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国家自然科学基金(39830210)

作品数:14 被引量:42H指数:4
相关作者:余应年陈建明胡文蔚徐方高志华更多>>
相关机构:浙江大学宁夏医学院华中农业大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划宁夏回族自治区教育厅科研基金更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 14篇中文期刊文章

领域

  • 9篇医药卫生
  • 5篇生物学

主题

  • 9篇细胞
  • 4篇质粒
  • 4篇反义
  • 4篇DNA损伤
  • 3篇真核
  • 3篇真核细胞
  • 3篇基因
  • 3篇核细胞
  • 3篇反义RNA
  • 3篇N-
  • 2篇蛋白
  • 2篇电泳
  • 2篇亚硝基
  • 2篇亚硝基胍
  • 2篇真核细胞表达
  • 2篇凝胶
  • 2篇片段
  • 2篇肿瘤
  • 2篇细胞表达
  • 2篇细胞生长

机构

  • 13篇浙江大学
  • 2篇宁夏医学院
  • 1篇华中农业大学
  • 1篇中国科学院

作者

  • 12篇余应年
  • 4篇陈建明
  • 3篇杨军
  • 3篇徐方
  • 3篇胡文蔚
  • 3篇高志华
  • 3篇金静华
  • 2篇宋韬
  • 2篇谢海洋
  • 1篇周秀芬
  • 1篇胡文蔚
  • 1篇邓子新
  • 1篇王谷亮
  • 1篇王政
  • 1篇赵书春

传媒

  • 4篇中国病理生理...
  • 4篇中国药理学与...
  • 3篇浙江大学学报...
  • 1篇微生物学报
  • 1篇生物化学与生...
  • 1篇云南大学学报...

