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电穿孔技术及其在精子介导转基因中的应用被引量：5: 2006年; 介绍了电穿孔技术和精子介导转基因技术,同时总结了近年来电穿孔技术在精子介导转基因中的应用进展。; 张业顺张国政夏定国赵浩勤; 关键词：电穿孔精子介导转基因

利用SSR标记进行家蚕部分品种资源的指纹图谱分析被引量：25: 2006年; 【目的】通过构建家蚕品种资源的指纹图谱,研究品种间的亲缘关系。【方法】用35个SSR标记研究96个家蚕品种资源的指纹图谱。【结果】这些SSR标记在家蚕品种间表现出丰富的多态性,等位基因数量在3～28个,平均为12.77个,多态性指数(PIC)在0.299～0.919,平均0.71。根据各品种的指纹图谱,用Nei(1978)的方法计算了各品种间的遗传距离,最大为0.1983,最小为0.0641,并用UPGMA方法进行了聚类,得到的分子系统图与传统意义上的形态分类方法接近但存在一些微小的差异。根据遗传分析结果,探讨了家蚕的起源与进化关系。【结论】SSR标记是适于进行品种资源的指纹图谱分析和分子标记辅助育种的一种标记,可在家蚕核心种质资源库的构建中发挥主要作用。; 侯成香李木旺张月华钱荷英孙平江徐安英苗雪霞郭秋红相辉黄勇平; 关键词：家蚕品种资源 SSR标记指纹图谱

家蚕品种资源的遗传多样性与分子系统学研究被引量：3: 2007年; 利用微卫星(SSR)标记,在DNA分子水平上对不同地理系统和化性的家蚕品种之间的遗传差异进行了研究。结果表明:在11对引物中均出现稳定的扩增带,扩增带总数为106条,最多的有16条,最少有4条,平均每个引物9.6条。利用单匹配相似系数和UPGMA聚类法对结果进行分析,发现其SSR不但具有品种特异性,而且具有系统特异性,证明不同化性及地理系统的家蚕在进化上属有显著差异的类群。; 钱荷英徐安英张月华孙平江赵云坡; 关键词：家蚕分子系统树物种进化基因图谱地理种群

家蚕转录因子AP-4基因cDNA的分子克隆与生物信息学分析被引量：3: 2008年; AP-4(activator protein 4)是一种转录因子,在生物的生长发育中有重要作用。根据家蚕表达序列标签(EST)并利用cDNA末端快速扩增(RACE)方法克隆了家蚕AP-4(Bombyx mori activator protein4)基因,结合生物信息学方法对所获的序列进行开放阅读框、序列同源性分析,预测了AP-4蛋白的理化性质。获得的家蚕AP-4基因cDNA的全长为1621bp,其开放阅读框为996bp,编码331个氨基酸,基因由3个外显子和2个内含子组成。同源性比对表明该基因推导的氨基酸序列与棉铃虫AP-4和谷蛀虫AP-4推测的蛋白同源性分别为76%和54%,第45-99位氨基酸序列是一个典型的保守结构域。实时定量RT-PCR显示该基因在所检测家蚕的各发育时期中,除幼虫1龄和蛹期第4天无表达外,其它时期均有表达,其中幼虫3龄和4龄期的表达量较高。; 李佳梅赵浩勤张国政夏定国张业顺唐顺明沈兴家; 关键词：家蚕 CDNA末端快速扩增生物信息学

gp64基因相应dsRNA对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)增殖的抑制被引量：10: 2007年; 【目的】研究gp64基因相对应的多个dsRNA对家蚕核型多角体病毒增殖的抑制效果。【方法】体外合成dsRNA,通过病毒滴度试验、实时定量RT-PCR法研究gp64基因的不同区域、不同长度与RNAi干扰效果的关系。【结果】供试的6个dsRNA的最大抑制效果相当(滴度TCID50的最大抑制差值为4.00左右);经RNAi的不同时间点的gp64mRNA表达水平均明显下调(P<0.01),其中48h的gp64mRNA的表达量约为对照的1/300。【结论】6个dsRNA均能有效地抑制病毒的基因表达和增殖;gp64ORF第1390～1499位点(G3-3)是RNAi的较佳靶位点。; 夏定国张国政王文兵赵巧玲唐顺明; 关键词：双链RNA 家蚕核型多角体病毒病毒滴度实时定量RT-PCR

