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北京市自然科学基金(5030001)

作品数：23 被引量：194H指数：9
相关作者：李宁戴蕴平王莉莉李燕张运海更多>>
相关机构：中国农业大学中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京济普霖生物技术有限公司更多>>
发文基金：北京市自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
相关领域：农业科学生物学一般工业技术医药卫生更多>>

文献类型

  • 19篇中文期刊文章

领域

  • 11篇农业科学
  • 8篇生物学
  • 1篇医药卫生
  • 1篇一般工业技术
  • 1篇自然科学总论

主题

  • 10篇体细胞
  • 10篇核移植
  • 9篇细胞
  • 6篇卵母细胞
  • 6篇基因
  • 5篇体细胞核
  • 5篇体细胞核移植
  • 5篇转基因
  • 5篇细胞核移植
  • 5篇母细胞
  • 4篇体细胞克隆
  • 4篇细胞克隆
  • 4篇克隆胚
  • 4篇克隆胚胎
  • 3篇蛋白
  • 3篇荧光
  • 3篇荧光蛋白
  • 3篇体外成熟
  • 3篇绿色荧光
  • 3篇绿色荧光蛋白

机构

  • 16篇中国农业大学
  • 6篇中国农业科学...
  • 4篇北京济普霖生...
  • 2篇河北科技大学
  • 2篇科技公司
  • 1篇河北农业大学

作者

  • 16篇李宁
  • 14篇戴蕴平
  • 6篇潘登科
  • 6篇王莉莉
  • 6篇张运海
  • 6篇李燕
  • 4篇李世杰
  • 4篇孙秀柱
  • 4篇龚国春
  • 4篇朱化彬
  • 3篇郑敏
  • 3篇杜卫华
  • 3篇李荣
  • 3篇孙国杰
  • 3篇卫恒习
  • 2篇连正兴
  • 2篇刘颖
  • 2篇樊宝良
  • 2篇张坤
  • 2篇吴常信

传媒

  • 4篇科学通报
  • 3篇中国科学（C...
  • 3篇自然科学进展
  • 3篇Scienc...
  • 2篇中国农业科学
  • 2篇广西农业生物...
  • 1篇畜牧兽医学报
  • 1篇中国生物工程...