年份

  • 3篇2003
  • 1篇2002
  • 1篇2001
  • 7篇2000
  • 2篇1999
14 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
大线性质粒pHZ1000,pHZ1001在链霉菌种间的接合转移被引量:6
2000年
Using pulsed\|field gel electrophoresis (PFGE),two indigenous large plasmids were isolated from Streptomyces T8 4.Two dimentional PFGE revealed that both plasmids were linear molecules.By parallel electrophoresis with linear plasmids of known sizes,the two linear plasmids were estimated to be approximately 230kb and 90kb,which were designated as pHZ1000 and pHZ1001,respectively.Both plasmids could be transferred into S.lividans ZX1 by conjugation,which is detectable by “pock”formation.Five S.lividans ZX1 derivatives which carry one or two plasmids were isolated and characterized by Southern hybridization and PFGE.
赵书春周秀芬邓子新
关键词:链霉菌
表达反义hREV3基因片段的真核细胞表达质粒的构建被引量:7
1999年
目的:构建真核细胞表达重组体,为今后利用反义核酸阻断技术研究hREV3 基因功能及其与细胞遗传不稳定性的关系提供物质材料。方法:用内切酶Bam HI及Bam HI+ Hind Ⅲ分别对pBS- hREV3 进行单酶切和双酶切,从而得到含hREV3 cDNA 特异性保守序列的两种长度(742bp 和357bp) 片段,分别将两者插入真核细胞表达载体:pBK-RSV( 持续表达载体) 和pMAMneo amp - ( 表达需经地塞米松诱导) 。结果:经酶切图谱分析,筛选出含正向和反向插入片段真核细胞表达重组体5 种。结论:为深入研究hREV3
徐方余应年胡文蔚
关键词:反义真核细胞质粒
跨损伤合成的DNA聚合酶——一类新的DNA聚合酶被引量:1
2001年
细胞虽然拥有多种修复途径 ,但有些DNA损伤仍不可避免地会逃避修复而在基因组上保留下来 ,细胞跨损伤DNA合成的分子机制一直是DNA修复中主要的未解决问题之一 .最近通过对一类结构相关性UmuC/DinB蛋白质超家族成员的研究发现它们具有DNA聚合酶功能 .这类新发现的DNA聚合酶不同于经典的复制性DNA聚合酶 ,它们能以易误 /突变 (error prone/mutagenic)或无误 (error free)方式进行跨损伤 (translesion)DNA合成 ,并且从细菌到人在进化上功能保守 .
陈建明余应年
关键词:DNA聚合酶DNA损伤DNA修复
构建能与pZ189系列穿梭质粒配套适用的真核细胞表达载体被引量:4
2000年
为有效分离实验系统中同时存在于哺乳类细胞中的两种质粒 ,利用插入失活对真核细胞表达质粒的抗性进行改建 .以具有编码氨苄抗性基因的p REP9质粒和同时有编码氨苄和卡那抗性基因的p MAMneo质粒为起始模板得到无氨苄抗性而具有卡那抗性的真核细胞表达质粒 :p REP9- amp-和p MAMneo- amp-.前者可用于外源基因在细胞内的持续表达而后者对外源基因表达受地塞米松的诱导 .当细胞中同时转染有其他抗性的质粒时 ,可以通过抗生素抗性的不同而使两种质粒得到有效地分离和筛选 ,并能与 p Z1 89穿梭质粒配套应用于突变研究 .
胡文蔚余应年陈星若谢海洋
关键词:真核细胞质粒抗生素
用双向凝胶电泳分析低浓度烷化剂N-甲基-N′-硝基-N-亚硝胍引起的人羊膜FL细胞蛋白质的表达差异被引量:3
2002年
目的 为了研究哺乳类细胞受到低浓度烷化剂攻击后蛋白表达谱的变化。方法 用双向凝胶电泳结合相应的 2 DE分析软件比较烷化剂N 甲基 N′ 硝基 N 亚硝基胍 (MNNG)处理组和二甲基亚砜对照组的FL细胞的蛋白质组的表达差异。结果MNNG处理后的FL细胞中检测到 10个新出现的蛋白点 ,同时有 5个蛋白点在MNNG处理后消失 ;有30个点在表达量上有显著变化 ,其中 16个点在MNNG处理后表达升高 ,另 14个点则表达量降低。结论 在低浓度烷化剂攻击的FL细胞中有一系列蛋白质表达水平的改变 ,提示这些发生改变的蛋白质可能参与了哺乳类细胞非定标性突变的发生。
金静华余应年
关键词:双向凝胶电泳烷化剂
hREV3基因表达被反义阻断的人胚肾细胞系的建立及其某些生物学特性观察被引量:5
2000年
目的:建立 hREV3基因表达反义阻断的细胞系并观察其生长特性与对烷化剂 N-甲基-N’-硝基-N-亚硝胍(N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)敏感性的改变。方法:利用改良磷酸钙-DNA共沉淀法分别将本室构建的持续和诱导表达反义hREV3 RNA的真核细胞重组表达质粒pBK-RSV-hREV3和pMAMneo-amp--hREV3转染人胚胎肾细胞(HEK-293细胞),经G418筛选,建立相应的细胞系293-B-hREV3-和293-M-hREV3。通过细胞计数方法观察这些细胞系的生长速率和不同浓度MNNG对细胞的细胞毒作用。结果:持续或诱导阻断hREV3基因的表达对细胞生长速率均无影响;反义阻断细胞系对MNNG的细胞毒作用比母本293细胞较为敏感。结论:hREV3基因的编码产物并非细胞生长所必需而可能在细胞的DNA损伤修复中起作用。
徐方余应年宋韬
关键词:DNA损伤RNA
一个参与N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍诱发的遗传不稳定的cDNA片段的分离筛选被引量:2
2000年
为研究甲基硝基亚硝基胍 ( MNNG)诱发猴肾vero细胞遗传不稳定的机理 ,采用 m RNA差异显示分离到的 MNNG处理后表达发生改变的表达序列标识 ( EST)相关基因进行功能筛选 .利用反义核酸阻断技术阻断其相应基因的表达 ,以筛选分离参与非定标性突变形成的 c DNA片段 .现筛选到 1 0号片段 ,其相关基因的表达被阻断后 ,MNNG诱发的 vero细胞非定标突变率下降至自发突变水平 ,提示 1 0号片段相关的基因是非定标突变发生的正相关基因 .
胡文蔚宋韬余应年陈星若谢海洋
关键词:突变反义RNA遗传学MNNG
真核泛素缀合途径研究进展被引量:12
2000年
A Review] A large quantity of intracellular structural and regulatory proteins can be covalently attached to ubiquitin posttranscriptionally and thus modified. The ubiquitination of proteins serves as targeting signals, making ubiquitinated proteins distributed to different parts of the cells, changing the activities, the interaction between macromolecules and the half-life of proteins. Therefore, ubiquitin conjugation is implicated in numerous metabolic processes in eukaryotes. Ubiquitin conjugates its protein substrates via a cascade reaction. This paper is a review of recent advances in this area.
陈建明余应年
关键词:生物学意义泛素缀合真核细胞
反义阻断hMMS2基因表达以抑制细胞生长被引量:1
2000年
将新近发现的人泛素缀合酶样蛋白基因h MMS2的 c DNA特定反向克隆到本室改建的真核细胞表达载体 p MAMneo- amp-中 ,构建了表达h MMS2反义 RNA的重组质粒 .将此反义表达重组质粒 (p MAM- anti- h MMS2 )用改良的磷酸钙法转染人羊膜 FL细胞 ,建立 FL- h MMS2 -细胞系 .比较该细胞系及 FL细胞和转染了空载体 p MAMneo-amp-的 FL细胞 (FL- MAMneo细胞 )的生长速度 ,发现 FL- h MMS2 -细胞系在地塞米松诱导下h MMS2基因表达被反义抑制后导致细胞生长受阻 ,提示 h MMS2基因为细胞生长所必需 .
陈建明余应年陈星若
关键词:基因反义RNA细胞生长
低浓度MNNG诱发FL细胞应答反应的蛋白质组学研究
2003年
目的 :研究低浓度甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)对人羊膜 FL细胞蛋白质表达谱的影响 ,以助于阐明环境致癌物引起细胞早期应答反应的分子机制。方法 :FL细胞分别用 MNNG和 DMSO(溶剂对照 )处理后 ,提取细胞总蛋白 ,用双向凝胶电泳分离蛋白质组成分 ,银染染色后用相应的分析软件分析数字化的凝胶图像 ,找出在 MN-NG处理后表达有差异的蛋白斑点 ,用基质辅助的激光解吸 -飞行时间质谱 (MAL DI- TOF)鉴定。结果 :在 MNNG处理后有 6 0多个蛋白斑点出现质和量的变化 ,其中 18个蛋白斑点只能在 MNNG处理的细胞中检测到 ,13个蛋白斑点则在 MNNG处理后消失 ;同时检测到 30个蛋白斑点在表达量上有显著变化 ,其中 16个点表达升高 ,14个点则表达降低。通过数据库的检索 ,初步的鉴定了一批结构和功能各异的蛋白。结论 :在低浓度烷化剂攻击后 ,FL细胞中的蛋白表达谱发生了显著的变化。
金静华高志华杨军余应年
关键词:蛋白质组学
共2页<12>
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