江苏省自然科学基金(BK2011306)
- 作品数：5 被引量：4H指数：2
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- 前列腺癌细胞中核因子κB家族成员调控乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂表达的机制
- 2012年
- 目的探讨核因子κB（NF—κB）家族成员（RelA、pSO、RelB和p52）调控抑癌基因乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂（Maspin）表达的可能机制。方法采用Westernblot法检测前列腺癌细胞株DUl45、PC-3和LNCaP中NF-κB家族成员和Maspin蛋白的表达情况。采用RNA干扰技术结合Westernblot法，检测RelB或RelA沉默对前列腺癌DUl45细胞中Maspin蛋白表达的影响。采用流式细胞术检测RelB沉默后前列腺癌DUl45细胞的死亡情况。通过转染RelB表达质粒并建立稳定表达细胞株，观察过表达RelB对前列腺癌PC-3细胞中Maspin蛋白表达的影响。结果RelA、pSO、RelB和p52蛋白在雄激素非依赖型前列腺癌细胞株DUl45和PC-3中呈持续性高表达，其中RelB蛋白在DUl45细胞中的表达最为显著。Maspin蛋白在LNCaP和DUl45细胞中低表达，而在PC-3细胞中高表达。在DUl45细胞中，沉默RelB可以诱导Maspin蛋白表达上调，同时促进细胞死亡[死亡率为（13．3±4．2）％]。在PC．3细胞中，过表达RelB可抑制Maspin的内源性表达。RelA沉默对DUl45细胞中Maspin蛋白的表达无显著影响。结论在雄激素非依赖型前列腺癌细胞株中，NF-κB经典与非经典通路蛋白持续性活化，RelB与Maspin的表达呈负相关性。RelB负性调控了内源性Maspin的表达，进而影响了前列腺癌细胞的存活。RelA并不参与对Maspin表达的调控。
- 马亮沈雅颖周鹏周珺国风
- 关键词：核因子ΚB
- 慢性淋巴细胞性白血病骨髓基质细胞和正常骨髓基质细胞的比较性分析被引量：2
- 2014年
- 本研究旨在对慢性淋巴细胞性白血病原代骨髓基质细胞(CLL-human bone marrow stromal cells,CLL-hBMSC)和正常原代骨髓基质细胞(normal hBMSC,N-hBMSC)进行比较性分析,为建立CLL-CLL-hBMSC相互作用模型,从而更好地模拟CLL体内环境提供理论依据。从CLL患者和正常供者骨髓中分离单个核细胞,进行原代骨髓基质细胞(hBMSC)培养;采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测CLL-hBMSC和N-hBMSC表面粘附分子如血管细胞粘附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)和细胞间粘附分子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)的mRNA水平;采用real-time PCR和Western blot法分别检测两类不同来源的hBMSC中淋巴毒素β受体(lymphotoxin beta receptor,LTβR)的mRNA和蛋白质表达水平;采用Western blot法检测NF-κB家族成员的表达并分析细胞因子LTα1β2对NF-κB家族成员表达的影响;建立hBMSC和CLL细胞共培养体系,利用碘化丙啶(PI)染色检测细胞死亡情况。结果表明:从CLL患者骨髓中能成功地培养出贴壁的成纤维样hBMSC。与N-hBMSC相似,表面粘附分子VCAM-1和ICAM-1在两类hBMSC中的mRNA表达一致;两类hBMSC中LTβR的mRNA和蛋白表达水平相似;各NF-κB家族成员在两类hBMSC中都有表达,且蛋白水平无显著性差异;细胞因子LTα1β2可诱导hBMSC中经典性和非经典性NF-κB信号通路的活化;体外实验表明,两类hBMSC都能够有效地支持CLL细胞的体外存活。结论:两类hBMSC培养效率以及细胞形态上无明显差异。LTβR-NF-κB信号分子在两类hBMSC的表达以及活化情况相似。
- 王欢周珺徐晶晶国风
- 关键词：CLL骨髓基质细胞
- 核转录因子RelB对慢性B淋巴细胞白血病细胞蛋白酶体抑制剂敏感性的影响被引量：1
- 2014年
- 目的 探讨核转录因子RelB对慢性B淋巴细胞白血病（B-CLL）细胞蛋白酶体抑制剂敏感性的影响.方法 以初诊B-CLL患者CD5＋CD19＋细胞为研究对象,用RT-PCR法检测NF-κB家族成员RelB mRNA的表达水平;采用凝胶迁移实验及TransAMTMELISA法分析细胞核中RelB的活性;根据CLL细胞RelB活性将细胞分为RelB阳性（RelB＋）和RelB阴性（RelB-）两组,与人骨髓基质细胞共培养,分别加入氟达拉滨（10 μmol/L）、MG-132（1 μmol/L）和硼替佐米（1μmol/L）作用不同时间,采用碘化丙锭染色法分析药物对RelB＋和RelB-细胞死亡率的影响.结果 CLL细胞存在RelB mRNA表达及RelB活化,不同CLL细胞RelB mRNA表达水平及RelB活化水平不一.与骨髓基质细胞共培养时,三种药物均可促进细胞死亡,并具有时间依赖性.氟达拉滨对RelB＋和RelB-组CLL细胞的杀伤活性无明显差异,作用72 h后,两组CLL细胞死亡率分别为（61.11±6.91）％和（67.57±9.45）％;MG-132处理72 h对RelB＋细胞的杀伤活性高于RelB-组,两组细胞死亡率分别为（66.22±3.39）％和（51.07±5.93）％;硼替佐米处理24及48 h对RelB＋细胞杀伤活性高于RelB-组.24 h,两组细胞死亡率分别为（75.50±4.66）％和（66.32±10.20）％;48 h,死亡率分别为（92.11±3.14）％和（85.84±5.81）％.结论 骨髓来源CLL细胞中存在以RelB为代表的非经典性NF-κB活性.RelB活性增强可增加CLL细胞对蛋白酶体抑制剂硼替佐米和MG-132的敏感性,而对氟达拉滨的敏感性无明显影响.
