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乙型肝炎病毒多表位治疗性抗原基因的合成、表达及抗原性研究被引量：10: 2003年; 目的研究乙型肝炎病毒多表位治疗性疫苗基因的合成、表达及其产物的抗原性。方法设计、并合成乙型肝炎病毒多表位抗原基因BPT,克隆入融合表达载体pWR450-1,构建重组质粒PWR/BPT。在大肠杆菌中表达乙型肝炎多表位抗原蛋白并纯化该蛋白,并用Western-blotting方法初步检测该抗原蛋白的抗原性。结果成功构建了融合表达载体PWR/BPT,在大肠杆菌中表达出乙型肝炎多表位抗原蛋白,Western-blotting 检测显示该蛋白具有良好抗原性。结论HBV多表位治疗性抗原基因的设计是成功的,其在大肠杆菌中表达的重组融合蛋白具有良好的抗原性,可能是较理想的HBV治疗性疫苗候选物。; 骆利敏李明夏虎黄建生陈百虹王萍; 关键词：乙型肝炎多表位治疗性疫苗

乙肝多表位抗原基因非融合表达载体的构建和表达: 2008年; 目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)多表位基因的在原核载体中的克隆、游离表达及其产物的抗原性。方法:设计、并合成HBV多表位抗原基因BPT,克隆入原核表达载体pBAD/gIIIA,进而转化Top10大肠杆菌,阿拉伯糖诱导表达出HBV多表位抗原蛋白(B-BPT),并用Western blot方法初步检测该抗原蛋白的抗原性。结果:成功构建了原核表达载体pBAD/BPT,在大肠杆菌中表达出HBV多表位抗原蛋白B-BPT,Western blot检测显示该蛋白具有良好抗原性。结论:HBV多表位抗原基因的设计是成功的,其在大肠杆菌中表达的非融合蛋白具有良好的抗原性,可能是较理想的HBV治疗性疫苗候选物。; 骆利敏夏虎李灼亮余宙耀刘树人李明; 关键词：乙型肝炎病毒多表位治疗性疫苗

乙型肝炎病毒治疗性多表位基因疫苗在小鼠中的免疫应答研究: 2011年; 目的:分析乙型肝炎病毒(HBV)重组多表位抗原基因在大肠杆菌中非融合表达的蛋白B-BPT的免疫原性,以期为HBV预防/治疗性疫苗的研制奠定实验基础。方法:构建重组质粒pBAD/BPT,并在大肠杆菌中诱导表达。以纯化的蛋白B-BPT免疫BALB/c小鼠,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测该融合蛋白诱导的小鼠细胞毒T淋巴细胞(CTL)应答。用流式细胞术(FCM)检测小鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的比例,用MTT比色法检测淋巴细胞的增殖效应。结果:B-BPT蛋白免疫BALB/c小鼠后,可诱导特异性CTL应答(P<0.05,与空白对照组比较);B-BPT蛋白免疫后,可显著刺激小鼠脾淋巴细胞增值(P<0.05,与空白对照组比较)。结论:该非融合表达的蛋白B-BPT可有效地诱导小鼠特异性CTL免疫应答,为进一步研制乙肝预防治疗性疫苗奠定了基础。; 骆利敏夏虎刘树人李明; 关键词：乙型肝炎病毒治疗性疫苗多表位抗原

乙型肝炎病毒多表位抗原基因的设计、合成及表达被引量：15: 2004年; 目的　设计合成乙型肝炎病毒多表位抗原基因并在大肠杆菌中表达 ,以期获得兼具预防和治疗作用的新型乙肝疫苗。方法　设计并合成一条乙型肝炎病毒 (HBV)多表位抗原基因 (P T) ,该基因包括HBV前S2区的核苷酸序列 ,和分别来自乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎核心抗原、乙型肝炎DNA聚合酶的其它 4个连续的HLA限制性抗原表位的核苷酸序列。基因合成后克隆入载体质粒pWR4 5 0 1,转化大肠杆菌BL2 1,IPTG诱导P T基因与载体质粒的 β 半乳糖酐酶基因融合表达。结果　成功合成并拼接出乙型肝炎多表位抗原基因P T ,阳性重组子PWR HBV P T构建成功 ,并在大肠杆菌中融合表达出相对分子质量 (Mr)约 75× 10 3的碱性蛋白质。结论　初步设计成功HBV多表位抗原基因 ,在大肠杆菌中可表达出具有良好抗原性的重组融合蛋白 ,可能是较理想的HBV预防、治疗性疫苗候选物。; 骆利敏李明夏虎黄建生王萍董文其; 关键词：乙型肝炎病毒基因表达 HBV 疫苗

乙型肝炎病毒多表位抗原基因真核表达载体的构建及其在哺乳动物细胞中的表达被引量：2: 2004年; 将自行设计、合成的乙型肝炎病毒多表位抗原基因BPT ,克隆入真核表达载体pCDNA3 1,构建重组质粒pCDNA3 1/BPT。后者经脂质体法转染小鼠BALB/c 3T3细胞 ,G4 18加压筛选出阳性转染细胞 ,并用间接免疫荧光法鉴定其在小鼠BALB/c 3T3细胞的表达。该重组质粒经胫骨前肌注射小鼠 ,10 0 μg/次每只小鼠 ,间隔 2周加强一次 ,共 3次。免疫诱发了特异性抗体和淋巴细胞增殖反应 ,并用PCR法在小鼠的心脏、肝脏及肺组织中检测到pCDNA3 1/BPT 。; 骆利敏李明夏虎黄建生吴英松; 关键词：乙型肝炎 DNA疫苗转染免疫应答

乙型肝炎病毒多表位抗原DNA疫苗的免疫原性被引量：6: 2004年; 目的 :探讨HBV复合多表位DNA疫苗诱导体液及细胞免疫的可行性。方法 :将HBV多表位抗原基因BPT克隆到真核表达载体pcDNA3.1中 ,构建重组真核表达载体pcDNA3.1/BPT。将其通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,用间接免疫ELISA法、CTL杀伤功能检测和淋巴细胞增殖试验 ,检测特异性体液免疫和细胞免疫的水平 ,并观察其对免疫小鼠的毒副作用。结果 :用重组质粒pcDNA3.1/BPT免疫BALB/c小鼠后 ,在效靶比为 10 0∶1时 ,可诱导显著地特异性CTL应答 (P <0 .0 5 )。ELISA检测免疫小鼠血清特异性IgG的水平明显升高 (P <0 .0 5 )。在BPT基因原核表达蛋白的刺激下 ,免疫小鼠脾淋巴细胞增殖显著 (P <0 .0 5 )。RT PCR分析表明 ,IL 12mRNA的水平亦明显升高。结论 :HBV多表位基因疫苗可诱发特异性免疫应答 ,为预防。; 骆利敏李明夏虎陈百虹王萍郝文波; 关键词：乙型肝炎病毒多表位抗原基因免疫免疫应答

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广东省自然科学基金(990375)