天津市自然科学基金(08JCYBJC06900)
- 作品数：9 被引量：38H指数：5
- 相关作者：王越牛秀珑朱雅琴吴健毛立群更多>>
- 相关机构：武警医学院天津市职业与环境危害生物标志物重点实验室更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- IFN-γ和IL-4对乳腺癌细胞MCF-7生长及雌激素受体亚型影响的观察被引量：5
- 2011年
- 目的:探讨干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)对人乳腺癌细胞株MCF-7的生长特性及雌激素受体(ER)亚型表达的影响。方法:以不同浓度IFN-γ(50、100和150μg/L)或IL-4(5、10和25μg/L)分别作用MCF-7细胞24、48、72和96h,MTT法检测细胞的增殖水平。选择100μg/L IFN-γ或10μg/L IL-4作用细胞96h(M/IFN-γ或M/IL-4),蛋白质印迹法检测ERα和ERβ的蛋白表达,流式细胞术分析细胞周期,RT-PCR检测凋亡抑制基因mRNA表达。结果:与对照组相比,IFN-γ作用96h后,细胞增殖活性受到抑制(100μg/L组P=0.000,150μg/L组P=0.003),G0～G1期细胞比例增多(P=0.003),S期减少(P=0.005),ERβ蛋白表达水平增加,P=0.038。IL-4作用96h后,细胞增殖活性增强(10μg/L组P=0.006,25μg/L组P=0.002),G0～G1期细胞比例减少(P=0.008),S期增多(P=0.007),ERβ蛋白表达水平减少(P=0.021),凋亡抑制基因的表达水平增加,P值分别为0.002、0.000和0.004。结论:辅助性T淋巴细胞1型(Th1)类细胞因子IFN-γ和Th2类细胞因子IL-4可分别促进或抑制ERβ表达,进而抑制或促进肿瘤细胞生长;Th1/Th2偏移对乳腺癌细胞生长特性的作用,可能与改变ER亚型表达比例有关。
- 牛秀珑毛立群叶路王越
- 关键词：乳腺肿瘤白细胞介素4
- 卵巢癌细胞IL-6、IL-8分泌与其他莫西芬敏感性及ER亚型及p160共激活因子表达关系的初步探讨被引量：9
- 2010年
- 目的分析比较4种常见的人上皮性卵巢癌细胞系(A2780、CAOV-3、SKOV-3和ES-2)IL-6、IL-8分泌与其他莫西芬(Tamoxifen,TAM)敏感性及雌激素受体(estrogen receptor,ER)亚型及p160共激活因子表达的关系,为今后研究IL-6、IL-8诱导卵巢癌细胞对内分泌治疗产生耐药的机制奠定基础。方法 IL-6、IL-8的表达采用RT-PCR及ELISA法进行检测,卵巢癌细胞对TAM的敏感性采用MTT试验进行分析,ERα、ERβ及p160共激活因子的表达采用免疫印迹和RT-PCR技术进行检测。结果 4种卵巢癌细胞除A2780细胞外均组成性分泌IL-6和IL-8;4种细胞对TAM的敏感性不同,其中A2780细胞最敏感,CAOV-3、SKOV-3和ES-2细胞则有不同程度的耐药性(耐药倍数分别为4.98、3.75和2.66);这些细胞均不同程度地表达ERα,其中A2780细胞较低,CAOV-3和SKOV-3细胞较高,ES-2细胞居中;ERβ的表达情况则与ERα恰好相反;3种p160共激活因子mRNA的表达水平均以A2780细胞为最低,而ES-2、SKOV-3和CAOV-3细胞则依次升高。结论卵巢癌细胞IL-6、IL-8的自分泌水平与其对TAM的敏感性呈负相关,与其ERβ(而非ERα)及3种p160共激活因子的表达水平相一致。
- 王越刘昕邢杰朱雅琴吴健孙维甲王素青
- 关键词：IL-6IL-8卵巢癌细胞他莫西芬
- 雌激素受体亚型对人乳腺癌细胞株MCF-7生物学特性的影响被引量：5
- 2011年
- 目的构建雌激素受体（ER）亚型ERα/ERβ不同表达状态的人乳腺癌细胞株MCF-7,观察其生物学特性。方法采用RNA干扰技术沉默ERα或ERβ基因表达,获得不同ERα或ERβ表达状态的MCF-7细胞株。运用MTT法、流式细胞术、RT-PCR法、双层软琼脂集落形成实验和体外细胞黏附实验方法检测细胞增殖、凋亡、体外成瘤和黏附能力。结果 构建稳定表达ERαlow/ERβhigh或ERαhigh/ERβlow的MCF-7细胞株。ERα基因沉默后,细胞生长减慢,受阻于G0~G1期,细胞凋亡增加,体外成瘤能力和黏附能力减弱;ERβ基因沉默后,细胞生长加快,S期细胞比例增加,细胞凋亡受到抑制,体外成瘤能力增强,而黏附特性无变化。结论 ERα基因沉默可抑制肿瘤的形成;而ERβ基因沉默可促进肿瘤生长、侵袭和转移。调节ERα/ERβ表达状态可能会成为一种有效的乳腺癌治疗手段。
- 牛秀珑王奕飞孙奕王越
- 关键词：雌激素受体RNA干扰乳腺癌
