国家科技重大专项(2008ZX08006-001)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：罗晓彤张树敏于永生袁婷逄大欣更多>>
- 相关机构：吉林省农业科学院军事医学科学院吉林大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项吉林省农科院引进人才启动基金吉林省博士后科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 肌肉特异性表达猪肌肉生长抑制素前肽载体的构建与验证
- 2012年
- 为了在肌肉中特异性表达猪肌肉生长抑制素前肽,构建了重组表达载体,并体内验证其表达有效性。以猪基因组DNA为模板,通过PCR扩增肌肉生长抑制素前肽cDNA,与猪α-actin 5'调控序列、去除CMV启动子的表达载体pcDNA3.1连接构成肌肉特异性表达载体pcDNA3.1-MP,将重组载体分别注射到小鼠股四头肌中,RT-PCR检测证明其表达有效性及生肌调节因子mRNA水平的变化。结果显示,PCR扩增出819bp的特异性片段,DNA测序结果证明该克隆片段与猪肌肉生长抑制素前肽序列具有极高的的一致性,蛋白编码无突变,RT-PCR显示注射猪肌肉生长抑制素前肽的重组载体可使肌肉内猪肌肉生长抑制素前肽得到有效转录,生肌调节因子mRNA水平显著上调。本试验为在转基因动物的肌肉中表达外源基因奠定了基础。
- 于永生曹阳罗晓彤张树敏
- 骨骼肌特异表达线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因载体的构建与验证被引量：1
- 2011年
- 根据猪α-actin基因已知DNA序列设计合成了两个特异性引物,以猪基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到α-actin 5'调控序列,然后与线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因cDNA、去除CMV启动子的表达载体pcDNA3.1连接构成肌肉特异性表达载体pcDNA3.1-AF,小鼠股四头肌注射该重组载体,RT-PCR检测证明其表达有效性。PCR扩增出1 815 bp的特异性片段,DNA测序结果证明该克隆片段与α-actin 5'端调控区序列相比具有很高的一致性,含有肌肉特异性元件;小鼠股四头肌注射重组载体,RT-PCR显示肌肉内ω-3脂肪酸去饱和酶基因得到有效转录。
- 于永生张立春罗晓彤刘铮张树敏
- 茎环法RT-qPCR定量检测细胞抗猪瘟病毒siRNA的表达被引量：3
- 2012年
- RNAi(RNA interference)已成为特异抗病毒治疗研究的热点,但siRNA(small interfering RNA)的定量检测仍是评价RNAi抗病毒效果的瓶颈。为了检测抗CSFV特异siRNA分子(siN1和siN2)在细胞中的表达水平,设计并以交叉组合方法筛选了具有较高特异性和灵敏度的siRNA特异茎环引物(SLP-N1-6和SLP-N2-8),成功地建立了最优的siN1和siN2的茎环法RT-qPCR检测方法。该方法表现出良好的特异性和较高的灵敏度,能检测出102至108个拷贝的siRNA,至少可达7个数量级的检测范围,平行性好(Rsq=0.999),扩增效率高(Eff.=98.2%)。茎环法RT-qPCR能准确地定量检测抗CSFV的PK-15细胞克隆的siN1/siN2表达水平,可结合常规的检测病毒水平的间接免疫荧光和TCID50等技术定量评价RNAi抗CSFV的有效性,为未来抗猪瘟转基因猪的抗病毒效果评价提供了先进的检测技术。
- 刘帅李江南袁婷杨凡力逄大欣涂长春
- 关键词：实时定量PCR
