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拟南芥RNA加工因子的开花调控机制被引量：1: 2013年; 开花调控是植物生长发育中很重要的过程。拟南芥分子遗传学分析表明,MADS-box转录因子FLC、RNA结合蛋白(FCA、FPA和FLK)和mRNA3′端加工因子(FY)都参与了这一过程。开花因子通过抑制FLC表达来促使植物开花;RNA结合蛋白通过转录后调控来调节FLC的表达以调控拟南芥开花。此外,microRNAs也参与这一过程。本文通过综述上述几个相关因子的调控过程,来阐述RNA加工因子参与的拟南芥开花调控机理。; 邹晨辉汤青林宋明王志敏; 关键词：拟南芥开花时间 RNA结合蛋白 MICRORNAS

芥菜开花整合子SOC1与AGL24蛋白K结构域的互作位点鉴定被引量：1: 2015年; 芥菜开花整合子SOC1与AGL24相互作用能够调节开花时间。为了深入研究SOC1与AGL24蛋白互作的分子机理,利用ISIS系统在线预测了SOC1/AGL24互作位点,并分别在MIKC型蛋白SOC1和AGL24的K域构建了5个SOC1突变体和3个AGL24突变体。酵母双杂交和β–半乳糖苷酶活性检测表明:突变体AGL24^(R137L)和AGL24^(E169L)能够与SOC1蛋白互作,但作用强度与SOC1/AGL24差异不显著;然而AGL24蛋白第107位的谷氨酰胺突变为亮氨酸后(AGL24^(Q107L)),则与SOC1的作用消失。说明SOC1/AGL24的作用强度能够被AGL24蛋白K域第107位调节,但可能不受第137和169位调控。进一步研究发现:SOC1^(V77K)、SOC1^(P81K)、SOC1^(K108V)、SOC1^(R109L)和SOC1^(C137K)突变体均能与AGL24相互作用;但SOC1^(V77K)、SOC1^(P81K)、SOC1^(K108V)和SOC1^(R109L)突变体与AGL24的作用强度均显著低于SOC1/AGL24,而SOC1^(C137K)突变体与AGL24的作用显著高于SOC1/AGL24。说明SOC1/AGL24的作用强度能够被SOC1蛋白K域第77、81、108、109位负调控或者第137位正调控。这为利用氨基酸位点调节SOC1/AGL24的深入研究及其开花时间分子调控奠定了基础。; 谢婷谷慧英江为马关鹏陈娇王志敏宋明汤青林; 关键词：芥菜酵母双杂交

芥菜AGL18家族成员与开花整合子SOC1的互作分析被引量：5: 2017年; 为阐明芥菜开花抑制因子AGL18与开花整合子SOC1间的互作调控机制,在芥菜‘QJ’的开花期克隆了AGL18-1,幼苗期克隆了AGL18-2和AGL18-3,它们分别编码257、257和258个氨基酸,为AGL18家族的3个成员。序列比对表明,芥菜AGL18家族成员与十字花科芜菁和油菜同源性均高达90%。酵母双杂交和BiFC试验表明:芥菜AGL18-1、AGL18-2和AGL18-3蛋白与SOC1不会发生蛋白相互作用。酵母单杂交和Dual-Glo~ Luciferase试验表明:AGL18-1、AGL18-2和AGL18-3中仅有花期AGL18-1蛋白与SOC1启动子间存在互作。为进一步筛选AGL18-1/SOC1的互作区域,分别截取了AGL18-1蛋白的M域和IKC域,发现仅M域与SOC1启动子存在相互作用,说明M域是介导花期AGL18-1蛋白与SOC1启动子互作的关键区域。这为深入研究AGL18与SOC1互作的分子机制及其对开花时间的调控奠定了基础。; 李朝闯马关鹏谢婷陈娇王志敏宋明汤青林; 关键词：芥菜相互作用

