辽宁省自然科学基金(20072169)
- 作品数：4 被引量：12H指数：3
- 相关作者：刘丹丹刘奔孟秀香刘纯青郑翔宇更多>>
- 相关机构：大连医科大学河南省中医院大连医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Bmi-1-siRNA对肺腺癌A549细胞体内外增殖能力的影响被引量：6
- 2013年
- 背景与目的:原癌基因Bmi-1是多梳基因家族中的一员,能调节正常干细胞和肿瘤干细胞的自我更新能力。近年来发现其在多种恶性肿瘤中表达上调。本文旨在观察Bmi-1基因沉默对肺腺癌A549细胞体内外增殖的影响,并初步探讨其机制。方法:根据本实验室设计的4条针对Bmi-1的小干扰RNA(siRNA)序列,选择一条已经证实最有效的序列作为靶序列和一条随机序列作为阴性对照,构建重组逆转录病毒siRNA表达载体并将其转染入A549细胞中;应用RT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测对Bmi-1基因的沉默效果;应用MTT比色法、台盼蓝拒染法及平板克隆形成实验检测Bmi-1-siRNA对A549细胞体外增殖的影响;利用流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期;通过裸鼠腋窝皮下接种各组细胞,观察Bmi-1-siRNA对A549细胞在裸鼠体内的致瘤能力的影响;Western blot检测PTEN、p-AKT、cyclin D1、P21、P27蛋白表达。结果:Bmi-1-siRNA有效地沉默了Bmi-1基因mRNA和蛋白的表达;沉默Bmi-1基因的表达能够抑制A549细胞的体内外增殖能力,使干扰组细胞的细胞周期阻滞于G1期;沉默Bmi-1基因的表达后,干扰组细胞中PTEN、P21、P27蛋白增加,p-AKT、cyclin D1蛋白表达降低。结论:Bmi-1-siRNA通过使细胞周期阻滞于G1期来抑制肺腺癌A549的体内外增殖能力,这种抑制作用涉及cyclin D1和p-AKT表达下降以及P21/P27和PTEN的表达上调。
- 郑翔宇朱杰王艺芳刘纯青刘奔杨春辉刘丹丹孟秀香
- 关键词：肺腺癌小干扰RNABMI-1基因
- 反义Bmi-1 RNA转染对人肺癌细胞株A549体外增殖的影响被引量：3
- 2009年
- 目的研究转染反义Bmi-1RNA对人肺腺癌细胞A549的体外增殖及细胞周期和凋亡的影响。方法将表达反义Bmi-1RNA的真核表达载体稳定转染A549细胞株，G418筛选挑取阳性克隆。应用即时荧光定量RT-PCR及Westernblot检测转染后Bmi-1基因在mRNA水平及蛋白水平的表达；应用M1Tr比色法及平板克隆形成实验检测A549细胞体外生长能力；用PI单染及Annexin-VPI双染技术在流式细胞仪上检测细胞周期及凋亡情况。结果Westernblot结果显示转染反义Bmi-1RNA使A549细胞中Bmi-1蛋白表达量减少了95％；MTT检测细胞生长曲线表明反义Bmi．1RNA使A549细胞生长速度明显减慢；平板克隆形成实验结果显示转染反义Bmi．1RNA的A549细胞在平板中形成集落的数目（0．67±0．50）明显低于未转染组（73．04±4．1）及转染空质粒组（67．04±4．0，P〈0．01）；流式细胞仪结果显示反义Bmi-1使A549细胞阻滞在G0／G1期，但对细胞凋亡没有影响。结论反义Bmi-1RNA在体外对A549细胞增殖有明显的抑制作用，其抑制作用是通过使A549细胞阻滞在G0／G1期实现的。
- 于琦孟秀香刘奔刘丹丹张伟刘卫红杨光
- 关键词：转染反义BMI-1
- siRNA沉默Bmi-1表达对肺腺癌A549细胞侵袭能力的影响被引量：1
- 2015年
- 目的观察Bmi-1基因沉默对A549细胞增殖和侵袭影响并初步探讨其机制。方法根据四条针对Bmi-1的小干扰RNA(siRNA)序列,将其瞬时转染到A549细胞中,选择最有效的一条链并构建到逆转录病毒真核表达载体p SUPERretro-Neo中,形成重组载体,然后将其稳定转染至A549细胞中,构建了稳定转染Bmi-1-shRNA的A549细胞。应用MTT实验检测Bmi-1-siRNA对A549细胞体外增殖的影响;Transwell小室观察其对A549侵袭能力的影响;RT-PCR和明胶酶谱法分别观察siRNA对A549细胞MMP-2/MMP-9表达及活性的影响。结果 Bmi-1 siRNA能够抑制A549细胞的增殖能力和侵袭能力,Bmi-1 siRNA能够抑制A549细胞MMP-2/MMP-9的表达和活性。结论 Bmi-1 siRNA对A549细胞侵袭能力的抑制和MMP-2/MMP-9的活性降低有关。
- 刘丹丹郑翔宇刘奔刘纯青王艺芳赵宝霞孟秀香
- 关键词：肺腺癌SIRNABMI-1基因
- Bmi-1 siRNA对宫颈癌Hela细胞体外增殖能力的影响被引量：3
- 2012年
- [目的]观察siRNA沉默Bmi-1表达对Hela细胞增殖能力的影响。[方法]构建了表达Bmi-1 siRNA的重组真核表达载体,将其转染入Hela细胞,利用荧光法观察转染效率。用RT-PCR及Western blot方法检测转染后细胞Bmi-1 mRNA及Bmi-1蛋白的表达情况;用MTT比色法、台盼蓝拒染法检测Bmi-1 siRNA对Hela细胞增殖的抑制作用;用流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期;用平板克隆形成实验检测Bmi-1 siRNA对Hela细胞的单细胞增殖能力的影响;应用免疫细胞化学(SP法)及Western blot法检测各组细胞Ki-67及CyclinD1的表达。[结果]将构建好的重组质粒成功转染进入了Hela细胞中且转染效率在90%左右;Bmi-1 siRNA转染Hela细胞Bmi-1 mRNA及Bmi-1蛋白表达沉默,Bmi-1表达沉默后抑制Hela细胞增殖并使细胞周期阻滞于G0-G1期,能明显抑制Hela细胞的单细胞增殖能力;同时Ki-67及CyclinD1的表达均明显下降。[结论]siRNA介导的Bmi-1基因的表达沉默能抑制Hela细胞的增殖能力,Bmi-1表达可能与宫颈癌的发生发展相关。
- 刘丹丹姜悦刘奔刘纯青魏巍张艳丽赵心宇赵宝霞孟秀香
- 关键词：BMI-1基因HELA细胞增殖
