江苏省教育厅自然科学基金(VK0410082)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 犬瘟热H基因亚单位的克隆和融合表达
- 2008年
- 将犬瘟热H基因亚单位片段(Hs)克隆入原核表达载体pGEX-6p-1中,克隆采用限制性内切酶EcoR I和XhoI酶切pGEX-6p-1以及Hs基因PCR产物,连接成pGEX-6p-1-Hs重组质粒,并将它转化进入大肠杆菌表达受体菌BL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,可见预计大小为32 kDa的融合蛋白,诱导菌体裂解物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后,用GST单克隆抗体进行Western-blotting试验,结果确证了GST-Hs融合蛋白的正确表达,这为今后的进一步研究奠定了基础。
- 徐向明张泉
- 关键词：克隆
- 犬瘟热病毒核衣壳蛋白保守区的表达与鉴定被引量：1
- 2008年
- 根据发表的犬瘟热病毒基因序列设计一对引物,利用PCR方法从重组质粒pcDNA-N中扩增到CDVNP保守区基因片段,并按预定的阅读框架插入表达质粒载体pGEX-6p-1中的谷胱苷肽转移酶(GST)基因的下游,获得重组质粒pNP-CDV并转化大肠杆菌BL21。序列测定表明,克隆到的基因片段大小为1065bp,与已发表的毒株核衣壳蛋白基因序列具有很高的同源性。通过对菌体裂解物的SDS-PAGE、Wester nblot鉴定以及IFA试验,证明携带重组质粒pNP-CDV的大肠杆菌的可以表达融合蛋白形式的核衣壳蛋白保守区域(命名为GST-NP,分子量约为64ku),该融合蛋白具有免疫原性和对CDV高免血清的反应活性。GST-NP的表达,将为临床检测CDV抗体提供诊断抗原。
- 徐向明李娜杨玲殷俊张泉薛整风
- 关键词：犬瘟热核蛋白