家蚕广食性系统C01对不含桑叶粉人工饲料摄食性的遗传被引量：1: 2006年; C01是用不含桑叶粉的人工饲料作检测物,从家蚕种质资源中国系统中筛选得到的摄食性优良的品种。用对不含桑叶粉的人工饲料无摄食性的中国系统1015与C01杂交,对F1、F2和BC1世代蚁蚕用不含桑叶粉的人工饲料检测,分析C01对不含桑叶粉的人工饲料摄食性的遗传规律。结果表明:C01对不含桑叶粉的人工饲料摄食性为隐性遗传,并且由常染色体基因支配。卡平方(X2,chi-square)测定结果显示,广食性品种C01对不含桑叶粉人工饲料摄食性遗传除了受1个隐性主基因控制外,同时还有修饰基因的作用。; 张月华徐安英张国政李木旺孙平江钱荷英; 关键词：家蚕人工饲料广食性

dsRNA对家蚕核型多角体病毒复制增殖的抑制效果被引量：16: 2006年; 以家蚕核型多角体病毒(BmNPV)复制必需的极早期基因ie-1和细胞释放型病毒CRV入侵关键基因gp64为靶序列,分别人工设计并体外转录出dsRNA I1(438 bp)和dsRNA G1(337 bp),用家蚕培养细胞BmN研究目标dsRNA对BmNPV复制、增殖的抑制效果。结果表明:dsRNA I1能有效地抑制BmNPV在BmN细胞中的增殖,最大抑制效果使培养液中的病毒滴度(TC ID50)比对照降低了104.30倍;dsRNA G1能显著地抑制新形成的病毒粒子的细胞侵染能力,最高可使培养液中的病毒滴度降低103.17倍。; 夏定国张国政王文兵赵巧玲沈兴家唐顺明张业顺韦亚东; 关键词：双链RNA RNA干扰家蚕核型多角体病毒增殖

家蚕精子介导转基因技术体系的优化被引量：8: 2007年; 为了构建高效的家蚕转基因技术,对采用piggyBac转座载体的家蚕精子介导转基因的主要技术参数进行优化,结果表明外源DNA的稀释剂和注射方式对导入效率影响较大,G0代未整合的外源DNA在5龄期前基本被降解破坏。推荐的家蚕精子介导基因转移技术方案为:处女蛾交尾囊注射6～8μL以0.1×TE稀释的2 g/Lpig-gyBac转座子载体DNA后正常交配产卵,根据G0代5龄期及蛾期PCR检测标记基因为阳性的蛾区自交,G1代阳性个体自交以获得纯合后代。; 张业顺夏定国张国政唐顺明沈兴家赵浩勤郭锡杰; 关键词：家蚕 PCR检测

家蚕CIb1基因启动子活性分析被引量：1: 2006年; 用PCR方法从家蚕基因组DNA扩增了家蚕胰凝乳蛋白酶抑制剂b1基因(CIb1)4个不同长度的启动子片段,构建由其驱动的萤火虫荧光素酶基因报告质粒,在脂质体介导下转染家蚕BmN细胞,体外分析了该基因启动子的活性。结果表明,家蚕CIb1基因启动子在BmN细胞中有微弱的转录活性；野生型BmNPV感染能增强启动子活性；hr3增强的不同长度CIb1基因启动子片段的活性有显著差异,提示转录起始位点上游-74～-1nt包含了启动子的基本元件,而在-687～-465nt、-465～-317nt和-317～-74nt存在着主要的顺式元件。试验结果有助于阐明CIb1的表达调控机理和对家蚕天然性免疫的理解。; 赵巧玲唐顺明易咏竹赵秀振沈兴家朱良均张国政郭锡杰; 关键词：家蚕家蚕核型多角体病毒

用SSR标记构建家蚕中系品种资源指纹图谱被引量：10: 2006年; 利用微卫星标记SSR(Simple Sequence Repeat),在DNA水平上构建了96个中国系统二化性家蚕品种的DNA指纹图谱。57对SSR引物共扩增出507条有效带,最多的一对引物扩增出了24个片段,最少的仅有1个,平均为8.9个/引物,表明各品种之间存在丰富的微卫星多态性。家蚕品种间遗传距离最大值为0.2572,最小值为0.095,根据每个品种间的遗传距离,利用UPGMA聚类法进行了聚类分析,发现SSR扩增片段具有品种特异性,能准确地对各品种进行分类和鉴别。; 张月华徐安英李木旺钱荷英孙平江侯成香; 关键词：家蚕微卫星标记分子系统树指纹图谱

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江苏省自然科学基金(BK2004206)

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