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家蚕Bmsps1基因的克隆和原核表达: 2007年; 从家蚕EST数据中检索到果蝇(D.melanogaster)硒磷酸合成酶基因(patuf)的氨基酸序列,用seq MAN延伸,电子克隆家蚕sps1的cds,用PCR克隆家蚕sps1基因序列。家蚕sps1基因cDNA长1817bp(登录号:ABA43639.1)。利用BLASTN进行同源性分析表明与果蝇的同源性为94%,与大肠杆菌序列同源性最差为46%。Bmsps1基因在家蚕基因组中是单拷贝的,只有一个外显子。推导3'UTR序列包含AATAA终止信号和Poly(A)。同时我们对Bmsps1进行了原核表达研究。; 范晓东李春峰黄科刘文明周泽扬; 关键词：家蚕克隆

利用转基因RNA干涉提高家蚕对BmNPV的抗性初探被引量：4: 2009年; 基于探讨利用转基因RNA干涉技术使家蚕获得对核型多角体病毒抗性的目的,将家蚕核型多角体病毒（BmNPV）的DNA聚合酶基因、蛋白激酶（PK1）基因以及bro-d和orf1629基因的部分编码片段,分别以其反向重复的形式与家蚕Actin3启动子连接,构建了基于piggyBac转座子载体的转基因表达载体,通过显微注射于家蚕卵,获得了36-107个G1蛾区,得到了20-23头转基因阳性家蚕。经Southern杂交及RT-PCR分析表明,BmNPV的4个反向重复片段都已经导入家蚕基因组中,并且可以进行转录。攻毒实验结果表明,BmNPV的DNA聚合酶基因和PK1基因反向重复片段对病毒的增殖有抑制作用,从而使家蚕对BmNPV具有一定抗性;而BmNPV的bro-d和orf1629基因反向重复片段对病毒的增殖没有抑制作用。针对特定病毒的转基因RNAi技术有望使家蚕获得对该病毒的抗性。; 黄科李春峰甘进锋蒙炳超李智周泽扬; 关键词：家蚕 PIGGYBAC转座子 RNA干涉转基因家蚕核型多角体病毒

家蚕Bmtdh基因的克隆与序列分析: 2007年; 克隆了家蚕苏氨酸脱氢酶基因(Bmtdh),其cDNA长1 310 bp(No.ABA43639.1),包括227 bp 5′-UTR和1 026 bp的完整开放读码框(ORF)。Bmtdh在家蚕基因组上以单拷贝形式存在,编码342个氨基酸,其Ile29-Val322区域是一个完整的表面异构酶功能域。表达谱分析与EST数据的分析表明,Bmtdh在丝腺和卵巢中的转录水平高于其它组织,并且Bmtdh在家蚕4龄眠期、5龄早期的转录水平也很高,而在卵期(G2胚胎)和1龄早期没有检测到其转录表达,表明Bmtdh基因可能参与了蚕丝蛋白的合成过程。; 李春峰范晓东刘文明黄科周泽扬; 关键词：家蚕丝腺克隆

家蚕CyPA基因的克隆、表达谱及进化分析被引量：1: 2008年; CyP蛋白家族在蛋白质折叠过程中起着重要作用。本研究克隆了家蚕Bombyx mori CyPA基因(BmCyPA),该基因由2个外显子和1个内含子组成,推导开放阅读框编码165个氨基酸,分子量为19.4kD,等电点为8.79。序列分析表明BmCyPA在不同物种间具有高度的保守性,含有肽酰脯氨酸顺反异构酶活性位点及与CsA侧链结合的氨基酸,提示BmCyPA可能具有肽酰脯氨酸顺反异构酶活性和与CsA结合的特性。组织表达谱及EST数据分析显示,BmCyPA在丝腺中高丰度表达。通过对不同物种来源的CyP基因的进化分析,进一步预测了BmCyP基因的功能,BmCyP可能与丝蛋白的正确折叠相关。; 李春峰刘文明黄科范晓东周泽扬; 关键词：家蚕丝腺系统进化表达谱

