您的位置: 专家智库 > >

中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项资金(2012JK011)

作品数:2 被引量:14H指数:2
相关作者:吴绍强吕继洲张永宁林祥梅冯春燕更多>>
相关机构:中国检验检疫科学研究院更多>>
发文基金:中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项资金国家质检总局科技计划项目国家科技支撑计划更多>>
相关领域:农业科学生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 2篇中文期刊文章

领域

  • 1篇生物学
  • 1篇医药卫生
  • 1篇农业科学

主题

  • 2篇衣壳
  • 2篇衣壳蛋白
  • 2篇原核表达
  • 2篇施马伦贝格病...
  • 2篇抗体
  • 2篇克隆
  • 2篇核衣壳
  • 2篇核衣壳蛋白
  • 2篇病毒
  • 1篇单克隆
  • 1篇单克隆抗体
  • 1篇多克隆
  • 1篇多克隆抗体
  • 1篇特性分析
  • 1篇纯化

机构

  • 2篇中国检验检疫...

作者

  • 2篇冯春燕
  • 2篇林祥梅
  • 2篇张永宁
  • 2篇吕继洲
  • 2篇吴绍强
  • 1篇邓俊花
  • 1篇王彩霞
  • 1篇袁向芬

传媒

  • 1篇畜牧兽医学报
  • 1篇细胞与分子免...

年份

  • 1篇2014
  • 1篇2013
2 条 记 录,以下是 1-2
排序方式:
施马伦贝格病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析被引量:7
2014年
目的制备施马伦贝格病毒(SBV)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAb)并分析其特性。方法将SBV N基因分别构建至pET-28a-c(+)和pMAL-c5X载体中,在大肠杆菌中诱导表达带组氨酸标签的融合蛋白His-SBV-N和带麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的融合蛋白MBP-SBV-N,分别用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)树脂和直链淀粉树脂纯化两种蛋白;用纯化的His-SBVN免疫BALB/c小鼠制备mAb,以MBP-SBV-N为包被抗原间接ELISA筛选分泌mAb的杂交瘤细胞和测定mAb效价,利用蛋白G琼脂糖凝胶从腹水中纯化mAb;应用Western blot和间接免疫荧光分析mAb的反应性和特异性。结果筛选并纯化出1株抗SBV的mAb(命名为1F2),效价为1∶32 000,重链亚型为IgG2α,轻链为κ;1F2既能与重组SBV N蛋白发生反应,又能识别SBV,但与布尼亚病毒科内亲缘关系较近的沙门达病毒、道格拉斯病毒和赤羽病病毒的N蛋白存在交叉反应,而与裂谷热病毒N蛋白无交叉反应。结论成功制备了抗SBV核衣壳蛋白的mAb,为SBV的血清学检测提供了工具。
张永宁吴绍强Kerstin WERNIKE吕继洲冯春燕林祥梅
关键词:施马伦贝格病毒核衣壳蛋白原核表达单克隆抗体
施马伦贝格病毒核衣壳蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量:11
2013年
本研究旨在表达施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)的核衣壳蛋白(N),进而制备其多克隆抗体。以SBV(BH80株)的RNA为模板,RT-PCR扩增N基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-28a-c(+)中,获得pET-28a-SBV-N重组质粒。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达HisSBV-N融合蛋白。在非变性条件下用Ni-NTA柱纯化His-SBV-N,并以此为抗原免疫新西兰大白兔制备多抗。经免疫亲和层析纯化后,利用Western blot和间接免疫荧光对多抗进行鉴定。结果表明:(1)His-SBV-N融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中同时以可溶性和包涵体2种形式表达,相对分子质量约为30ku;(2)制备的多抗效价高达1∶64 000。该多抗不仅能与His-SBV-N融合蛋白发生特异性反应,而且还能识别SBV的不同毒株,但与布尼亚病毒科内亲缘关系最近的沙门达病毒(Shamonda virus)、道格拉斯病毒(Douglas virus)和赤羽病病毒(Akabane virus)的核衣壳蛋白存在交叉反应。His-SBV-N融合蛋白及其多抗的成功制备,为施马伦贝格病血清学检测方法的建立奠定了物质基础。
张永宁吴绍强吕继洲冯春燕王彩霞袁向芬邓俊花林祥梅Wernike Kerstin
关键词:施马伦贝格病毒核衣壳蛋白原核表达多克隆抗体
共1页<1>
聚类工具0