陕西省科技统筹创新工程计划项目(2012KTCQ03-11)
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
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- 异种去细胞角膜基质浸提液对CHL细胞毒性的实验研究
- 2016年
- 目的通过鸵鸟去细胞角膜基质浸提液对中国仓鼠肺纤维细胞（CHL）毒性的实验观察，筛选出浸提液的最大无毒浓度，为进一步完成该去细胞角膜基质材料的染色体畸变实验奠定基础。方法采用细胞培养的方法，将鸵鸟去细胞角膜基质材料制备成浸提液，用浸提原液、1：2，1：4稀释的浸提液与传代培养的CHL细胞共同培养，同时设立阴性、阳性对照，参考MTT比色法评价24h后对细胞生长的影响。结果1：4稀释的浸提液既无毒性，又具有促进细胞生长的作用。结论采用CHL细胞进行细胞毒性试验，依据分级结果并结合细胞形态学特征可筛选出鸵鸟去细胞角膜基质浸提液进行CHL细胞染色体畸变实验的基准无毒浓度。
- 刘先宁汪耀肖湘华潘士印银勇安娜朱秀萍
- 关键词：细胞毒性试验
- 复方倍他米松对异种角膜板层移植术后免疫排斥反应的影响
- 2018年
- 目的:观察结膜下注射复方倍他米松对鸵鸟-兔眼板层角膜移植术后免疫排斥反应的缓释治疗作用。方法:16只6周龄健康新西兰白兔角膜(单眼)行板层角膜移植术,植片应用鸵鸟脱细胞的角膜基质,术后分成两组,实验组术毕及术后结膜下注射复方倍他米松注射液(每隔7d一次),对照组术毕及术后结膜下注射地塞米松磷酸钠注射液(每隔7d一次)。分别于术后1、2wk,1、2mo取兔角膜组织做石蜡包埋切片,进行HE染色观察组织特点,同时进行间接免疫荧光法检测CD4^+、CD8^+T淋巴细胞的变化。结果:术后2mo,实验组角膜植片在位,并保持透明,新生血管极少,组织切片HE染色和间接免疫荧光染色结果显示,仅见少许中性粒细胞浸润,未见CD4^+、CD8^+T淋巴细胞;对照组炎症反应明显,角膜植片混浊,组织切片HE染色和间接免疫荧光染色结果显示,炎性反应以中性粒细胞浸润为主,可见CD4^+、CD8^+T淋巴细胞。结论:复方倍他米松作为长效缓释剂可有效抑制鸵鸟-兔板层角膜移植术后免疫排斥反应,延长植片的存活时间。
- 程燕刘先宁吴洁肖湘华潘士印朱秀萍
- 关键词：免疫排斥反应CD4+T淋巴细胞CD8+T淋巴细胞
- 干燥脱水保存鸵鸟脱细胞角膜基质载体材料的细胞毒性被引量：4
- 2013年
- 背景:陕西省眼科研究所通过前期研究发现鸵鸟角膜具有开发成为人角膜材料替代品的优势。目的:判断鸵鸟角膜基质支架材料对细胞的潜在毒性作用。方法:采用细胞培养方法,将干燥脱水法保存的鸵鸟脱细胞角膜基质载体支架制备成浸提液与 L-929 细胞共同培养,采用 MTT 比色法评价其作用 1,2,3 d,对细胞生长和增殖的影响。结果与结论:干燥脱水法保存的鸵鸟脱细胞角膜基质载体支架浸提液组培养 1,3,5 d,对实验细胞毒性反应级别均为 1 级。参照《中华人民共和国国家标准 GB/T16886.5-2003》进行细胞毒性试验,供试品组见少量细胞呈圆形,疏松贴壁,无胞浆内颗粒,偶见细胞溶解。结合 MTT 法分析结果表明,采用干燥脱水法保存鸵鸟脱细胞角膜基质载体材料,细胞毒性为 1 级,为合格材料。
- 刘先宁朱秀萍吴洁王莉芳银勇
- 关键词：组织工程角膜角膜鸵鸟细胞毒性试验
- 荧光染色法在实验性异种角膜移植术后免疫诊断中的应用
- 2013年
- 目的:采用单克隆抗体间接免疫荧光法测定异种角膜移植术后不同时间点角膜组织中CD4,CD8T淋巴细胞的变化。方法:取正常兔角膜、腋窝淋巴结组织;鸵鸟-兔异种角膜移植术后1,2wk角膜组织,经甲醛固定,常规石蜡包埋切片脱蜡复水,胃酶消化法进行抗原修复,用鼠抗兔CD4,CD8单克隆抗体及荧光标记的羊抗鼠IgG进行免疫组化测定,荧光显微镜下观察角膜组织中CD4+,CD8+T淋巴细胞的表达。结果:鸵鸟-兔异种角膜移植后1wk角膜组织中CD4+,CD8+T淋巴细胞的表达为阴性,2wk时T淋巴细胞CD4呈强阳性表达,CD8呈阴性表达。结论:采用间接免疫荧光法测定动物异种角膜移植术后不同时间点局部角膜组织中CD4+,CD8+T淋巴细胞的表达,为异种角膜移植排斥反应机制研究及术后药物筛选奠定实验基础。
- 刘先宁武鹏安吴洁程燕潘士印肖湘华艾婷婷安娜王伟朱秀萍
- 关键词：异种角膜移植石蜡包埋组织
- 鸵鸟去细胞异种角膜基质载体异位移植对BALB/c小鼠外周血T细胞亚群的影响被引量：1
- 2014年
- 背景 鸵鸟去细胞角膜基质具有与人角膜基质相似的天然结构,有望成为直接应用或构建生物角膜理想的载体材料之一. 目的 用鸵鸟角膜制备去细胞基质载体,研究其免疫原性,为产业化开发早日用于临床提供实验基础.方法 收集新鲜鸵鸟和猪眼球各20个,采用低温冷冻联合酶消化及干燥剂脱水法制备鸵鸟及猪去细胞角膜基质载体,用Co^60照射法进行消毒.按随机数字表法将雄性BALB/c小鼠45只随机分为伪手术组、猪去细胞角膜基质组和鸵鸟去细胞角膜基质组,伪手术组小鼠仅制作囊袋,不植入异种角膜基质片,其余两组分别取干燥脱水法制备的猪、鸵鸟去细胞角膜基质载体（复水后每片湿质量为10 mg）异位植入BALB/c小鼠背部皮下,术后观察伤口愈合情况,并分别于术后7、14、28 d获取BALB/c小鼠外周血,进行免疫荧光标记及流式细胞仪分析,比较两种异种角膜基质对小鼠CD4^＋、CD8^＋、CD25^＋表型的动态影响.结果 猪、鸵鸟去细胞角膜基质载体小鼠植入处皮肤无红肿及渗出,伤口愈合良好.术后7、14和28 d,伪手术组、猪去细胞角膜基质组和鸵鸟去细胞角膜基质组外周血中CD4^＋细胞百分率的差异均无统计学意义（F=0.74,P=0.50;F=0.39,P=0.05;F=3.46,P=0.58）;外周血中CD8^＋细胞百分率的差异均无统计学意义（F=1.75,P=0.21;F=1.14,P=0.35;F=0.78,P=0.48）;外周血中CD25^＋细胞百分率差异亦均无统计学意义（F=0.52,P=0.61;F=3.53,P=0.62;F=2.42,P=0.13）.结论 鸵鸟去细胞角膜基质载体的免疫原性低,具有重要的开发价值.
- 刘先宁吴洁肖湘华潘士印银勇朱秀萍
- 关键词：鸵鸟异位移植C小鼠