芥菜开花调控蛋白SVP与FLC酵母表达载体的构建及其相互作用研究被引量：14: 2012年; 为深入研究芥菜开花信号整合子的两个核心调节因子SHORT VEGETATIVE PHASE(SVP)与FLOWERING LOCUS C(FLC)相互作用的分子机理,通过PCR扩增,从芥菜材料‘QJ’中分别克隆含EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切位点的SVP和FLC编码区全长,并利用酵母双杂交体系,将FLC与GAL4报告基因DNA激活域融合(pGADT7FLC),SVP与GAL4报告基因DNA结合域融合(pGBKT7SVP)。两种重组质粒分别转化酵母Y187和Y2HGold后未出现自激活和毒性现象。融合的二倍体酵母(pGADT7FLC×pGBKT7SVP)能在选择性固体培养基QDO/X/A(SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal/AbA)上生长,并且菌落呈蓝色。将诱饵质粒(pGBKT7SVP)与猎物质粒(pGADT7FLC)载体互换(pGADT7SVP、pGBKT7FLC),再次转化酵母后仍能融合成二倍体酵母(pGADT7SVP×pGBKT7FLC),并同时激活报告基因AUR1-C、HIS3、ADE2、MEL1,由此表明SVP与FLC蛋白能够相互结合。; 汤青林李念祖丁宁陈竹睿宋明王志敏; 关键词：芥菜 SVP FLC 酵母双杂交

甘蓝抽薹开花抑制因子FLC与SVP体外表达及相互作用被引量：7: 2013年; 甘蓝抽薹开花抑制因子FLC与SVP可能存在相互作用,从而调节开花时间。为进一步的验证该相互作用,以甘蓝‘ZQ’为材料,扩增了594 bp的FLC cDNA和726 bp的SVP cDNA序列,它们分别编码197和241个氨基酸,且均属MIKC型蛋白。NCBI比对发现FLC与BoFLC3同源性高达98%,SVP与BoSVP-a同源性高达99%。将甘蓝FLC和SVP分别与原核表达载体pET43.1a融合,构建重组质粒pET43.1a-FLC、pET43.1a-SVP,并转化宿主菌大肠杆菌BL21,均能够在体外表达目的蛋白。利用免疫共沉淀的原理及pET43.1a-FLC、pET43.1a-SVP融合蛋白序列中的6×His标签能与Ni+结合的特点,结合SDSPAGE,检测到体外表达蛋白FLC与SVP能相互作用并形成复合体,这为深入研究FLC与SVP互作机理及探讨其与抽薹开花因子的相互作用提供了理论依据和技术基础。; 杨朴丽张丹华刘智宇许俊强王志敏汤青林宋明; 关键词：甘蓝 FLC SVP 体外表达蛋白质相互作用

拟南芥花分生组织决定基因AGL24对花发育的影响: 2014年; AGAMOUS-LIKE 24(AGL24)基因编码MADS蛋白,在植物花发育的不同时期发挥着重要的作用。综述了AGL24如何通过和其他花分生组织决定基因的相互作用来影响拟南芥花的发育,调节开花时间,这将有助于人们对开花基因调控网络有更进一步的认识,能够在生产上有效的调控开花时间,从而为植物育种提供借鉴。; 江为谷慧英王志敏宋明汤青林; 关键词：拟南芥花发育

芥菜开花调控因子SVP与FLC蛋白互作的结构域筛选与鉴定被引量：7: 2012年; 为阐明芥菜开花路径核心调节子SVP与FLC相互作用的结构域，从酵母重组质粒pGADT7SVP、pGBKT7FLC分别亚克隆了5个SVP截短体（SVPl～5）和5个FLC截短体（FLCl～5）。SVPI一5与FLCl～5编码蛋白的结构域均分别为MI、MIK、K、IKC和KC。利用酵母双杂交体系，分别构建酵母猎物质粒pGADT7SVPl—5与诱饵质粒pGBKT7FLCl～5，并转化对应的酵母Y187、Y2HGold菌。酵母转化子Y187[pGADT7SVP2～5]能与Y2HGold[-pGBKT7FLC]融合，并可在选择性固体培养基QDO／X／A上长出蓝色菌落，表明FLC能与截短体蛋白SVP2～5异源结合，SVP的K域（SVP3）可独立作用于FLC蛋白。此外，Y187[pGADT7SVP]×Y2HGold[pGBKT7FLC2～5]也能同时激活报告基因AURl．C、HIS3、ADE2、施z，，表明FLC的K域（FLC3）也可独立作用于SVP。进一步研究发现：Y187pGADT7SVP3]xY2Ht30ld[pGBKT7FLC3]正向杂交以及Y187I-pGADT7FLC3]×Y2HGoldl-pGBKT7SVP3]载体互换后杂交均可相互作用，表明SVP的K域（SVP第96～173位氨基酸区域）与FLC的K域（FLC第114～167位氨基酸区域）能够异源结合，是介导SVP与FLC蛋白互作的关键结构域。; 汤青林李念祖宋明丁宁陈竹睿刘智宇王志敏; 关键词：芥菜 SVP FLC 酵母双杂交

