广东省自然科学基金(06301143)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
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- 相关机构：南方医科大学深圳市疾病预防控制中心更多>>
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- 应用荧光DDRT-PCR初探低剂量的ECPs诱导细胞适应性反应的机理
- 2007年
- [目的]用荧光DDRT-PCR技术寻找低剂量环境化学污染物(ECPs)过氧化氢(H_2O_2)、甲醛(FA),三氯乙烯(TCE)诱导细胞适应性反应差异表达的基因,为进一步研究低剂量的环境化学污染物(ECPs)诱导机体的生物学效应及其机理提供科学依据。[方法]依据H_2O_2、FA、TCE对细胞毒性的剂量反应关系,建立适应性反应的模型。然后用荧光DDRT-PCR寻找对照组、低剂量组、高剂量组,适应性反应组差异表达的基因,并鉴定和验证部分差异表达的基因。[结果]按照对照组、低剂量组、高剂量组、适应性反应组处理细胞后,DDRT-PCR结果显示各处理组与对照组比较:H_2O_2有60个差异条带、FA有61个,TCE有52个。选择差异比较明显的条带进行2次PCR,然后通过进一步克隆、测序、同源性比较发现一些已知基因如BCL-2、EIF3S5、NDUFS4、RPS10等。[结论]低剂量环境化学污染物诱导机体的适应性反应可能有维持细胞稳态、抗氧化系统、DNA损伤修复级激活细胞信号分子等过程的参与。
- 卫秦芝姚朗王光海庄志雄
- 核转录因子κB的结构功能及在DNA损伤修复中作用的研究进展被引量：5
- 2007年
- 卫秦芝庄志雄姚朗
- 关键词：核转录因子ΚBDNA损伤修复
- 应用FDDRT-PCR技术研究低剂量过氧化氢诱导细胞适应性反应的基因差异表达
- 2007年
- 目的用荧光差异显示RT-PCR(FDDRT-PCR)技术寻找低剂量的过氧化氢(H2O2)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)适应性反应差异表达的基因,为进一步研究低剂量的环境化学污染物(ECPs)诱导机体的生物学效应及其机制提供科学依据。方法依据H2O2对MRC-5毒性的剂量反应关系,选择低剂量和高剂量,并建立低剂量H2O2诱导MRC-5的适应性反应模型。用乳酸脱氢酶漏出率(LDH%)、Annexin V/PI检测细胞凋亡验证适应性反应模型。然后用FDDRT-PCR寻找不同方式刺激下差异表达的基因,鉴定和验证部分差异表达的基因。结果MTT获得适应性反应的模型,乳酸脱氢酶漏出率和Annexin V/PI检测细胞凋亡的结果都验证了适应性反应的模型。对不同方式处理的细胞RNA进行FDDRT-PCR,找到60个差异条带。对其中的5个差异条带进行鉴定,发现其中4个已知基因(bcl-2、EIF3S5、NDUFS4、RPS10),1个新基因。荧光定量PCR技术证实5个基因在不同处理组中的表达与荧光差异显示PCR图谱上一致。结论低剂量H2O2可以诱导MRC-5的适应性反应过程,其中bcl-2、EIF3S5、NDUFS4、RPS10在该过程中起着一定的作用。
- 卫秦芝庄志雄
- 关键词：过氧化氢基因差异表达
- 低剂量过氧化氢、甲醛、三氯乙烯诱导细胞适应性反应模型的建立被引量：2
- 2007年
- 目的探讨低剂量的环境化学污染物过氧化氢(H2O2)、甲醛(FA)、三氯乙烯(TCE)能否诱导真核细胞的适应性反应。方法用溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率得到H2O2、FA、TCE对细胞毒性的剂量反应关系。按以下方式对细胞进行染毒:空白对照、低剂量、高剂量、适应性反应组(先用低剂量预刺激一定的时间后,再用高剂量进行攻击),观察细胞生长的变化,建立低剂量的H2O2、FA、TCE诱导细胞适应性反应的模型。结果0.88μmol/L的H2O2预刺激人胚肺成纤维细胞(MRC-5)24 h后,再用1 100μmol/L的H2O2刺激1 h,可以观察到适应性反应;以0.01 mmol/L甲醛预处理MRC-5细胞12 h后,再给予1 mmol/L的甲醛攻击4 h,可以观察到适应性反应;1μmol/L TCE刺激人正常肝细胞L-02 12 h后,再用30μmol/L TCE攻击24h,可以观察到适应性反应。结论低剂量的环境化学污染物H2O2、FA、TCE均可以诱导真核细胞的适应性反应。
- 卫秦芝庄志雄黄海燕杨晓华姚朗王光海
