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野生大豆DREB基因的筛选与结合功能分析被引量：2: 2009年; 以野生大豆(Glycine Soja)为材料,利用酵母单杂交的方法筛选到一个能够与DRE元件(DehydrationResponsive Element)结合转录因子-GsDREB(DRE Binding protein).通过体内和体外结合试验分析,该转录因子能够与DRE元件结合,经序列分析,GsDREB氨基酸序列N-末端含有核定位信号(nuclear localization sig-nal,NLS)、在C-末端含有酸性活性区域(acidic activation region,AAR),在序列内部具有由58个氨基酸编码的、能够与DNA结合的保守区域-DREBP/AP2结构域.该蛋白可能是野生大豆DREB家族的新成员.; 才华朱延明柏锡王希; 关键词：非生物胁迫 GLYCINE SOJA 酵母单杂交

野生大豆DREB基因cDNA的克隆与分析被引量：6: 2009年; 以野生大豆Glycine soja叶片总RNA为模板,根据其他双子叶植物DREBP/AP2结构域的保守氨基酸序列设计简并引物,通过降落和巢式PCR进行扩增,获得1条190 bp的cDNA片段。以此序列设计引物,采用RACE扩增3’和5’末端未知序列,最终克隆到野生大豆DREB全长基因(GsDREB)。该基因1 191bp编码395个氨基酸,基因内部没有内含子。氨基酸分析表明,其N-末端具有核定位信号(nuclear localiza-tion signal,NLS),并具有由58个氨基酸编码的、能够与DNA结合的保守区域-DREBP/AP2结构域。通过多序列比对分析,该基因与拟南芥Arabidopsis thalianaDREB2C氨基酸序列相似性最高,推测其为DREB2亚家族的成员。; 才华朱延明柏锡李勇纪巍; 关键词：野生大豆 DREB 同源克隆 RACE 非生物胁迫

SMART-SH技术的建立及应用被引量：1: 2005年; 文章以构建的东北野生大豆盐胁迫全长cDNA文库为起始材料,通过将SMART方法与减法杂交相结合,首次初步建立了一种直接获取全长差异cDNA的技术,即SMART-SH技术,弥补了现有技术无法直接得到差异表达基因的全长序列这一不足。进一步讨论了该技术的优缺点,及其在构建全长差减cDNA文库上的优势和应用前景。; 王希李杰朱延明才华柏锡; 关键词：SMART

野生大豆GsbZIP33基因的分离及胁迫耐性分析被引量：11: 2011年; bZIP(basic leucine zipper)类转录因子在植物的生长发育、光形态建成、光信号传导及非生物胁迫反应中发挥重要的作用,已成为非生物胁迫基因工程领域的研究热点。本研究以野生大豆(Glycine soja)为材料,利用同源克隆的方法克隆了GsbZIP33转录因子基因,该基因与大豆GmbZIP33(DQ787064)及拟南芥AtbZIP53(NP_171677.1)分别具有95%和54%的相似性,同属于bZIP-S亚家族的成员。GsbZIP33能够响应高盐、干旱和低温胁迫,并且在根和叶中具有不同的表达模式。超量表达GsbZIP33基因的拟南芥对盐胁迫的敏感性提高。以上结果表明,GsbZIP33基因是野生大豆bZIP家族的新成员,并且参与植物非生物胁迫反应过程,意味着该基因在非生物胁迫基因工程研究领域具有良好的理论研究和实际应用价值。; 才华朱延明柏锡纪巍李勇王冬冬孙晓丽; 关键词：野生大豆转录因子非生物胁迫

野生大豆盐胁迫响应基因GsPIP的克隆及其序列分析被引量：3: 2011年; 盐胁迫是影响植物生长、发育以至产量的重要因素,野生大豆是优良的非生物胁迫抗性材料,是天然的优质抗性基因库。本研究以耐盐东北野生大豆为试材,利用东北农业大学植物生物工程研究室已获得的基因芯片杂交结果,对植物生物工程研究室构建的野生大豆盐胁迫EST数据库中各EST在胁迫下的表达情况进行了分析,从中选出了1个在高盐、低温、干旱胁迫早期均上调表达的3′-EST,序列分析表明该EST编码质膜结合蛋白(plasmamembrane intrinsic protein,PIP),属于主嵌入蛋白(major intrinsic protein,MIP)家族;通过电子克隆和改进的5′-RACE获得了基因完整的编码区;其翻译产物与含羞草质膜结合蛋白的相似性为90%,将该基因命名为GsPIP。GsPIP基因的翻译产物具有主嵌入蛋白家族特征性的跨膜结构域,无信号肽,与已发现的植物PIP蛋白一致。本研究获得的基因具有自主知识产权,通过进一步的功能分析,可为耐渗透胁迫基因工程研究提供基因资源,并为植物耐渗透胁迫机理研究提供依据。; 王希李勇柏锡才华纪巍朱延明; 关键词：野生大豆盐胁迫