年份

  • 1篇2009
  • 3篇2007
  • 7篇2006
  • 3篇2005
  • 2篇2004
  • 3篇2003
共 23 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
供体细胞对猪体细胞克隆胚胎早期发育的影响被引量：11
2006年
以中国农业大学实验用小型猪香猪胎儿成纤维细胞、成年耳成纤维细胞和颗粒细胞3种细胞系为供体细胞进行核移植。比较了血清饥饿法和接触抑制法处理胎儿成纤维细胞诱导进入G0/G1期的效率,发现二者差异不显著(P>0.05),血清饥饿2d和4d差异不明显,同样接触抑制2d和4d差异也不显著(P>0.05)。系统研究了影响克隆胚胎发育的供体因素:血清饥饿与否、细胞形态、细胞类型及个体差异等,结果表明:血清饥饿处理对克隆胚的早期发育没有明显的促进作用;圆形光滑细胞有利于细胞融合,对早期发育无显著影响(P>0.05);不同个体、不同类型的供体细胞对克隆胚囊胚发育率有一定的影响。
潘登科张运海孙秀柱李燕吴常信李宁
关键词：胎儿成纤维细胞血清饥饿细胞类型克隆胚胎
猪体外受精胚胎、孤雌激活胚胎以及体细胞核移植胚胎的体外培养被引量：16
2007年
目的本研究系统比较了体外受精胚(IVFEs)、孤雌激活胚(PAEs)以及体细胞核移植胚(NTEs)的发育率和囊胚质量,同时还比较了PZM-3和NCSU-23两种培养基培养对PAEs以及NTEs发育的影响。方法利用体细胞核移植技术、体外受精技术和孤雌激活技术分别生产猪的NTEs、IVFEs和PAEs,开展体外培养。结果(1)IVFEs、PAEs和NTEs的卵裂率分别为72.0%,66.0%和63.5%,各组间没有显著差异(P>0.05);囊胚形成率分别为11.0%,22.6%和16.9%,也不存在明显不同(P>0.05);然而,在囊胚质量,即ICM细胞数/总细胞数的比例上,IVFEs和NTEs均优于PAEs(0.448%,0.356%vs 0.122%,P<0.05)。(2)对PAEs来讲,以PZM-3为基础培养基时囊胚率明显高于以NCSU-23为基础培养基时的处理组(35.4%vs.22.6%,P<0.05);而对NTEs而言,两种培养基在支持胚胎形成囊胚方面的效果相当(26.6%vs.21.1%,P>0.05),虽然PZM-3培养时胚胎卵裂率显著低于NCSU-23培养组(47.5%vs.63.5%,P<0.05)。结论(1)PAEs的囊胚质量在3种来源的胚胎中最差;(2)对PAEs理想的培养基,当用于NTEs培养时却不一定是最佳的选择。
张运海潘登科孙国杰孙秀柱李燕戴蕴平李宁
关键词：体外受精体细胞核移植孤雌激活体外培养
季节对猪体外成熟卵母细胞的发育能力的影响被引量：5
2007年
猪的卵母细胞对外界环境非常敏感,这造成猪的胚胎学相关研究是家畜繁殖学研究领域中最困难的方面之一.文章的研究目的是描述季节的变化对体外成熟卵母细胞发育能力的影响.研究中比较了不同季节每对卵巢获得A/B级卵的数量以及卵母细胞核成熟的比例(实验1),另外统计分析了不同季节孤雌(实验2)和核移植(实验3)胚胎发育能力的差异,最后在冬春两季分别进行了克隆胚胎的移植以观测其体内发育情况(实验4).结果显示实验1,春季(3月到5月)COCs/卵巢的比例最高(7.6±3.5),夏,秋,冬季的比例依次是(6.4±3.3),(6.7±2.9),(6.7±3.4),p<0.05.然而,没有发现卵母细胞的MⅡ比例有显著性差异((75.3±3.3)%,(73.5±2.3)%,(73.0±4.2)%,(76.5±6.7)%,依次是春,夏,秋,冬季的MⅡ比例,p<0.05).实验2,观察到夏季孤雌胚胎的囊胚率显著性降低(10.1±2.6)%,春,秋,冬季的孤雌胚胎囊胚率依次是(27.2±3.4)%,(22.4±3.5)%,(22.4±3.4)%,p<0.05.实验3,猪体细胞克隆胚胎在春季囊胚率获得提高((12.2±1.3)%,秋,冬季的克隆胚胎囊胚率依次是(10.2±1.2)%,(8.1±1.4)%,p<0.05).实验4,发现冬季胚胎移植无论是妊娠率还是出生率都明显低于春季.以上结果表明季节变化影响体外成熟卵母细胞的发育能力.
张坤张运海潘登科马育芳张建李旭阳卫恒习王少华李燕戴蕴平李宁
关键词：体细胞核移植孤雌激活卵母细胞
以不同类型的转基因细胞为核供体生产牛的转基因克隆胚胎被引量：35
2003年
