艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项(2008ZX10004-014)
- 作品数：10 被引量：56H指数：5
- 相关作者：李琦涵刘龙丁王丽春谭文杰李华更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院昆明医学院中国疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 干扰素对ICR乳鼠感染肠道病毒71型的保护作用被引量：10
- 2011年
- 目的探讨干扰素(Interferon,IFN)对ICR乳鼠感染肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)的保护作用。方法将FY23-EV71感染经重组人IFNα1b和IFNλ1预处理的Vero和KMB17细胞,微量滴定法检测病毒滴度;取ICR乳鼠分为PBS对照组、EV71对照组和IFN保护组,临床观察2周,取乳鼠组织,观察病理学变化,并检测病毒含量。结果两种IFN对KMB17细胞和Vero细胞感染EV71均有保护作用,且IFNα1b的保护作用优于IFNλ1;IFN保护组乳鼠较EV71对照组乳鼠在临床表现、体重、病理变化和组织病毒含量等方面均表现出对EV71感染的保护作用。结论 IFN能抑制EV71的增殖,并对病毒致病性和组织嗜性有一定的影响。
- 范胜涛王丽春赵红玲李薇李龙刘龙丁李琦涵
- 关键词：肠道病毒71型组织嗜性免疫保护
- 22例SARS感染愈后连续5年特异性IgG抗体随访分析
- 2010年
- 为分析SARS冠状病毒(SARS-CoV)IgG抗体在SARS感染康复者体内的持久性与变化,本研究自2004年3月开始,每年采集北京地区SARS感染康复者血清标本,采用商品化的冠状病毒(变异株)IgG抗体间接ELISA检测试剂盒,对其中22名SARS康复者中的SARS-CoVIgG抗体进行连续五年随访检测与分析。结果表明:在愈后第1年,所有血清SARS-IgG抗体皆为阳性。第2、3年处于平台期,滴度仍维持较高的水平。第4年抗体滴度有明显下降趋势。第5年IgG抗体基本转阴。研究发现SARS-CoVIgG抗体可维持3年以上,第4年之后明显下降。本研究为SARS感染诊断与防治、免疫应答及疫苗效力评价等提供了重要依据。
- 王慧娟张陵林谭文杰周为民严伟铮彭堃阮力
- 关键词：SARS-COVIGG抗体酶联免疫吸附实验
- 人冠状病毒NL63棘突蛋白的研究进展被引量：2
- 2010年
- 20世纪60年代以前,人们普遍认为只有2种人冠状病毒(HCoV)HCoV-229E和HCoV-OC43感染人类,2002～2003年出现的由SARS-CoV引发的严重急性呼吸综合征(SARS)的流行使人冠状病毒又一次成为研究的焦点,2004年又发现了一种新的人冠状病毒HCoV-NL63。在此,主要就HCoV-NL63,特别是其主要结构蛋白——棘突蛋白的研究进展做一简要综述。
- 赵国霞高基民谭文杰
- 关键词：人冠状病毒HCOV-NL63
- 人冠状病毒NL63受体结合区蛋白的原核表达纯化与鉴定被引量：2
- 2013年
- 人冠状病毒NL63受体结合区蛋白是其免疫学诊断和疫苗研究的主要靶点,在受体吸附、病毒进入细胞及膜融合中起关键作用。本研究在E.coli系统中进行人冠状病毒NL63受体结合区(RBD)大、小蛋白的表达纯化,并对其进行免疫学鉴定。首先密码子优化设计合成了HCoV-NL63的RBD大片段(RL:232-684aa)与小片段(RS:476-616aa)的编码基因,并将其克隆进硫氧还蛋白表达载体pM48,构建了人冠状病毒NL63的受体结合区蛋白(RBD)大(RL)、小(RS)片段与硫氧还蛋白的融合表达质粒;转化E.coli BL21pLys S,利用IPTG进行诱导表达,用镍亲和层析对蛋白进行纯化,并以表达HCoV-NL63RL与RS蛋白的重组痘苗病毒免疫小鼠血清对重组蛋白进行免疫印迹鉴定。结果表明在37℃,0.8mM IPTG诱导4h时,蛋白表达量达到最高,融合蛋白主要以包涵体形式表达,纯化后纯度可达95%以上。Western blot显示,两个融合蛋白均与痘苗病毒(天坛株)表达的HCoV-NL63RL与RS蛋白免疫的小鼠血清发生特异性反应。本研究首次在国内用原核系统表达纯化并鉴定了人冠状病毒NL63受体结合区大小蛋白(RL和RS),为人冠状病毒NL63感染的免疫学检测与疫苗研究提供了基础。