- 徐晶晶周鹏孙爱宁国风
- 关键词：蛋白酶体抑制剂
- 非经典性NF—κB活性在慢性B淋巴细胞白血病中的作用被引量：2
- 2014年
- 目的探讨非经典性NF—κB信号通路在慢性B淋巴细胞白血病（B—CLL）中的作用。方法采用实时荧光定量RT-PCR法检测56例B—CLL初诊患者骨髓CD5＋CD19＋细胞（CLL—B细胞）NF-κB家族成员mRNA表达水平；采用TransAM^TM ELISA法定量分析CLL—B细胞核中NF-κB蛋白质复合物的活性成分；采用流式细胞术分析CLL—B细胞体外单独或与骨髓基质细胞（hBMSC）共培养后细胞死亡率；采用Westemblot法检测共培养对骨髓CLL-B细胞中NF-κB家族成员RelA和RelB蛋白水平表达的影响。结果CLL—B细胞的NF-κB家族成员RelA、p50、RelB和p52mRNA水平均高于正常B细胞，差异有统计学意义（P值均〈0．01）。所有标本中CLL—B细胞都存在RelA活化，而RelB只在部分标本中活性增强。CLL．B细胞核中平均RelA活性比正常B细胞显著增强，而平均RelB活性与正常B细胞相似。体外单独培养24、48和72h时，RelA＋／RelB组CLL．B细胞死亡率分别为（35．544-4．43）％、（50．92土8．44）％和（49．24士8．16）％；RelA＋／RelB＋组CLL—B细胞死亡率分别为（20．65±2．37）％、（18．17±1.36）％和（26．55±4．08）％。与hBMSC共培养，RelA＋／RelB一组CLL．B细胞死亡率较单独培养时下降，但相对于RelA＋／RelB＋组CLL—B细胞死亡率仍较高；共培养48h后，RelA＋／RelB-组CLL—B细胞中RelA和RelB显著上调，RelA＋／RelB＋组中CLL—B细胞质中RelA表达上调，RelB在胞质中显著下调并在胞核中轻度上调。结论骨髓CLL—B细胞中存在非经典性NF-κB的活化，RelB活化程度在不同的CLL—B细胞中差异显著；RelB和RelA活化共表达赋予骨髓CLL—B细胞存活优势，CLL—B细胞与hBMSC共培养，通过诱导CLL—B细胞中RelA和RelB的表达发挥对其体外存活的保护作用。
- 徐晶晶周鹏国风
- 关键词：骨髓基质细胞
- Maspin在前列腺癌PC-3细胞生物学行为中的作用被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨maspin影响前列腺癌细胞生物学行为的作用机制。方法:设计并合成靶向maspin基因的特异性shRNA,构建靶向maspin的shRNA慢病毒表达质粒并进行细胞转染。采用qRT-PCR和Western blot-ting法检测PC-3细胞转染重组质粒后maspin mRNA和蛋白质水平的变化以建立稳定转染maspin-shRNA的细胞系。采用qRT-PCR检测转染重组质粒对PC-3细胞中凋亡相关基因的影响。采用xCELLigence系统实时动态观察转染重组质粒前后细胞的生长并计算倍增时间,结合流式细胞术检测蛋白酶体抑制剂细胞毒性作用在细胞转染前后的变化。采用Western blotting法检测蛋白酶体抑制剂对核因子κB家族成员RelA和RelB表达的影响。结果:成功构建靶向maspin的shRNA慢病毒表达质粒pLL3.7-siMaspin。利用慢病毒表达系统转染并通过极限稀释法得到单克隆转染细胞PC-3-siMaspin。PC-3-siMaspin细胞的倍增时间为26.83 h,而PC-3-control细胞为37.95 h。PC-3-siMaspin细胞中bcl-2和A20 mRNA表达水平上调;而bax和bim的表达水平下调。蛋白酶体抑制剂MG-132作用PC-3-control和PC-3-siMaspin细胞8 h后细胞死亡率分别为27.1%±5.6%和7.5%±2.3%,24 h为24.2%±3.7%和8.2%±2.5%,36 h为28.7%±3.7%和7.6%±2.5%。PC-3-control细胞在MG-132作用下RelA的表达逐渐下调,而PC-3-siMaspin细胞中RelA的表达无明显变化。结论:在雄激素非依赖型前列腺癌细胞株PC-3中maspin呈高表达。Maspin表达沉默显著缩短了前列腺癌细胞的倍增时间,加快了细胞的生长与增殖。Maspin表达沉默显著下调了PC-3细胞对MG-132的敏感性,并与RelA降解的缺失相关。
- 刘美琴周珺马亮国风
- 关键词：前列腺肿瘤MASPIN蛋白耐药性
