数：11 被引量：21H指数：3
- 相关作者：窦忠英杨学义雷安民敬晓棋孙亚东更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学沈阳农业大学榆林学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划教育部科学技术研究重点项目更多>>
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- 小鼠卵母细胞和早期胚胎端粒酶活性的测定被引量：2
- 2005年
- 为了解小鼠早期发育过程中端粒酶的活性变化,本研究利用端粒重复序列扩增法(TRAP)进行了小鼠卵母细胞和附植前胚胎端粒酶活性的测定。结果表明,小鼠卵母细胞、桑椹胚和囊胚为端粒酶阳性,而2-细胞和8-细胞为阴性。依据电泳条带在成像系统下的光密度,计算相对总产品产量(TPG)的定量比较发现,囊胚端粒酶活性最高,为269.331;桑椹胚次之,为96.231;卵母细胞最低,为85.782。小鼠桑椹胚和囊胚胚胎记数及单细胞端粒酶活性比较结果显示,囊胚单细胞TPG最低,为3.45;桑椹胚单细胞略高于囊胚,为4.00;而卵母细胞最高,为85.782,大约是囊胚细胞的25倍。
- 敬晓棋雷安民王晗杨学义窦忠英
- 关键词：小鼠卵母细胞早期胚胎端粒酶活性
- 山羊表皮干细胞分离纯化的研究被引量：2
- 2005年
- 表皮干细胞(epidermalstemcells,ESCs)干细胞特性的维持是干细胞内在属性和微环境共同作用的结果,体外长期培养ESC的关键是维稳定的微环境。实验将组织块脱出的细胞经分次消化和型胶原快速贴附分离出表皮干细胞,在含20%条件培养基的无血清培养液进行培养。原代细胞表现K19阳性,并且能形成PGC集落样细胞团。从表皮和真皮组织中均可得到上皮样细胞,经纯化后均表现出明显的表皮干细胞特性:呈片状生长,铺路石样形态。将两类细胞分别传至5代和8代,后代细胞β1整合素染色呈阳性。对5代和8代细胞分别进行克隆分析实验,其克隆形成率分别为18.5%和8.5%。实验证明组织块法能够得到较好的维持ESC的微环境,所分离的ESC具有干细胞特性并能稳定传代。
- 李伟杨学义韩雅婷窦忠英
- 关键词：表皮干细胞分离纯化山羊无血清培养液组织块法形成率
- 波尔山羊卵母细胞和早期胚胎的端粒酶活性
- 2007年
- 利用端粒重复序列扩增(TRAP)法进行了山羊卵母细胞和附植前胚胎的端粒酶活性的测定;结果表明,山羊卵母细胞和早期胚胎的端粒酶活性都为阳性。TPG定量比较发现,卵母细胞的TPG最低,为25.348U;4-细胞的TPG为273.832U,至8-细胞时,TPG又降低到56.117U,随后快速升高,桑椹胚的TPG为251.111U;囊胚的端粒酶活性最高,TPG为519.46U。
- 敬晓棋雷安民屈雷窦忠英
- 关键词：端粒酶活性波尔山羊早期胚胎端粒重复序列扩增法
- 1,25(OH)_2VD_3诱导小鼠胚胎干细胞向成骨细胞分化的研究被引量：5
- 2008年
- 目的探讨1,25(OH)2VD3在诱导小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)向成骨细胞分化过程中的重要作用。方法取2d龄昆明小白鼠颅盖骨进行成骨细胞分离培养;参照并改进zur Nieden等的方法制备拟胚体(embryoid bodies,EBs)。将EBs根据培养液不同分为4组:A组:不含白血病抑制因子EBs培养液;B组:EBs培养液中添加50μg/mL维生素C、50mmol/Lβ-磷酸甘油;C组:培养液同B组,另每孔接种5×104个第3代成骨细胞;D组与C组相同,另添加4×10-9mol/L1,25(OH)2VD3。检测ALP活性,实时定量PCR检测骨钙素mRNA的表达,茜素红S染色进行矿化骨结节计数。结果EBs贴壁后前5d,各组ALP表达未发生明显变化,5d后ALP表达逐渐增加,其中D组在第20天表达水平最高。光镜下可见轮廓清晰大小不等的红色结节。茜素红S染色测得A、B、C、D组骨结节数分别为(20±8)、(18±5)、(31±1)、(50±1)个;实时定量PCR测得A、B、C、D组骨钙素mRNA分别为10.18±1.17、20.29±1.03、18.84±4.07、32.15±5.23;C、D组与A、B组比较差异均有统计学意义(P<0.05),A、B组间比较差异无统计学意义(P>0.05),C、D组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论在浓度为4×10-9mol/L1,25(OH)2VD3和维生素C、β-磷酸甘油共同作用下,有效促进了ESCs源性成骨细胞的产生。