- 常慧伊瑶赵敏周为民赵国霞王慧娟毕胜利高基民刘冰谭文杰
- 关键词：重组蛋白大肠杆菌
- 2009年中国云南昆明地区柯萨奇病毒A组16型遗传特性分析被引量：7
- 2012年
- 目的对2009年中国云南昆明地区柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CoxA16)毒株的部分VP1区进行分析,了解CoxA16的遗传特性。方法设计针对肠道病毒A群的通用引物,采用半巢式RT-PCR扩增目的片段,对PCR产物测序;使用Omiga和Mega4.1等生物学软件进行核苷酸、氨基酸序列比对及病毒的系统进化分析。结果200份2009年昆明市儿童医院临床诊断为手足口病或并发脑炎疑似肠道病毒感染的患者粪便标本中有52份为CoxA16感染,其中15份来自脑炎患者。52株CoxA16病毒部分VP1区核苷酸和氨基酸序列同源性均较高,核苷酸序列同源性为98.5%～100%,氨基酸序列同源性为98.8%～100%;与shzh00-2、shzh99-48和107/Toyama/1990相比较,核苷酸序列同源性为92.3%～93.8%,氨基酸序列同源性为95.3%～96.8%;与国际标准株G10相比较,核苷酸序列同源性为78.5%～80.3%,氨基酸序列同源性为93.2%～94.5%;与其他13个参考株的核苷酸序列同源性为96.6%～99.5%,氨基酸序列同源性为98.3%～100%。基因系统进化分析显示,52株CoxA16均属于B基因型的一个分支。结论 2009年中国云南昆明地区CoxA16株属于B2亚型。
- 马绍辉陈俊英李华杨卉娟施海晶潘玥孙强明李琦涵
- 关键词：柯萨奇病毒A组16型VP1
- EV71抗原BA-ELISA检测方法的建立及应用被引量：20
- 2009年
- 目的建立EV71抗原生物素-亲和素酶联免疫(BA-ELISA)检测方法,并进行验证及初步应用。方法以抗EV71抗体为包被抗体,利用生物素-亲和素系统建立双抗体夹心ELISA法,并对其灵敏度、特异性、准确性及精密性进行验证。采用该方法检测组织培养及临床样品中EV71抗原的含量。结果所建立的BA-ELISA法在EV71蛋白含量625～156.25ng/ml之间线性关系最佳,R2达0.9976,灵敏度为78.125～156.25ng;与包括CoxA16在内的42种肠道病毒及相关病毒均无交叉反应;检测10份EV71阳性样品和10份阴性样品,结果符合率均为100%;检测EV71原液和高、中浓度样品的变异系数分别为3.09%、6.69%和6.43%;可检出约103～104CCID50的活病毒及手足口病患者的大便悬液和部分咽拭子悬液中的病毒。结论用生物素标记EV71抗体与亲和素系统建立的双抗体夹心ELISA法具有较高的特异性、灵敏度、准确性和精密性,为临床检验及抗原分析提供了参考。
- 龙润乡谢忠平杨蓉李华白惠株董承红刘龙丁李琦涵
- 关键词：手足口病生物素-亲和素系统
- 干扰素及IL-6、IL-1β在肠道病毒71型感染过程中的作用被引量：5
- 2012年
