国家自然科学基金(30801242)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
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- GST-LMO1融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达被引量：3
- 2011年
- 目的构建GST-LMO1融合蛋白表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法以人胎脑文库为模板,用PCR方法法扩增出LMO1基因全长及各个截短突变体,通过BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点分别将其定向插入pGEX-5X-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-5X-2-LMO1及其截短突变体,通过酶切电泳鉴定和DNA序列测定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-5X-2-LMO1及其截短突变体,并用Western blot方法证实了GST-LMO1全长及各个截短突变体融合蛋白的表达。结论成功构建了LMO1全长及其截短突变体原核表达载体,并证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达,为LMO1结构与功能的研究提供了前提基础。
- 顾卉佟宇鑫刘彤李慧李丹妮袁正伟
- 关键词：质粒原核表达
- 大鼠羊水双向电泳样品不同处理方法的比较被引量：1
- 2012年
- 目的比较羊水样品2-d电泳的不同处理方法，以建立相对简单、重复性好、检出效率高的2-d电泳方法。方法提取孕17天正常大鼠单水，分别采用三氯乙酸一丙酮沉淀法（方案1）、三氯乙酸一丙酮沉淀法联合白蛋白和IgG去除试剂盒（方案2）及超滤膜浓缩法联合白蛋白和IgG去除试剂盒（方案3）三种方法处理羊水，之后进行双向电泳分离、胶体染色、软件分析和质谱检测。结果方案1、2和3分别检测到的蛋白点为253±28、749±32和782±27个，方案1与方案2和方案3比较差异均具有统计学意义（P〈0．05）；方案2与方案3比较，差异具有统计学意义（P〈O．05）。方案1、2和3检测的相对分子质量〉50000蛋白点分别为57±14，45±13和41±14个，差异无统计学意义；方案1、2和3检测的相对分子质量〈50000蛋白点分别为196±29，702士35，735±29个，方案1与方案2和方案3比较差异均具有统计学意义（P〈0．05）；方案2与方案3比较，差异具有统计学意义（P〈O．05）。结论采用超滤膜和去除高丰度蛋白预处理羊水标本可去除高丰度蛋白，提高低丰度蛋白含量，是研究羊水蛋白组的有效方法。
- 单立平李慧范洋周凤华顾卉袁正伟
- 关键词：蛋白组羊水质谱双向电泳
