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“九五”国家科技攻关计划(96C010403)

作品数:6 被引量:52H指数:4
相关作者:陈焕春娄高明肖少波方六荣何启盖更多>>
相关机构:华中农业大学广东省兽医生物技术重点实验室四川农业大学更多>>
发文基金:“九五”国家科技攻关计划国家自然科学基金广东省科技攻关计划更多>>
相关领域:农业科学生物学更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 4篇农业科学
  • 2篇生物学

主题

  • 6篇犬病
  • 6篇伪狂犬病
  • 6篇狂犬
  • 5篇病毒
  • 4篇伪狂犬病病毒
  • 4篇狂犬病病毒
  • 2篇GE基因
  • 1篇动物
  • 1篇动物病
  • 1篇动物病毒
  • 1篇信号肽
  • 1篇疫苗
  • 1篇疫苗株
  • 1篇增殖规律
  • 1篇生物学特性
  • 1篇生物学特性研...
  • 1篇体外
  • 1篇体外表达
  • 1篇强毒
  • 1篇强毒感染

机构

  • 3篇华中农业大学
  • 2篇广东省兽医生...
  • 1篇四川农业大学
  • 1篇中山大学
  • 1篇国家海洋局

作者

  • 3篇陈焕春
  • 2篇何启盖
  • 2篇娄高明
  • 2篇方六荣
  • 2篇肖少波
  • 1篇徐引弟
  • 1篇杜伟贤
  • 1篇徐志文
  • 1篇王印
  • 1篇汪超
  • 1篇郭万柱
  • 1篇吴美洲
  • 1篇王小玉
  • 1篇覃雅丽
  • 1篇洪文洲
  • 1篇陈陆
  • 1篇敖敬群
  • 1篇王革非
  • 1篇龙綮新
  • 1篇王珣章

传媒

  • 2篇微生物学报
  • 2篇畜牧兽医学报
  • 1篇生物化学与生...
  • 1篇中国生物化学...