- 目的探讨干扰素(Interferon,IFN)及白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、IL-1β在肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染过程中的作用。方法采用EV71-FY23,在IFNα1b、IFNλ1和IFNγ分别存在的条件下感染Vero细胞及KMB17细胞,检测IFN对细胞的保护作用;建立EV71感染乳鼠模型,检测IFNα1b、IFNλ1、IFNγ、IL-6及IL-1β的抗病毒作用。结果IFNα1b和IFNλ1对EV71感染的细胞具有明显的保护作用,而IFNγ的保护作用不明显;IFNα1b对感染EV71的乳鼠具有较好的保护效果,其在病毒感染之前的预处理方式产生的保护效果较为明显;IL-1β对感染EV71的乳鼠亦有不同程度的保护作用,而IL-6预处理方式不但无保护作用,反而加速了乳鼠的死亡。结论 IFN和IL-1β对EV71感染具有保护作用,而IL-6无此作用。
- 范胜涛王丽春赵恒刘龙丁李琦涵
- 关键词：干扰素白细胞介素-6白细胞介素-1Β肠道病毒A型
- 不同温度培养的3株EV71毒株的增殖动力学分析被引量：4
- 2010年
- 目的对不同温度培养的3株EV71中国流行株的增殖动力学进行分析。方法分别在32、35、37和40℃条件下对FY23、K9和S1株EV71进行传代培养、2～24h培养及噬斑培养,采用微量滴定法测定病毒的感染性滴度;传代培养的子代病毒通过脑内注射方式感染新生ICR乳鼠,观察病毒的致病性。结果传代培养时,在32和40℃培养的3株病毒致细胞完全病变时间较35和37℃延长,且子代病毒滴度下降,35℃培养的病毒滴度较37℃升高;3株病毒培养24h后,37℃培养的病毒增殖效率最高,35℃次之,40℃最低;4个温度培养的病毒噬斑形态无明显变化;新生乳鼠脑内注射致死率差异无统计学意义(P>0.05)。结论培养温度的变化可影响EV71的致细胞病变速度及子代病毒的增殖,但对病毒噬斑的形态及新生乳鼠的致病能力无明显影响。
- 刘云霞董承红王丽春吴练秋管莹刘龙丁李琦涵
- 关键词：肠道病毒71型增殖动力学
- Vero细胞制备流感病毒疫苗被引量：5
- 2009年
- 目的利用转瓶培养Vero细胞制备流感病毒疫苗。方法将流感病毒接种于Vero细胞上培养,优化培养条件,收获的病毒液经灭活、超滤浓缩和层析纯化,检测病毒的血凝素(HA)滴度及血凝素含量。按此工艺制备流感疫苗,根据血凝素含量稀释为不同浓度,免疫小鼠,观察不良反应,并通过血凝抑制(HI)试验检测抗体水平。结果Vero细胞培养流感病毒的最佳条件为:维持液中胰酶浓度12.5～15μg/ml,pH值7.4～7.6,Vero细胞经多次洗换后再接种病毒,病毒在细胞上培养72～96h收毒。所有免疫小鼠均未出现不良反应,小鼠抗体阳转率均为100%,HI抗体滴度均不低于同剂量的阳性对照组。结论Vero细胞可用于流感病毒的培养和制备疫苗。
- 殷建文焦龙甄祖刚刘苗苗赵新吴栩涛王立刚万艾玲盖小群周荔葆
- 关键词：流感疫苗VERO细胞免疫原性
- 麻疹减毒活疫苗S191感染性克隆的构建及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的：构建稳定的麻疹减毒活疫苗 S191感染性克隆。方法采用全基因合成方法获得麻疹减毒活疫苗 S191 cDNA 全长及辅助蛋白 N、P、L 基因片段，分别将该4个基因构建入转录与表达载体 pVAX1后，共转染293T 细胞，通过与 Vero 细胞共培养拯救出麻疹病毒，对拯救获得的病毒用间接免疫荧光法、传代实验及序列测定进行鉴定分析。结果酶切及测序表明除遗传标签（突变碱基2101 C-A）外其基因序列正确，用免疫荧光技术证实其能与麻疹病毒核衣壳蛋白和磷蛋白单克隆抗体产生特异性反应，所拯救病毒感染 Vero 细胞后可致细胞病变效应，传代实验表明病毒可以稳定感染 Vero 细胞。结论成功构建了稳定的麻疹减毒活疫苗 S191感染性克隆，初步建立了用于麻疹病毒研究的反向遗传学方法，为新型疫苗的研发提供参考资料。
- 王健陈祥鹏孙丽媛李莉莉郑凡刘君郑秀玉
- 关键词：麻疹病毒反向遗传学RNA聚合酶
