浙江省重大科技专项基金(2012C12013-3)
- 作品数：9 被引量：49H指数：4
- 相关作者：龚云飞张明洲奚茜吴莹莹李沐洁更多>>
- 相关机构：中国计量学院杭州迪恩科技有限公司中华人民共和国环境保护部更多>>
- 发文基金：浙江省重大科技专项基金浙江省重点科技创新团队项目浙江省农业科技成果转化资金项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程农业科学环境科学与工程生物学更多>>
- 青霉素结合蛋白在残留检测中的应用研究被引量：2
- 2013年
- 近年来,青霉素结合蛋白在青霉素残留检测技术上的应用已成为一个趋势,克服了其他青霉素残留检测技术的一些不足。因此全面了解和关注青霉素结合蛋白的研究进展十分必要。文中通过阅读近10年相关文献,对青霉素结合蛋白的发现分类、研究方法及在食品安全检测中的应用进行了综述。
- 夏澜冯朝艳黄鑫陈卓婧阎淑男龚云飞
- 关键词：青霉素结合蛋白
- 化学发光免疫法检测食品中恩诺沙星残留的研究被引量：4
- 2014年
- 建立了基于多克隆抗体的化学发光免疫检测技术，用于测定动物源性食品中恩诺沙星残留含量。反应条件优化结果为：抗体包被最佳稀释倍数为64000倍，最佳酶标抗原稀释倍数为256000倍。结果显示：该方法的回归曲线方程为y=-13．898x＋110．38（R。=0．9893），检测线性范围为3-810pg／mL，IC50为69．63pg／mL，ICm为1．41pg／mL；鸡肉、鱼肉、虾肉、蜂蜜、牛奶空白组织样品中恩诺沙星的最低检测限分别为3．76、4．59、2．85、2．65、4．20pg／mL，最低定量限分别为6．13、7.35、3．57、3．73和6．48pg／mL，回收率在88．28％-102．6％，板内和板间的平均变异系数分别为2．61％和4．71％。表明本研究建立的化学发光免疫检测方法满足动物源性食品恩诺沙星残留的检测要求。
- 龚云飞邹晓楠张露露吴莹莹戴明雁陈宗伦张明洲
- 关键词：恩诺沙星食品安全
- 玉米赤霉烯酮单克隆抗体制备及免疫分析被引量：3
- 2013年
- 采用活泼酯法将玉米赤霉烯酮（Zaralenone，ZEN）分别与牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联合成免疫原ZEN—BSA和包被原ZEN—OVA，经紫外扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定后免疫BALB/c小鼠；挑选产生高效价和高敏感性抗体的小鼠进行抗原超强免疫．取脾细胞与SP2／0细胞融合获得1株稳定分泌抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体的杂交瘤细胞（3D8）。经鉴定，该抗体亚类为IgG1，轻链为k型。经体内诱生腹水并纯化获得效价为l：2．048x106的单克隆抗体。建立了基于单克隆抗体的ZEN间接竞争ELISA法（ic—ELISA），该方法ic50和检出限分别为22．89pg／mL和10．07pg/mL。与a-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、a-玉米赤霉醇和β-玉米赤霉醇的交叉反应率分别为95％、8％、12％、6％和5％，而与黄曲霉毒素B1、呕吐毒素、伏马毒素B1和赭曲霉毒素A未见有交叉反应。在玉米、大麦、小麦和燕麦中加标的回收率在86．4％～104．8％之间。该方法灵敏特异。可作为快速检测谷物中玉米赤霉烯酮的初筛方法。
- 李沐洁张明洲奚茜陈宗伦王唯芬龚云飞
- 关键词：玉米赤霉烯酮单克隆抗体间接竞争ELISA
- 恩诺沙星直接竞争ELISA检测试剂盒的研制被引量：3
- 2013年
- 目的：应用多克隆抗体技术研制一种检测动物食品中恩诺沙星残留直接竞争酶联免疫检测试剂盒。方法：利用直接竞争ELISA法检测人为添加到动物食品中恩诺沙星的含量，与高效液相色谱的检测结果比较，并测定试剂盒的各项指标。结果：恩诺沙星质量浓度0．1～8．1ng／mL，标准曲线的线性回归方程y=-0．3769x＋0．7899（R2=0．9924），方法的检测灵敏度IC50=0．55ng／mL，IC50=0．11ng／mL；板内平均变异系数为3．73％，板间平均变异系数为7．42％；猪肝、猪肉、鸡肉、鱼、虾、猪血清、牛奶、蜂蜜组织样品中ENR最低检测限分别为3．24．3．33，6．08，0．89，1-34，0．64，0．73，0．58g／kg；添加25．0-200g／kg恩诺沙星时，回收率80．9％～100％。采用ELISA和HPLC两种检测方法的相关性大于95％。结论：本文研制的试剂盒可用于检测动物食品中恩诺沙星的残留。
- 邹晓楠龚云飞奚茜李沐洁张晓峰张明洲
- 关键词：多克隆抗体恩诺沙星动物食品
- 副溶血性弧菌PMA-LAMP方法的建立被引量：9
- 2016年