家蚕α淀粉酶基因的多态性研究被引量：4: 2006年; 【目的】从分子水平研究不同家蚕品种间淀粉酶基因多态性差异,为家蚕的育种选择和遗传进化研究提供有力的证据。【方法】根据网上基因数据库中的家蚕α淀粉酶基因序列(序列号:U07847),在第4和第5外显子区设计了一对特异性引物,在1个镇江野蚕和6个不同的家蚕品种基因组内进行PCR扩增,发现了该基因区域在不同品种间的多态现象。【结果】根据所得基因测序结果信息,用Clustalx软件进行分析并构建了分子系统树。其聚类结果在一定程度上也比较符合家蚕地理和化性的分布,而且镇江野蚕和家蚕品种距离较远。【结论】家蚕淀粉酶是一个为家蚕的起源和进化密切相关的分子标记基因,值得更深入的研究和探讨。; 黄健华贾世海张勇李木旺刘文彬苗雪霞黄勇平; 关键词：家蚕淀粉酶基因分子系统树

转植酸酶基因家蚕的制作及表达检测被引量：8: 2009年; 家蚕Bombyxmori丝腺具有高效合成蛋白质的特性,开发在丝腺特异表达外源蛋白质的生物反应器具有重要的意义。本研究利用piggyBac来源的两种载体pPIGA3GFP和pBac{3×P3-EGFPaf},建立了稳定的家蚕转基因技术体系;然后,利用一株黑曲霉来源的植酸酶基因,构建了在家蚕后部丝腺特异表达的融合表达载体pBac[3×P3-EGFP+FibLphyADsRed],注射蚕卵后,在53个G1蛾区中检测到3个有荧光蚕的蛾区。经Southern blot和反向PCR验证,转基因表达盒整合到家蚕染色体上。RT-PCR结果显示,植酸酶基因特异性地在后部丝腺表达,其表达模式与家蚕轻链丝素基因一致。结果表明我们成功获得了在后部丝腺特异表达植酸酶融合蛋白的转基因蚕,这为进一步开发家蚕生物反应器,利用转基因蚕生产各种重组蛋白具有积极的促进作用。; 李春峰黄科甘进锋蒙炳超李智夏庆友周泽扬; 关键词：家蚕转基因蚕 PIGGYBAC 转基因绿色荧光蛋白植酸酶

家蚕ga pdh基因的克隆及分析被引量：9: 2008年; 从家蚕EST数据中检索到果蝇(Drosophila melanogaster)甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)(AAN09371)氨基酸同源序列,用seqMAN延伸,电子克隆家蚕gapdh的cds,用PCR克隆家蚕gapdh基因序列.家蚕甘油醛-3-磷酸脱氢酶(bmgapdh)基因长1485bp(NO:DQ202316),包括5'UTR 221bp,3'UTR 265bp和完整的999bp ORF框,编码333个氨基酸残基.用BLASTN进行同源性分析表明与果蝇的同源性为91%,与鹌鹑胚胎纤维细胞序列同源性最差,为71%.bmgapdh基因在家蚕基因组中是单拷贝的,包含3个外显子.3'UTR序列包含AATAA终止信号和Poly(A).推导的氨基酸序列N端包含与NAD+结合的保守结构域:ASCTTNCL.; 黄科李春峰范晓东刘文明周泽扬; 关键词：甘油醛-3-磷酸脱氢酶家蚕克隆

家蚕gapdh基因的克隆及分析: 从家蚕EST数据中检索到果蝇（Drosophila melanogaster）甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）（AAN09371）氨基酸同源序列,用seqMAN延伸,电子克隆家蚕gapdh的cds,用PCR克隆家蚕g...; 黄科李春峰范晓东刘文明周泽扬; 关键词：甘油醛-3-磷酸脱氢酶家蚕克隆; 文献传递

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国家重点基础研究发展计划(2004AA2Z1020)