- 卵巢癌细胞IL-6、IL-8分泌与其化疗敏感性及耐药相关基因和凋亡抑制基因表达关系的初步探讨被引量：11
- 2009年
- 目的分析比较4种常见的人上皮性卵巢癌细胞系IL-6、IL-8分泌与其化疗敏感性及部分耐药相关基因和凋亡抑制基因表达的关系,为今后研究IL-6、IL-8诱导卵巢癌细胞对化疗药物产生耐药的机制奠定基础。方法IL-6、IL-8及其受体的表达采用RT-PCR、ELISA及免疫印迹技术进行检测,卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性采用MTT试验进行分析,耐药相关基因和凋亡抑制基因的表达则采用RT-PCR进行测定。结果1)4种卵巢癌细胞除A2780细胞外均组成性分泌IL-6和IL-8,二者转录水平与其蛋白水平基本一致。2)4种卵巢癌细胞均表达IL-6受体和IL-8受体。3)4种卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性不同,其中A2780细胞最敏感,ES-2细胞次之,CAOV-3和SKOV-3细胞则有不同程度的耐药性。4)部分耐药相关基因和凋亡抑制基因在A2780和ES-2细胞中的表达水平均较低,而在CAOV-3和SKOV-3细胞中的表达水平均较高。结论卵巢癌细胞IL-6、IL-8的自分泌水平(尤其是IL-6的水平)与其对顺铂和紫杉醇的敏感性基本呈负相关趋势,与其部分耐药相关基因和凋亡抑制基因的表达水平相一致。
- 王越牛秀珑郭小芹吴健朱雅琴毛立群屈野李覃
- 关键词：IL-6IL-8卵巢癌细胞化疗敏感性耐药相关基因凋亡抑制基因
- 雌激素受体亚型对乳腺癌MCF-7细胞生长及微环境中Th平衡的影响被引量：3
- 2011年
- 目的:研究雌激素受体(estrogen receptor,ER)亚型对人乳腺癌细胞MCF-7的生长及Th1/Th2类细胞因子分泌的影响。方法:采用RNA干扰技术沉默MCF-7细胞中ERα或ERβ的表达,获得ERα/ERβ不同表达状态的MCF-7细胞。应用MTT法、流式细胞术、RT-PCR法分别检测MCF-7细胞的增殖、细胞周期和凋亡抑制基因的表达,ELISA法检测细胞上清中IFN-γ和IL-4的分泌水平。结果:经RNA干扰后MCF-7细胞的ERα或ERβ蛋白表达水平分别下降了(77.7±3.3)%和(68.3±2.1)%。与对照组相比,ERα基因沉默后,MCF-7细胞生长减慢(P<0.05),受阻于G0～G1期,凋亡抑制基因XIAP的表达水平降低为对照组的(43.0±2.0)%,IFN-γ分泌水平增加至对照组的(1.89±0.34)倍;ERβ基因沉默促进MCF-7细胞的生长(P<0.05),S期细胞比例增加,凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xl、XIAP的表达水平分别升高至对照组的(1.28±0.21)、(1.61±0.32)和(1.65±0.29)倍,IFN-γ分泌水平降低为对照组的(28.0±4.0)%。结论:ER亚型的表达状态可影响MCF-7细胞的生长,并通过调节IFN-γ的自分泌水平诱导微环境发生Th偏移。
- 牛秀珑叶路毛立群王越
- 关键词：雌激素受体乳腺癌ERΑERΒ
- 外源性IL-8诱导卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生耐药的机制及相关信号转导通路的初步探讨被引量：5
- 2010年
- 目的探讨外源性IL-8诱导卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生耐药的机制及相关信号转导通路。方法在原工作基础上,以两种人卵巢癌细胞系A2780(不分泌IL-8,对顺铂、紫杉醇敏感)和SKOV-3(高分泌IL-8,对顺铂、紫杉醇耐药)为研究模型,观察外源性IL-8是否影响卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性,并对其作用的机制和可能的信号转导通路进行研究。结果①体外经IL-8处理的A2780细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性均明显降低即产生部分耐药(耐药倍数分别为6.07和7.23),其耐药程度均低于IL-8高表达的SKOV-3细胞(耐药倍数分别为8.22和9.03)。②IL-8可以剂量依赖的方式上调A2780和SKOV-3细胞的耐药相关基因MDR1和凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xL及XIAP的表达。③MEK1/2抑制剂和PI3K抑制剂均能阻断IL-8诱导的卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生的耐药。结论IL-8-很可能通过上调耐药相关基因MDR1和凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xL及XIAP的表达而致卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生耐药。IL-8的上述作用是由Ras/Raf/MEK/MAPK和PI3K/Akt信号通路介导的。