- 副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)是一种常见的食源性致病菌,在海鲜等食物中检出率很高,食用没有煮熟的带菌食物或者腌制品,极易引起食物中毒。目前用以检测副溶血性弧菌的快速检测方法都不能区别死活菌,容易出现假阳性结果。本研究基于DNA结合染料叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA),利用荧光染料钙黄绿素(Calcein)的特性,建立了一种实时的可视化环介导等温扩增方法(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),并与q PCR方法进行比较。实时可视化LAMP方法的反应结果,既可以肉眼直接观测,也可以借助荧光分析设备实时监测,并对半定量分析进行初探,为之后向定量分析深入研究打下基础。实验结果表明,实时可视化PMA-LAMP方法的灵敏度可达5.0×102 CFU/m L,模拟食样灵敏度为1.9×102 CFU/m L,与PMA-q PCR方法结果一致。除去前增菌时间,整个检测过程只需2 h,且准确率高,为副溶血性弧菌快速检测的开展提供了有效的技术支持。
- 马骉吴莹莹戴明雁方结红张明洲
- 关键词：副溶血性弧菌实时荧光定量PCR
- 链霉素人工抗原及多克隆抗体的制备与鉴定被引量：4
- 2013年
- 通过研究链霉素(SM)人工抗原的合成和多克隆抗体的制备,建立链霉素残留的免疫分析方法。以氧-缩甲基羟胺肟化链霉素的醛基,引入羧基,再用碳二亚胺法将半抗原与蛋白质载体连接,合成免疫原SM-cBSA。用戊二醛法合成包被原SM-OVA。用紫外扫描、SDS-PAGE分析偶联情况,计算得链霉素与cBSA、OVA的分子偶联比分别为7.6:1与17.7:1。经动物免疫获得效价为1:40000的链霉素多克隆抗体,采用间接竞争ELISA测定IC50为3.32ng/mL,与双氢链霉素的交叉反应率为105.21%,与同类的其他药物均无交叉反应。
- 奚茜李沐洁龚云飞陈宗伦方结红王唯芬张明洲
- 关键词：链霉素人工抗原多克隆抗体间接ELISA法
- 氧化乐果和毒死蜱混剂对大鼠雄性生殖功能的联合毒性被引量：15
- 2013年
- 为探讨有机磷农药混合物对生物生殖毒性的影响,以模式动物Sprague-Dawley(SD)大鼠为实验材料,采用亚慢性染毒动物实验,利用3×3析因实验设计方法研究了常见有机磷农药——氧化乐果和毒死蜱的联合雄性生殖毒性效应及机理。结果表明:氧化乐果和毒死蜱联合染毒60 d后,附睾系数增加,精子数量和精子活力降低,联合作用呈现协同效应(p<0.05);混配农药能降低睾丸标志酶乳酸脱氢酶(LDH)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)的活力,对LDH、ACP、γ-GT的联合作用表现为协同作用(p<0.05);混配农药能增加睾丸中促卵泡生成激素(FSH)含量,降低睾酮(T)含量,联合作用表现为协同作用(p<0.05)。通过组织病理学观察,氧化乐果和毒死蜱混合物能引起曲细精管的萎缩、畸形精子增多、生精细胞坏死、胞浆溶解和线粒体空泡化;支持细胞数量减少,出现坏死,精子从支持细胞上脱落,基底膜脱落等损伤。氧化乐果和毒死蜱对大鼠的联合生殖毒性为协同效应,混合后有明显的增毒作用;对睾丸标志酶(LDH、ACP、γ-GT)活力及睾丸性激素水平(FSH、T)的协同影响,是产生联合生殖毒性的机理之一。以上结果提示,对氧化乐果和毒死蜱进行环境健康风险评价时应考虑这种协同作用。
- 文一刘伟江赵康平张涛郜志云朱岗辉王东潘家荣
- 关键词：有机磷农药生殖毒性性激素
- 庆大霉素人工抗原及多克隆抗体的制备与鉴定被引量：3
- 2014年
- 为研究建立庆大霉素的免疫分析技术，合成庆大霉素人工抗原：采用碳二亚胺法将庆大霉素（gentamicin，GM）偶联到牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清蛋白（OVA）上，分别合成免疫原GM-BSA和包被原GM-OVA。通过紫外扫描和SDS-PAGE垂直电泳鉴定证明人工抗原偶联成功。以GM．BSA为免疫原，采用新的动物免疫方案免疫新西兰大白兔，获得抗庆大霉素抗血清。在本次免疫新方案中，在动物的生命周期内获得了多于普通免疫的血清量，在多抗血清的制备上是一次抗体工程上的尝试。通过间接酶联免疫对抗血清效价和灵敏度进行跟踪检测，结果表明抗血清效价在九免后稳定在1：20000左右，IC50则稳定在3ng／mL左右。并在八免血清基础上建立了GM间接竞争ELISA法。结果表明，庆大霉素浓度在0．3-243ng／mL，方法的线性回归方程为y=-0．10091nx＋0．6093和R2=0．9845，方法的检测灵敏度IC50=2．954ng／mL，最低检测限IC10=0．056ng／mL。该研究结果为多抗血清制备在量上的突破提供了思路，同时为研制庆大霉素试剂盒提供了良好的基础。
- 许耀心龚云飞陈宗伦奚茜戴明雁吴莹莹刘啊敏张明洲
- 关键词：庆大霉素人工抗原多克隆抗体
- 农产品中青霉素残留检测技术研究进展被引量：6
- 2013年
- 青霉素是一类通过破坏细菌细胞壁合成,从而起到遏制细菌繁殖作用的抗生素,在畜牧业和医疗中应用广泛。然而青霉素的不合理使用,会危害人体健康以及破坏环境,因此亟待研究快速检测青霉素含量的技术方法。目前,青霉素残留主要检测方法为微生物法、仪器分析法和免疫分析法。基于受体技术的分析法灵敏度高、原料获得周期短以及操作简便,近年来在β-内酰胺类抗生素残留检测中具有重要意义。
- 陈卓婧阎淑男夏澜龚云飞
- 关键词：青霉素牛奶
