国家自然科学基金(30901244)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 淡色库蚊视蛋白主要抗原域的原核表达及多克隆抗体制备
- 2012年
- 目的为进一步研究蚊视蛋白参与杀虫剂抗性的相关分子机制和将其作为现场抗性检测靶标提供多克隆抗体。方法以前期制备的重组质粒pGEM-T Easy/opsin为模板,通过基因工程手段克隆视蛋白基因胞外区片段,构建原核载体,IPTG诱导表达蛋白,并利用His亲和层析以及肠激酶酶切片段获得纯度较高的蛋白,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,Western blot鉴定抗体特异性。结果成功构建淡色库蚊视蛋白主要抗原域的原核表达载体,经IPTG 1mmol/L诱导3h后高效表达可溶性重组蛋白,经His亲和层析及肠激酶酶切后获得纯度较高的蛋白,制备的多克隆抗体经Western blot证实能特异性地识别蚊视蛋白而不与非特异性蛋白结合。结论成功构建了淡色库蚊视蛋白主要抗原域的原核表达载体,制备的抗重组蛋白多克隆抗体特异性好,效价较高,为进一步研究视蛋白参与杀虫剂抗性的分子机制和将其作为现场抗性检测靶标提供了基础。
- 邹萍孙艳孙海波朱昌亮
- 关键词：淡色库蚊抗药性原核表达多克隆抗体