- 孙亚东杨学义李锋涛窦忠英
- 关键词：胚胎干细胞成骨细胞诱导分化
- 胚胎干细胞体外分化为成骨细胞研究进展被引量：3
- 2007年
- 目的对胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)体外诱导分化为成骨细胞的研究现状、诱导分化中存在的问题,以及进一步的研究方向作一综述。方法广泛查阅近年来关于ESCs体外诱导分化为成骨细胞的文献,并进行总结与分析。结果ESCs可以作为理想的成骨细胞种子细胞来源。结论诱导ESCs定向分化得到骨组织工程种子细胞——成骨细胞有巨大的应用潜力,不仅提供了分析成骨细胞发生的分子机制模型,而且奠定了其在骨组织修复中的基础。
- 孙亚东张宏宇华进联杨学义
- 关键词：胚胎干细胞成骨细胞体外分化
- 人胎儿肺间质干细胞染色体制备方法研究
- 2006年
- 研究了人胎儿肺间质干细胞染色体的制备方法,并对其染色体进行分析。结果表明,第5代细胞培养44 h,第15代细胞培养42 h,经终浓度0．025μg/mL秋水仙素作用2 h,0．075 mol/L KCl低渗25 min,正常核型比率最高,分别达到85．1%(171/201)和80．0％(172／215)。
- 孙亚东华进联窦忠英
- 关键词：核型分析染色体制备
- 牛-山羊异种克隆早期胚的分叶状线粒体被引量：1
- 2006年
- 敬晓棋雷安民窦忠英巩胜勇周勇
- 关键词：克隆胚山羊线粒体叶状发育情况
- 牛-山羊异种体细胞克隆胚胎线粒体形态超微结构观察被引量：3
- 2010年
- 【目的】通过对正常受精胚胎、山羊同克隆胚胎(山羊去核卵与布尔山羊耳皮肤成纤维细胞重组)以及牛-山羊异种克隆胚胎(山羊去核卵与布尔山羊耳皮肤成纤维细胞重组)中线粒体超微结构的观察与比对,从亚细胞水平揭示异种克隆胚胎出现异常的原因,为异种克隆技术的进一步研究提供新思路。【方法】利用透射电镜分别对山羊正常受精胚胎、山羊同种克隆胚胎及牛-山羊异种克隆胚胎的原核、2-细胞、4-细胞、8-细胞及桑椹胚阶段的早期胚胎进行线粒体超微结构观察。【结果】山羊自然受精胚胎、山羊同种克隆胚胎的线粒体均为帽状,随着胚胎的发育,线粒体由电子密度高、嵴少的未成熟状态发育为电子密度低、嵴丰富的成熟线粒体,而牛-山羊异种克隆胚胎从2-细胞胚胎至桑椹胚都存在一种具有多个分叶的线粒体,但这种形态异常的线粒体同样也能够形成电子密度低、嵴丰富的成熟线粒体。【结论】牛卵母细胞与山羊体细胞之间不能有效的进行核-质互作,本研究中具体表现为出现多分叶形线粒体,从而影响牛-山羊异种克隆胚胎的发育。
- 敬晓棋雷安民屈雷窦忠英
- 关键词：山羊异种克隆超微结构线粒体
- 毛囊干细胞及其隆突微环境被引量：1
- 2005年
- 毛囊隆突(bulge)是毛囊干细胞特定的微环境,它维持并调节干细胞的特性,使干细胞在静息态、自我更新和分化上保持平衡。现重点从毛囊隆突的物理结构上来简要揭示微环境对干细胞的调控。
- 李伟杨学义窦忠英
- 关键词：毛囊干细胞隆突微环境
- 人卵母细胞体外成熟培养研究进展被引量：1
- 2006年
- 卵母细胞体外成熟是辅助生殖的基础,提高人卵母细胞的体外成熟率可为胚胎移植病人提供更多优质的胚胎。影响人卵母细胞体外成熟率的因素主要包括:年龄、体外培养时间及体外培养系统等。文章对人卵母细胞体外成熟的机理、影响卵母细胞体外成熟的因素进行了综述,最后对卵母细胞体外成熟的临床意义进行了展望。
- 王洪锋师娟子刘金萍周寒鹰窦忠英
- 关键词：人卵母细胞体外成熟培养影响因素