年份

  • 1篇2005
  • 1篇2003
  • 3篇2002
  • 1篇2001
6 条 记 录,以下是 1-6
排序方式:
伪狂犬病病毒Ea株gE基因主要抗原区在巴斯德毕赤酵母中的表达被引量:8
2002年
伪狂犬病病毒gE蛋白是一种重要的诊断抗原 ,可用于伪狂犬病根除计划中的鉴别诊断。为了获得大量的抗原 ,将编码gE主要抗原区域的基因片段插入毕赤酵母表达载体中 ,得到的重组表达载体转化GS1 1 5酵母 ,通过G41 8抗性筛选得到一株多拷贝的重组酵母 ,经甲醇诱导表达了截短的gE蛋白 ,并分泌到胞外。Westernblotting分析显示表达的蛋白大小为3 3kD。ELISA结果表明表达蛋白具有良好的抗原性 ,重组酵母的诱导培养上清不需纯化可直接作为抗原检测gE的抗体 。
覃雅丽陈焕春唐勇何启盖徐引弟
关键词:伪狂犬病病毒GE基因巴斯德毕赤酵母
伪狂犬病病毒闽A株gE基因去信号肽片段在Pichia pastoris中的表达被引量:1
2003年
伪狂犬病病毒囊膜糖蛋白E是一种在伪狂犬病根除计划中具有重要作用的糖蛋白 .将伪狂犬病病毒闽A株 gE基因去信号肽片段克隆到巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPICZαA中 ,获得的重组表达载体pPICZαA FL电击转化野生型酵母菌SMD116 8后 ,得到多株酵母工程菌SMD116 8/ pPICZαA FL .经高浓度ZeocinTM筛选、表型鉴定、工程菌的诱导表达及表达产物的鉴定 ,最后得到高效表达 gE基因去信号肽片段的酵母工程菌SMD116 8/ pPICZαA FL 7.工程菌 72h培养上清的SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳与蛋白质印迹结果显示 ,gE基因去信号肽片段表达产物大小约为 80ku ,比预期的 6 3 8ku大 .凝胶薄层扫描结合Bradford蛋白质总含量测定结果表明 ,表达产物占工程菌培养上清总蛋白的 13 4 9% ,表达量可达 11 7mg/L .间接ELISA结果表明重组表达产物具有良好的抗原性 。
敖敬群王瑾雯陈新华王珣章龙綮新娄高明
关键词:伪狂犬病病毒GE基因信号肽
伪狂犬病毒gI基因的克隆表达及其对病毒增殖的影响被引量:10
2002年
从伪狂犬病毒 (PRV)国内地方分离Ea株基因组DNA片段中克隆了完整的gI基因 ,序列分析结果表明 ,gI基因编码区全长 1 1 0 1bp ,可编码 3 6 6个氨基酸残基 ,二级结构预测具有典型I型膜蛋白特征。与GenBank中收录的国外Rice株的同源比较发现 ,Ea株gI在核苷酸和氨基酸水平上均存在多处突变 ,尤其是潜在胞浆区中连续两个碱基的缺失导致移码突变 ,致使gI基因的读码框架后移 ,从而导致Ea株gI较rice株长 1 6个氨基酸残基。将gI基因克隆到真核表达载体pcDNA3 1 +中的人巨细胞病毒早期启动子下游 ,构建的真核表达质粒转染PK 1 5细胞 ,间接免疫荧光检测证实gI获得正确表达。进一步测定天然缺失gI的PRV弱毒Bartha株在表达gI细胞系和空白载体转染的对照细胞系中的蚀斑形成单位 (pfu)和组织细胞培养半数感染量 (TCID50 ) ,结果显示 :Bartha株在表达gI细胞系中的pfu和TCID50 分别为对照细胞系的 1 6 4 %和 2 0 0 %。
肖少波方六荣王革非陈焕春洪文洲
关键词:伪狂犬病毒GI基因病毒增殖体外表达动物病毒
伪狂犬病病毒鄂A株gG^-/LacZ^+突变株在不同细胞中增殖规律的研究被引量:3
2002年
In order to determine the most optimal host cell line,inoculation dose and the time of harvest,we studied the growth pattern and cytopathic effect (CPE) of the mutants of Pseudorabies virus (PRV) Ea strain,gG -/LacZ +,in different cell lines.A clone virus of gG -/LacZ +,the titer of which could be up to 10 -8.0 /0.1 ml,after purification four times by plaques,was obtained.The clone virus was inoculated into different cell lines,BHK-21,IBRS-2,MDBK and PK-15,respectively.Infected BHK-21 could be induced CPE at 12 hours p.i..However,The CPE of MDBK appeared after 24 hours p.i..In terms of the growth pattern,the titer of IBRS-2 could reach the peak level at 40 hours p.i. and the peak titer was up to 10 -8.0 /0.1 ml,which was maintained until 64 hours p.i..In contrast,the peak of BHK-21 was only 10 -6.5 /0.1 ml during the 96 hours p.i.. We also studied the titer of IBRS-2 when it was inoculated with different dose virus from 0.001 PFU/cell to 100PFU/cell.It was discovered that the titer could reached over 10 -7.5 /0.1 ml when inoculated with 0.1PFU/cell,0.01PFU/cell after 30,48 hours p.i.,respectively.These data indicate that IBRS-2 is the most optimal cell and that the titer could reach the peak when inoculated with 0.01PFU/cell and harvested at 40-50 hours p.i..
方六荣陈焕春肖少波何启盖吴美洲汪超
关键词:伪狂犬病病毒增殖规律
PCR检测伪狂犬病病毒DNA被引量:22
2001年
根据伪狂犬病病毒 (PRV)gB基因的序列 ,设计并合成了一对引物 ,以闽A株细胞培养毒为模板 ,筛选最佳反应条件 ,建立了检测PRV的PCR方法 应用该方法对Fb、Bartha、BJ、GD、V2F4、S、S3、SR、Buk、Shope、Norden、MinkⅢ、HB、F8、F9、F12等毒株的细胞培养液进行基因扩增 ,均获得了分子量为 2 81bp的特异性目的DNA片段 ,而对Vero细胞与FMDV、SVDV、HCV、PRRSV、JEV、PPV等病毒进行检测 ,结果均为阴性 ,没有出现交叉反应 对PRV毒株扩增的产物测序 ,结果序列与文献报道一致 ,证明PCR扩增产物和方法的特异性 对 1994~ 2 0 0 0年期间送检的临床样品和保存的PRV毒种 ,用病毒分离、双抗体夹心ELISA和PCR等 3种方法进行检测 ,结果前 2种方法检测为阳性的 ,PCR检测均为阳性 ;PCR检测为阴性 ,前 2种方法检测也为阴性 ;可是 ,前 2种方法检测为阴性的 ,PCR却检测出部分阳性 ;经x2 检验 ,证明PCR检出率明显高于前 2种方法的检出率 对PRV闽A株细胞毒提取物DNA进行检测 ,其最低检出量为 15 8pg 对 1999~ 2 0 0 0年期间广东、福建、海南等省的 31个大中型猪场送检的 191份病料进行检测 .结果病料阳性率为 2 6 2 % ( 50 191) ,猪场阳性率为 71% ( 2 2 31) 实验结果表明 ,所建立的PCR技术可用于伪狂犬病的快速诊断?
娄高明杜伟贤廖筱萍谢明权
关键词:伪狂犬病病毒DNA检测PCR
伪狂犬病基因缺失疫苗株(SA215)生物学特性研究被引量:9
2005年
测定了伪狂犬病gE-/gI-/ TK-/ LacZ+基因缺失疫苗株(SA215)的致细胞病变效应、安全性、免疫原性和接种动物抗体消长规律等生物学特性。试验结果显示,该疫苗株能在 Vero细胞上适应生长,并形成典型的蚀斑。其对1日龄仔猪、妊娠母猪、牛、羊以及家兔安全,无不良接种反应,接种动物不向外散毒。SA215 疫苗接种猪能抵御高剂量(107 PFU) Fa株强毒感染,攻毒后试验猪的发热期、增重受阻天数、散毒滴度略低于 Bartha株疫苗接种猪,低于对照组猪。SA215接种猪能维持长时间的高水平中和抗体滴度。试验结果表明,SA215 株是一株安全、免疫原性好的疫苗株。
陈陆郭万柱徐志文王小玉王印
关键词:基因缺失疫苗伪狂犬病生物学特性研究强毒感染疫苗株
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