利用所构建的含新霉素抗性(Neo^r)基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双标记选择载体,通过电穿孔的方法,分别转染了牛胎儿成纤维细胞、胎儿输卵管上皮细胞、胎儿卵巢上皮细胞、颗粒细胞,经过800μg/mL的 G418筛选14 d后,均获得了阳性细胞株.分别以未转基因牛颗粒细胞和4种细胞系的转基因细胞为核供体,进行了牛的体细胞核移植.结果表明:(i)转基因与未转基因牛颗粒细胞的重组胚的囊胚发育率(44.6％vs 42.8％)、移植妊娠率(19％ vs 25％)差异不显著(P>0.05);(ii)比较4种类型转基因细胞的重组胚的囊胚发育率,发现胎儿输卵管上皮细胞(49.1％)和颗粒细胞(44.6％)最高,牛胎儿成纤维细胞(37.2％)次之,胎儿卵巢上皮细胞的重组胚囊胚发育率(22.5％)最低,三者之间差异显著(P<0.05).以上结果显示,供体细胞的转基因与否对牛克隆胚胎的体外和体内早期发育影响不明显;通过体细胞核移植技术,牛胎儿输卵管上皮细胞和颗粒细胞可以有效地生产牛转基因囊胚,并且绿色荧光蛋白作为一种无毒性作用的筛选标记,可用于转基因胚胎的筛选.
龚国春戴蕴平樊宝良朱化彬王海平王莉莉方昌阁万荣刘颖李荣李宁
关键词：转基因细胞核供体核移植绿色荧光蛋白囊胚克隆胚胎
染色质修饰基因在新生死亡克隆牛组织中的表达分析被引量：3
2006年
体细胞克隆的效率非常低,只有低于4%的重组胚胎可以发育成个体,而且许多的克隆动物在出生后不久死亡并表现出组织器官的发育异常.为了探讨造成克隆动物出生死亡以及器官发育异常的可能分子机理,用荧光定量RT-PCR技术分析了4个对染色质进行修饰的基因(DNMT1,PCAF,MeCP2,EED)在分别来自两种供体细胞(成年成纤维细胞和胎儿成纤维细胞)的出生死亡克隆牛的6个组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和大脑)的表达.结果发现,DNMT1在两种供体细胞的克隆牛心脏(P<0.05)、肝脏(P<0.05)和大脑(P<0.01)中的表达显著高于正常对照牛;PCAF则在心脏(P<0.01)和肝脏(P<0.05)中的表达显著高于正常对照牛,而在成年成纤维供体细胞克隆牛的脾脏(P<0.05)中显著降低;MeCP2和EED基因在体细胞克隆牛中的表达与正常对照牛中无显著差异.由于DNMT1和PCAF基因在DNA的甲基化以及组蛋白的乙酰化中起重要作用,其正常表达为供体核后成修饰的精确重编程所必须,所以DNMT1和PCAF的异常表达可能是造成克隆动物出生死亡以及器官发育异常的原因之一.
李世杰连正兴李冬杰于舒洋张磊戴蕴平李荣费菁李宁
关键词：体细胞克隆基因表达
利用体细胞核移植技术生产转基因牛被引量：32
2003年
通过电穿孔的方法,将含有新霉素抗性(Neor)基因和增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的双标记选择载体导入胎牛输卵管上皮细胞,获得了转基因细胞株.以转基因细胞为核供体,进行了牛的体细胞核移植.重构胚胎424枚,其中208枚体外发育至囊胚,囊胚发育率为49.1％.选择第7天转基因囊胚17枚移入17头同期发情的受体牛子宫角内,共有5头受体牛妊娠,妊娠率为29.4％.经过正常的体内发育,有3头转基因克隆牛出生,产犊率为17.6％.PCR和Southern检测结果表明,3头转基因克隆牛的基因组中都整合有外源目标基因.并且,绿色荧光蛋白在转基因克隆牛的耳部皮肤组织以及从耳部皮肤组织分离出的成纤维细胞中均有表达.上述结果显示,通过体细胞核移植技术可以有效生产转基因牛;所构建的双标记选择载体可以有效筛选出转基因细胞和转基因克隆胚胎,应用于转基因克隆动物的生产,确保所培育的克隆动物均为转基因动物.
龚国春戴蕴平樊宝良朱化彬王莉莉王海平汤波刘颖李荣万荣黄银花李宁
关键词：体细胞核移植转基因绿色荧光蛋白
低氧培养早期胚胎克隆小型猪(Sus Scrofa)被引量：26
2006年
猪的体细胞克隆在人类的异种器官移植方面有着巨大的应用前景.以中国实验用小型猪胎儿成纤维细胞为核供体,从屠宰场采集初情期前母猪的卵巢,卵母细胞体外成熟后去核构建克隆胚胎,重构卵电融合并激活,在7%O2,5%CO2及88%N2的气相条件下NCSU-23或PZM-3培养基培养.给3头代孕母猪移植230枚克隆胚胎,其中一头妊娠足月并产下3头仔猪,生产克隆猪的效率达到1.3%;其中一头健康状况良好,存活至今,毛色及DNA微卫星遗传分析证实为克隆个体.以上结果表明,利用初情期前母猪的卵母细胞,克隆胚胎培养在低氧条件下,是生产克隆猪的一条有效途径.
潘登科张运海孙秀柱张健李旭阳李燕顾志良戴蕴平吴常信李宁
关键词：卵母细胞体外成熟核移植胚胎培养低氧
Analysis of cDNA sequence,protein structure and expression of parotid secretory protein in pig被引量：2
2003年