- 王越吴健刘昕朱雅琴孙维甲李德金王素青
- 关键词：IL-8卵巢癌细胞信号转导通路
- 卵巢癌细胞ER亚型和p160共激活因子表达及其与他莫西芬和雌激素敏感相关性被引量：1
- 2010年
- 目的:分析比较4种常见的人上皮性卵巢癌细胞系(A2780、CAOV-3、SKOV-3和ES-2)雌激素受体(ER)亚型及p160共激活因子表达及其对他莫西芬(TAM)和雌激素敏感性的关系。方法:采用免疫印迹法和RT-PCR技术检测ERα、ERβ及p160共激活因子的表达,采用MTT试验测定卵巢癌细胞对TAM和17β-雌二醇(E2)的敏感性。结果:4种卵巢癌细胞均表达ERα,其中A2780细胞较低,CAOV-3和SKOV-3细胞较高,ES-2细胞居中;ERβ的表达情况则与ERα恰好相反;3种p160共激活因子mRNA的表达水平均以A2780细胞为最低,而ES-2、SKOV-3和CA-OV-3细胞则依次升高;4种卵巢癌细胞对TAM的敏感性不同,其中A2780细胞最敏感,CAOV-3、SKOV-3和ES-2细胞则有不同程度的耐药性,其耐药倍数分别为4.98、3.75和2.66;除SKOV-3细胞外,E2对CAOV-3、ES-2和A2780细胞均有不同程度的促增殖作用,其强度依次降低。结论:卵巢癌细胞ERβ表达水平与其对TAM的敏感性呈正相关趋势;3种p160共激活因子表达水平与卵巢癌细胞对TAM的敏感性呈负相关趋势,与ERα而非ERβ的表达水平相一致。
- 王越屈野牛秀珑吴健朱雅琴李覃
- 关键词：转录因子
- 卵巢癌细胞IL-6、IL-8分泌与他莫西芬敏感性及MAPK、Akt活性和ER特异性位点磷酸化水平的关系被引量：8
- 2010年
- 目的:分析比较4种常见的人上皮性卵巢癌细胞系(A2780、CAOV-3、SKOV-3和ES-2)IL-6、IL-8分泌与他莫西芬(TAM)敏感性及MAPK、Akt活性和雌激素受体(ER)特异性位点磷酸化水平的关系,探讨IL-6、IL-8诱导卵巢癌细胞对内分泌治疗产生耐药的机制。方法:RT-PCR及ELISA法检测IL-6、IL-8的表达,MTT法分析卵巢癌细胞对TAM的敏感性,免疫印迹法测定MAPK、Akt活性及ER特异性位点的磷酸化水平。结果:(1)4种卵巢癌细胞除A2780细胞外均组成性分泌IL-6和IL-8,二者转录水平与其蛋白水平基本一致;(2)4种卵巢癌细胞对TAM的敏感性不同,其中A2780细胞最敏感,CAOV-3、SKOV-3和ES-2细胞则有不同程度的耐药性,其耐药倍数分别为4.99、3.76和2.66;(3)4种卵巢癌细胞的MAPK、Akt活性存在差异,CAOV-3细胞的二者活性最强,SKOV-3细胞的MAPK活性弱于ES-2细胞,而其Akt活性则强于ES-2细胞,A2780细胞未检测到二者有活性;(4)ER的第167位丝氨酸(Ser167)在四种卵巢癌细胞中均存在不同程度的磷酸化,ER的第118位丝氨酸(Ser118)除A2780细胞外亦存在不同程度的磷酸化。结论:卵巢癌细胞IL-6、IL-8的自分泌水平与其对TAM的敏感性呈负相关,与其MAPK、Akt活性和ER特异性位点(Ser167、Ser118)的磷酸化水平相一致。
- 王越郭小芹牛秀珑吴健朱雅琴毛立群
- 关键词：卵巢癌细胞他莫西芬MAPKAKTER
- 人IL-8正义和反义真核表达载体的构建与表达
- 2009年
- 目的:构建人IL-8正义和反义真核表达载体。方法:RT-PCR扩增正义和反义IL-8基因片段后,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),通过菌落PCR、双酶切及测序进行鉴定后,采用脂质体法分别瞬时转染至人卵巢癌细胞系A2780和SKOV3细胞中,并用RT-PCR和ELISA法检测细胞转染后IL-8的表达水平。结果:经验证,重组人IL-8正义/反义真核表达载体构建正确。pcDNA3.1(+)-ssIL-8转染A2780细胞后,其IL-8 mRNA及蛋白表达水平均显著增加;而pcDNA3.1(+)-asIL-8转染SKOV3细胞后,其IL-8分泌水平降低。结论:成功构建了人IL-8正义/反义真核表达质粒pcDNA3.1(+)-ssIL-8/pcDNA3.1(+)-asIL-8,为后续研究IL-8在卵巢癌及其他肿瘤中的作用打下基础。
- 牛秀珑王越屈野郭小芹叶路
- 关键词：IL-8真核表达载体卵巢癌细胞