长距离运输信号FT的开花调控机制被引量：1: 2012年; FLOWERING LOCUST(FT)是长距离运输信号物质,调节营养生长与生殖发育的转变,对开花调控意义重大。FT主要在叶片中表达,受光周期等多个途径调控,并以FT蛋白而非mRNA转运到顶端分生组织处,激活一系列下游基因,从而诱导开花。本文就FT基因的表达机制、FT蛋白的长距离运输、及其在顶端分生组织中诱导成花的机理等进行了综述,并结合FT的研究现状展望了未来的研究方向。; 刘智宇汤青林宋明王志敏; 关键词：FT

甘蓝LFY基因的克隆及序列分析被引量：3: 2011年; 以甘蓝ZQ启动抽薹的茎尖为材料,分别提取DNA和RNA,以两对引物扩增并序列拼接得到甘蓝LFYZQ基因DNA序列和cDNA完整编码区,长度分别为2560、1239bp,与花椰菜、拟南芥、芥菜和萝卜同源性分别达到91%、87%、86%、87%。该基因含有3个外显子(452、394、393bp)和2个内含子(514、807bp),共编码412个氨基酸,内含子剪接位点均符合经典GT-AG法则。将LFYZQ与网上公布的12种十字花科植物LFY氨基酸序列按分子进化分成两类:甘蓝LFYZQ与花椰菜以及Jonopsidium属植物Jonopsidium acaule这3个分为一类;其余10种植物分为第二大类。LFYZQ蛋白分子量为46kD,是一个不稳定的疏水蛋白,存在N-十四(烷)酰化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、酰胺化位点共4种活性位点。; 汤青林王志敏任雪松宋明王小佳; 关键词：甘蓝 LFY

芥菜开花相关基因AGL24的表达及与SOC1、SVP和FLC蛋白的互作被引量：4: 2014年; 为阐明芥菜(Brassica juncea Coss.)开花激活因子AGL24的表达特性及其在开花途径中与调节因子SOC1、SVP和FLC蛋白的互作机制,从‘青叶芥’中克隆了680 bp的AGL24基因,它编码221个氨基酸。序列分析表明:芥菜AGL24含有M、I、K和C域,分别有59、11、102和47个氨基酸,与油菜AGL24亲缘关系较近。荧光定量PCR分析发现:在低温春化途径和长日照光周期途径中,AGL24在叶片和茎尖中均有表达,营养生长期表达量较低,而生殖生长期表达量迅速增加;AGL24在光周期途径中的表达峰值要早于低温春化途径。酵母双杂交试验表明:全长AGL24与开花信号整合子SOC1蛋白能够互作,激活酵母报告基因AUR1-C、HIS3、ADE2和MEL1,在QDO/X-α-Gal/AbA平板培养基上长出蓝斑。另外,分别去掉M域后的截短体AGL24★与SOC1★也能相互作用。β–半乳糖苷酶活性检测发现:截短体杂交组合AGL24★×SOC1★的互作强度显著高于全长杂交组合AGL24×SOC1。然而全长AGL24或截短体AGL24★均不能与光周期途径核心抑制子SVP互作,也不与低温春化途径核心抑制因子FLC相互作用,说明AGL24并不是SVP或FLC的直接靶蛋白。; 江为杨修勤谷慧英鲜登宇赵夏云王志敏宋明汤青林; 关键词：芥菜酵母双杂交

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