电子克隆技术及其在植物基因工程中的应用被引量：72: 2006年; 电子克隆是随着基因组计划和EST计划的实施而发展起来的,是利用生物信息学手段进行基因克隆的新方法。它具有投入低、速度快、技术要求低和针对性强等优点。因此,电子克隆技术必将成为植物基因工程中获得新基因的重要手段。阐述了电子克隆应用所依据的数据库与生物信息资源,介绍了利用电子克隆获得功能基因的方法,及其在植物基因工程中的应用现状与前景。; 王冬冬朱延明李勇李杰柏锡; 关键词：电子克隆植物基因工程生物信息学

组成型表达S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因提高转基因马铃薯抗旱耐盐碱性研究被引量：4: 2013年; 以马铃薯品种大西洋无菌苗茎段为外植体,应用农杆菌介导法,组成型表达来源于野生大豆的S-腺苷甲硫氨酸合成酶(S-Adenosyl-L-Methionine Synthetase,GsSAMS)基因,获得PCR及RT-PCR阳性的转基因马铃薯。应用SAS和DPS数据处理软件对7个转基因株系与未转化株系分别经干旱、盐、碱胁迫及无胁迫后的株高、叶绿素含量、叶片相对保水率、相对电导率等形态及生理指标与产量进行统计分析。结果表明,SM22、SM4、SM33、SM13等4个马铃薯转基因株系具有较高的抗逆性,无论是逆境还是正常条件下栽培,产量均比未转基因植株有所增加。相关性分析结果显示,四种处理后马铃薯叶绿素含量、株高、相对电导率、相对保水率与产量具有线性相关性。; 陈秀华王冬冬李先平李倩朱延明陈勤; 关键词：马铃薯茎段生理指标

野生大豆CDPK基因保守区的克隆及序列分析被引量：7: 2006年; CDPK(Ca2+-dependent,calmodulinindependentproteinkinase)是植物钙信号传导过程中关键的蛋白激酶,在逆境胁迫信号传导过程中起到重要作用。研究基于同源序列候选基因的策略,根据已经公布的多个CDPK序列的比对结果,在保守性较高的区域,设计两对巢式简并引物,结合降落PCR和巢式PCR在野生大豆中克隆。对获得的序列片段进行序列分析,发现该序列具有激酶活性的功能区域和CDPK特有的EF手性结构区,并且与VrCDPK(U08140)序列达到94%的相似性,可以确定该片段是CDPK基因的保守序列。结果证明,野生大豆中也存在CDPK基因,并为通过RACE等方法获得野生大豆全长CDPK基因奠定了基础。; 才华朱延明李杰柏锡李勇; 关键词：野生大豆渗透胁迫基因克隆

Research Progress in Digging and Validation of miRNA Target Genes Using Experimental Methods被引量：1: 2012年; MicroRNAs （miRNAs） are a group of regulatory RNAs that regulate gene expression post-transcriptionally by the degradation or translational inhibition of their target messenger RNAs （mRNAs）. Regulation is accomplished when the 22-25 nucleotide miRNAs bind to complementary sequences in the 3＇-untranslated regions （UTR）. One barrier to miRNA research is to find target genes. Although computational target predictions have shed light on important aspects of microRNA target recognition, questions remain concerning the rates of false positives. In addition, we do not completely understand how microRNAs can recognize and regulate their targets. As such, experimental positive predictions and allow for an unbiased stu ap dy proaches are required, which can reflect in vivo processes, eliminating false of microRNA target recognition. In this review, we summarized experimental approaches that have been described for the identification and validation of mRNA targets associated with specific miRNAs.; Luo XiaoBai XiCai HuaJi WeiLiu XinTang Li-liZhu Yan-ming; 关键词：MIRNA TARGET

谷胱甘肽S-转移酶的研究进展被引量：36: 2013年; 植物谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)是一种普遍存在的参与多种细胞功能的蛋白,具有参与初生代谢、次生代谢、除草剂解毒作用和保护植物免受氧化损伤及异源物质隔离等作用。同时,它又能作为配体蛋白在植物激素代谢方面发生作用。文章对GSTs的结构和功能进行概述,并详细阐述了国内外植物GSTs的研究,特别是在参与植物非生物胁迫方面的进展,以期对植物抗逆基因工程的研究提供参考和理论依据。; 陈秀华王臻昱李先平朱延明刘丽陈威陈勤; 关键词：二聚体非生物胁迫

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国家自然科学基金(30471059)

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