Parotid secretory protein (PSP) secreted abundantly in saliva, whose function is related with the anti-bacterial effect. The PSP cDNA has been isolated from pig parotid glands by 3′ and 5′ rapid amplification of cDNA end (RACE), based on the conserved signal peptide region among the known mammalian PSP. The result of homologous comparison shows that pig PSP and human PSP shares the high identity at the level of the primary, secondary and tertiary protein structure. A search for functionally significant protein motifs revealed a unique amino acid sequence pattern consisting of the residues Leu-X(6)-Leu-X(6)-Leu- X(7)-Leu-X(6)-Leu-X(6)-Leu near the amino-terminal portion of the protein, which is important to its function. RT-PCR, Dot blot and Northern blot analysis demonstrated that PSP was strongly expressed in parotid glands, but not in other tissues.
YIN Haifang, FAN Baoliang, ZHAO Zhihui, LIU Zhaoliang, FEI Jing & LI Ning State Key Laboratory for Agrobiotechnology, China Agricultural University, Beijing 100094, China Correspondence should be addressed to Li Ning (e-mail: ninglbau@ public3.bta.net.cn)
关键词：基因序列PSP唾腺
第一次减数分裂期小鼠卵母细胞的化学去核被引量：6
2004年
通过免疫荧光染色法确定了小鼠第一次减数分裂的进程 ,在此基础上分别用脱羧秋水仙碱和放线菌酮处理成熟培养的小鼠卵母细胞 ,抑制其纺锤体极间微管的延长和降低成熟促进因子的浓度 ,使其核物质随极体全部排出 .结果表明 :(1)卵母细胞从有腔卵泡中分离时处于生发泡期 ,可见核仁 ;成熟 2h内则全部发生生发泡破裂 ;培养 5h ,90 %到达第一次减数分裂的前中期 ;培养 8h ,则 33.3%处于中期 ;71.4 %的细胞在成熟 12h后发育为后期 ;第二次减数分裂的中期则于成熟培养 15h发生 .(2 )于成熟的不同时间取卵母细胞 卵丘细胞复合体进行去核处理后发现 ,体外成熟培养 5h(即卵母细胞处于第一次减数分裂前中期时进行处理 ) ,其去核率最高 ,达85 .6 % ;成熟 5h之前各组随成熟培养时间的延长而去核率升高 ,之后各组则降低 .(3)比较卵母细胞 卵丘细胞复合体与自然裸卵去核率 ,后者效率为 5 6 % ,显著低于前者 (p <0 .0 5 ) ,因此该方法在卵母细胞 卵丘细胞复合体的完全去核率与传统的物理去核方法相当 .
杜卫华李世杰李彦欣戴蕴平王莉莉王美丽郑敏李宁
关键词：卵丘细胞放线菌酮减数分裂有腔卵泡
转基因和再克隆对克隆胚胎细胞凋亡的影响被引量：3
2009年
细胞凋亡在着床前胚胎发育过程中发挥着重要作用,胚胎凋亡检测能为获得高质量的体细胞克隆胚胎提供有益信息,进而有助于提高克隆效率.用原位末端标记法对牛的转基因克隆和转基因再克隆囊胚进行了细胞凋亡检测,再克隆囊胚是利用转基因克隆牛的体细胞作为供体细胞进行体细胞核移植后获得的第二代克隆胚胎.结果表明转基因克隆胚胎的囊胚发育率显著低于非转基因克隆胚胎的囊胚发育率,而转基因克隆囊胚的细胞凋亡指数显著高于非转基因克隆胚胎的细胞凋亡指数.此外,转基因再克隆胚胎的囊胚发育率和胚胎细胞凋亡指数与非转基因克隆胚胎的囊胚发育率和胚胎细胞凋亡指数相比差异性不显著.结果表明早期的转基因克隆胚胎发育能力的减弱可能是由于供体细胞的基因转染和药物筛选过程导致的,而再克隆对其早期胚胎的发育能力没有负面影响.
孙国杰李荣戴蕴平王海平王莉莉刘颖丁方荣卫恒习李宁
关键词：凋亡
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